空气沉降菌检验规范2011

1、&Prepared by/编制者：Reviewed by/审阅者：Authorized by/批准者：ALTECHALTECHALTECHDate/日期Date/日期Date/日期SCMCSCMCSCMCDate/日期Date/日期Date/日期&修订记录修订次数修订日期修订内容1.0 目的检测灌注间、微生物室空气的微生物状况。2.0 范围适用于灌注间充填系统内外、糖房及微生物室空气的微生物状况。3.0 职责微生物品控员负责空气微生物的检测4.0 设备及试剂90mm培养皿 75%酒精Plate Count Agar5.0 程序5.1 平皿准备5.1.1 按测试样品的数量准备好已经高温杀菌且冷却

2、了的平皿，每个测试项目加上一个平皿作对照试验，称取并配制灭菌好培养基。(具体的测试频率和数量见表1)5.1.2 将灭菌后的培养皿高温烘干，冷却后待用。5.1.3 在超净工作台内将每个培养皿中加入15ml18ml的培养基，待培养基凝固后方可取样。5.2 取样5.2.1 首先将双手用75%酒精灭菌，再将培养皿表面用75%酒精灭菌。注：喷洒酒精时，培养皿需密闭，不得将酒精进入培养皿内。5.2.2 将培养皿置于待检测地点，打开培养皿，放置相应的一段时间。注：同一点放置两个PCA平板，一个用作培养细菌，另一个作霉菌/酵母培养。在培养皿放置地点要避免人员走动引起的污染。5.2.3 将培养皿分别放在35C和

3、28C下培养。培养48小时后记录每个培养皿的菌落数。参见附表1：空气的微生物测试表6.0 参考文献6.1 本文件支持纲要文件: 微生物监控纲要。6.2 相关纲要文件： 倒平板的微生物测试。7.0 附件/记录7.1 记录： 微生物每日报告/空气落菌检验报告7.2附件：空气微生物测试频率及测试点检测地点检测频率平皿数量放置时间检测项目标准微生物实验室操作台台面每次微生物测试时每个测试项目各一个30分钟细菌总数 酵母和霉菌仅作参考，以监测环境的微生物状况无菌室桌面/地面每周一次 各130分钟细菌总数 酵母和霉菌仅作参考，以监测环境的微生物状况缓冲间桌面/地面每周一次各130分钟细菌总数 酵母和霉菌仅

4、作参考，以监测环境的微生物状况灌注间洗瓶机区域生产后每个测试项目各一个30分钟细菌总数 酵母和霉菌0cfu充填机区域生产后各130分钟细菌总数 酵母和霉菌0cfu压盖区域生产后各130分钟细菌总数 酵母和霉菌0cfu充填系统外环境（至少测3个点）生产后各130分钟细菌总数 酵母和霉菌0cfu倒盖平台每周一次各130分钟细菌总数 酵母和霉菌仅作参考，以监测环境的微生物状况吹瓶间瓶胚储藏间 （至少2个点）每周一次每个测试项目各一个30分钟细菌总数 酵母和霉菌仅作参考，以监测环境的微生物状况倒胚平台每周一次各130分钟细菌总数 酵母和霉菌仅作8参考，以监测环境的微生物状况空气输送线进灌注间前，出吹瓶

5、间后的线段 （至少2个点）每周一次各130分钟细菌总数 酵母和霉菌仅作参考，以监测环境的微生物状况玻璃器皿的清洗、包扎和干热灭菌一、目的要求：1、熟悉微生物实验所需的各种常用器皿名称和规格。2、掌握对各种器皿清洗方法。3、掌握玻璃器皿的干热灭菌操作过程 。二、材料：1、常用各种玻璃器皿。2、清洗工具和去污粉、肥皂、洗涤液。3、电热干燥箱。三、概述：为了保证实验顺利进行，要求把实验用器皿清洗干净。保持灭菌后无菌状态，需要对培养皿、吸管等进行妥善包扎。试管和三角瓶要做棉塞。这些工作看来很普通，如操作不当或不按规定要求去做，会导致实验的失败。因此应看作是微生物实验的基本操作。四、方法：（一）器皿洗涤

6、的注意事项和方法：1、任何洗涤方法，都不应对玻璃器皿有所损伤，所以不能用有腐蚀作用的化学药剂，也不能使用比玻璃硬度大的物品来擦拭玻璃器皿。2、一般新的玻璃器皿用2%的盐酸溶液浸泡数小时，用水充洗干净。3、用过的器皿应立即洗涤，有时放置太久会增加洗涤困难。4、难洗涤的器皿不要与易洗涤的器皿放在一起。有油的器皿不要与无油的器皿放在一起，否则使本来无油的器皿也沾上了油垢，浪费药剂和时间。5、强酸、强碱、琼脂等腐蚀、阻塞管道的物质不能直接倒在洗涤槽内，必须倒在废缸内。6、含有琼脂培养基的器皿，可先用小刀或铁丝将器皿中的琼脂培养基刮去，或把它们用水蒸煮，待琼脂融化后趁热倒出，然后用水洗涤。7、一般的器皿

7、都可用去污粉、肥皂或配成5%热肥皂水来清洗油质很重的器皿，应先将油层擦去。8、如果器皿沾有煤膏、焦油及树脂类的一些物质，可用浓硫酸或40%的氢氧化钠液洗，或用洗涤液浸泡。9、当器皿上沾有蜡或油漆等物质，用加热方法使之融化揩去，或用有机溶剂（苯、二甲苯、丙酮、松节油等）拭揩。10、洗涤后的器皿达到玻璃能被水均匀湿润而无条纹和水珠。11、载玻片或盖玻片可先在2%盐酸溶液中浸1小时，然后在水中冲洗23次，最后用蒸馏水洗23次，洗后烘干冷却或浸于95%酒精中保存备用。用过的载玻片或盖玻片，先擦去油垢，再放在5%肥皂水中煮10分钟后，立即用清水冲洗，以后放在洗涤液（稀释）中浸泡2小时，再用清水洗至无色为

8、止，最后用蒸馏水洗数次，干后浸于95%酒精中保存备用。12、凡遇有传染性材料的器皿，洗涤前应经高压灭菌后清洗。（二）器皿包扎为了灭菌后仍保持无菌状态，各种玻璃器皿均需包扎。1、培养皿 洗净烘干后每10套迭在一起，用牢固的纸卷成一筒，外面用绳子捆扎，以免散开，然后进行灭菌。到使用时在无菌室中才打开取出培养皿。2、吸管 洗净烘干后的吸管，在口吸的一端用尖头摄子或针塞入少许脱脂棉花，以防止菌体误吸口中，及口中的微生物吸入管而进入培养物中造成污染。塞入棉花的量要适宜，棉花不宜露在吸管口的外面，多余的棉花可用酒精灯的火焰把它烧掉。每支吸管用一条宽约45厘米，以45左右的角度螺旋形卷起来，吸管的尖端在头部

9、，吸管的另一端用剩余纸条迭打结，不使散开，标上容量。若干支吸管扎成一束，灭菌后，同样要在使用时才从吸管中间拧断纸条抽去吸管（图见下页）。3、试管和三角瓶 试管和三角瓶都要作合适的棉花塞。棉花塞的作用是起过滤作用，避免空气中的微生物进入试管或三角瓶。棉花塞的制作要求使棉花塞紧贴玻璃壁，没有皱纹和缝隙，不能过松，过紧易挤破管口和不易塞入，过松易掉落和污染。棉花塞的长度不少于管口直径的二倍，约2/3塞进管口（见下页图）。若干支管用绳子扎在一起，在棉花塞部分外包，油纸或牛皮纸再在纸外用绳扎紧。三角瓶每个单独用油纸包扎棉花塞。合格的棉塞 不合格的棉塞（三）灭菌使玻璃器皿达到无菌状态叫灭菌，玻璃器皿主要用

10、电热干燥箱进行灭菌。1、干燥箱灭菌的物品放在箱内，堆置时要留空隙勿使接触四壁，关闭箱门。2、接通电源，把箱顶的通气口适当打开，使箱内湿空气能逸出，至箱内温度达到100时关闭。3、调节温度控制器旋扭，直至箱内温度达到所需温度为止，观察温度是否衡定，若温度不够再行调节，调节完毕后不可再拨动调节旋扭和通气口，保持140160 23小时。4、切断电源，冷却到60时，才能把箱门打开，取出灭菌物品。5、将温度调节控制旋扭返回原处，并将箱顶通气口打开所有空箱，干净的玻璃器皿及其它耐热器皿等一般都可用此法灭菌。如培养基和其它不耐热的橡皮塞等不可用此法灭菌。五、实验作业：附：1、常用玻璃器皿：量筒、三角瓶、试管

11、、培养皿、漏斗、玻棒、吸管、防水油纸2、洗涤液：浓配方：重铬酸钾（工业用） 40.0克蒸馏水 160.0毫升浓硫酸（粗） 800.0毫升稀配方：重铬酸钾（工业用） 50.0克蒸馏水 850.0毫升浓硫酸（粗） 100.0毫升配法：将重铬酸钾溶解在蒸馏水中（可加热），待冷却后，再慢慢地加入浓硫酸，边加边搅拌，配好后存放备用。此液可使用很多次，每次用后倒回瓶中贮存，直至洗涤液变成青褐色时才失去效用。器皿上有大量有机质时，不可直接用洗涤液来洗涤，应尽量先行清除后再用，否则洗涤液很快会失败。洗涤液不能用手洗涤金属器皿，洗涤液有强腐蚀性，如溅于桌椅上，应立即用水冲洗，然后用碳酸钠溶液或氨水洗不锈钢手提式

12、压力蒸汽灭菌器标准操作规程1.准备工作：1.1堆放：将待消毒的物品，予以妥善包扎，顺序地相互之间留有隙地，放置在消毒桶内的筛板上，这样有利于蒸汽的穿透，提高灭菌效果。1.2加水：在主体内加入蒸馏水或离子水三升，连续使用时必须每次灭菌后补加水量，以免干热而发生重大事故。1.3密封：将消毒桶放入主体内，然后将盖上的软管插入消毒桶内，侧凸管内对正盖与主体的螺栓槽，顺序地用力均匀地将对方位的螺母旋紧，使盖与主体密合。1.4加热：将本器放在电源上，开始时，必须将放气阀推至垂直（开放）方位，使仪器内空气逸去，待见器内有较急蒸汽喷出时，应立即将摘子扳至水平（关闭）方位，随着热量的不断上升而产生的压力，则可在

13、和表上体现出来。1.5灭菌：当器内压力达到所需范围时，应随适当调低热量，使其维持恒压，同时开始按不同的物品和包装来控制其灭菌时间。1.6干燥：对医疗器械、敷料、器皿等需要迅速干燥者，可于灭菌完毕时，立即将放气阀打开，使器内之压力蒸汽迅速排出，见压力表指示针回复至零位后，稍等12分钟，然后将盖打开，继续对本器加热1015分钟即可。1.7对瓶装溶液于灭菌终了时，切勿立即排放本器内之蒸汽，否则，瓶内溶液可因压力聚变而剧烈沸腾，溢出，甚至瓶子爆破。所以应当首先将热源拔掉，从使核武器在自然冷却至压力表指针回复零位，再等数分钟打开放气阀，将盖启开。2.注意事项:2.1整个灭菌过程中，必须保证器内有足够的水

14、量。由于加热时，水分不断蒸发， 因此每消毒一次，都要重新加水，绝不允许“干热”。否则极易烧坏器身甚至引起爆炸，造成严重事故。为了安全，操作人员不得离开现场。2.2灭菌物品:2.2.1由于灭菌物品的种类、体积、密度和导热性能不同，它所需要的灭菌时间和压力也不一样。若物体的体积密度大，导热性能较差，灭菌时间可适当延长。一般来讲，要使其最内层的温度达到121；并持续一段时间，才能真正起到灭菌的作用。灭菌器所需时间和温度与压力对照表：器皿类 15分 0.105-0.14 121-126器械类 10 0.105-0.14 121-126瓶装溶液类 20-40 0.105-0.14 121-1262.2.

15、2不同类型的物品不应放在一起进行灭菌。2.2.3灭菌物品的体积不应包得太大，也不应放得过多，过紧。以免影响蒸汽透入。2.2.4不耐热的物品以及对金属有腐蚀性的物品不应放入灭菌。2.2.5未压盖的瓶装溶液，灭菌前，应用耐热橡胶塞（软木塞）将瓶口塞紧后，再用几层纱布压住瓶塞，并在瓶颈外连纱布一起用绳子固定。2.2.6灭菌开始时，一定要将器内的空气排除干净。否则压力表上的读数，将是空气和水蒸汽两者的压力之和。结果是压力虽然达到了规定的数值而温度却达不到要求。2.2.7灭菌终止后，可按照灭菌物品的不同性质和不同要求，进行快放气，慢放气和自然冷却。2.2.8如果灭菌物品不会因压力和温度骤然下降面损坏，又要求灭菌后物品要干燥的，可快放气，待压力回至“0”位后，等一分钟，即可开盖，并继续加热5-10分钟，然后取出物品，即达干燥目的。2.2.9灭菌物品是玻璃器皿，若放气过快，会引起玻璃器皿剧烈震动，温度急剧变化易使玻璃炸裂，故应慢放气。待压力表慢慢降至“0”位后，再将器盖打开少许，让器内温度逐步下降，15分钟以后