食品中菌落总数的测定实验

1、食品中菌落总数的测定实验一、实验目的：了解稀释平板计数的原理，掌握涂抹平板培养法和混合平板培养 法，认识细菌、放射菌、霉菌、的菌落特征。二、原理平板菌落计数法是将等测样品经适当稀释后，其中的微生物充分分散为单个细胞，取一定量的稀释液接种到平板上，经过培养，由每 个单细胞生长繁殖而形成的肉眼可见的菌落， 即一个单菌落应代表原 样品中的一个单细胞。统计菌落数，根据其稀释倍数和取样接种量即 可换算出样品中的含菌数。但是，由于待测样品往往不易完全分散成 单个细胞，所以，长成的一个单菌落也可能来自样品中的多个细胞。 因此平板菌落计数的结果往往偏低。为了清楚地阐述平板菌落计数的 结果，现在已倾向使用菌落形

2、成单位 (colony-forming units，cfu)而不以绝对菌落数来表示样品的活菌含量。该计数法的缺点是操作较繁，结果需要培养一段时间才能取得， 而且测定结果易受多种因素的影响，但是这种计数方法最大的优点是 可以获得活菌的信息，所以被广泛用于生物制品检验，以与食品、饮 料和水等含菌指数或污染度的检测三、试剂和材料1.仪器恒温培养箱：(36 C士 1 C, 30 C士 1 C。)均质器或振荡器无菌吸管：1 ml 0.01 ml刻度、10 ml 0.1 ml刻度或微量移液器与吸头无菌锥形瓶：容量250 ml、500 ml、无菌培养皿：直径90 mm菌落计数器2. 样品1 平板计数琼脂pl

3、ate count agar ，PCA培养基：蛋白胨 5.0 g、酵母浸膏2.5 g、葡萄糖1.0 g、琼脂15.0 g、蒸馏水1 000 ml、pH 7.0 士 0.2。将所有成分加于蒸馏水中， 煮沸溶解，调节pH分装试管或锥形瓶，121 C高压灭菌15 min。 注：用平板计数琼脂，称取 23.5 g于1 000 ml蒸馏水中，加热煮沸至完全溶解， 121 C高 压灭菌20min，冷却至4547C左右备用。2 无菌生理盐水：氯化钠NaCI 5.875g蒸馏水纯洁水500ml 称取5.875 g NaCl溶于500ml蒸馏水中，121 C高压灭菌20min。3. 器材100ml无菌水、9ml

4、无菌水、无菌平皿、天平、称样瓶、 记号笔、酒精灯等。四、操作与实验步骤1. 样品的稀释：25 gml样品+225 ml稀释液，均质。10倍系列稀释。每递增稀释一次，换用1次1 ml无菌吸管或吸头。注意吸管或吸头尖端不要触与稀释液面选择2个3个适宜稀释度 的样品匀液，各取1 ml分别参加无菌培养皿。吸取1 ml空白稀释液 作空白对照。每皿中参加15 ml20 ml平板计数琼脂培养基，并转 动平皿使其混合均匀。2. 培养：待琼脂凝固后，将平板翻转，36 士 1 C培养48 h 士 2 h。 水产品30 士 1 C培养72 h士 3 h°如果有弥漫生长的菌落时，可 在凝固后的琼脂外表覆盖一薄层琼脂培养基约 4 ml ，凝固后翻 转平板。3. 菌落计数：记录稀释倍数和相应的菌落数量。菌落计数以菌落形成单位(colony-forming units，CFU 表示。五、计算公式-O.b?2)rf式中：N样品中菌落数；刀C平板含适宜围菌落数的平板菌落数之和;n1 第一稀释度低稀释倍数平板个数；