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1、橙皮中黄酮类化合物的提取研究橙皮中黄酮类化合物的提取研究指导教师：孙卫青答 辩 人：徐江岩目目 录录 材料与方法材料与方法2前言前言3 1结论结论3 4致谢致谢3 5 结果与分析结果与分析3 3前言 1 结构与性质简介 2 生物活性 3 提取和测定方法的研究现状 4 研究现状及发展趋势 5 研究的目的和意义结构与性质简介 黄酮类化合物是植物光合作用产生的一类重要的天然有机化合物，泛指由两个苯环(A环和B环)通过三个碳链相互连接而成的一系列化合物(C6-C3-C6)。根据中央三碳的氧化程度，B环连接位置，以及三碳链是否构成环状等特点，可将主要的天然黄酮类化合物分类，分别是黄酮类、黄酮醇类、二氢黄

2、酮类、二氢黄酮醇类,大多以糖苷的形式存在。生物活性 黄酮类化合物广泛存在于牧草、水果、蔬菜和药用植物中,植物长期自又选择过程中产生的一些次级代谢产物。迄今为止,在植物中已发现近10000种结构独特的黄酮类化合物。黄酮类化合物不仅结构样多,且不同类型的还表现出了不同的生物功能和活性。主要有抗氧化自由基作用、抗炎、抗过敏、抗菌、抗病毒活性、护肝活性、黄酮类化合物和维生素C在生物学系统中存在着相互作用的关系、雌激素作用、抗癌活性。研究现状及发展趋势 国内多数研究人员停留在对黄酮类化合物、类柠檬苦素粗制品的研究上,多数公司经营HLPC纯度的黄酮类化合物或它们的改性物多是国外产品。对癌细胞有很好抵抗作用

3、的多甲氧基黄酮,价格昂贵,国内还没有纯度达标产品。从橙皮中提取的辛弗林、橙皮昔已经作为药物应用于临床；黄酮类化合物可以改善饮料的品味,橙皮普氢化后产物的甜度是蔗糖1500倍；类似于银杏黄酮、大豆黄酮的保健品也已经在国内外市场上上市。欧美、日本、等国家或地区把黄酮类化合物、类柠檬苦素在清除人体内有害自由基、杀死癌细胞的药用研究看作医学界一个热点,我国的很多大学、医院、研究所的科学工作者也己尝试这方面研究。研究的目的和意义 黄铜类化合物是一种天然的抗氧化剂，具有很高的药用价值，如抗癌、抗肿瘤、抗心脑血管疾病、消炎镇痛、免疫调节、降血糖、治疗骨质疏松、抑菌抗病毒、抗氧化、抗衰老、抗辐射等作用。黄酮类

4、化合物还在食品、化妆品、药品等行业中广泛应用。材料与方法材料与方法 （1）试验材料及药品及仪器 实验材料：橙子皮 药 品：饱和石灰水，盐酸，氢氧化钠，石油醚(30-60)，乙醚，乙醇，正丁醇，大孔树脂。 （2）试验方法 试验选定浸泡时间、pH值、固液质量体积比、超声时间四个因素来研究黄酮类化合物的溶解性。在每组试验中，用电子天平称量5份原料粉末于150ml广口玻璃瓶中，每份2.00g。然后加入饱和的石灰水调节pH值的一定体积、一定浓度的水溶液，静态浸泡，超声一段时间后，过滤。然 后 在 4000rpm 下 离 心20min ，大孔树脂吸附，取上清液于100ml容量瓶中，定容，取2mL提取液经N

5、aNO-Al(NO)3显色后，在波长 510nm下测吸光度。材料与方法材料与方法 （3）黄酮含量的测定方法 取芦丁标准液（0.115mg.ml）精确吸取0.0、0.2、0.4、0.6、0.8、1.0、1.2、1.4ml置于25ml试管中,加5%亚硝酸钠0.3 ml，放置6min,再加入10%硝酸铝0.3mL,放置6min,加入4%氢氧化钠4.0ml，加水至10ml刻度,摇匀。510nm处测定吸光值。 以吸光值（A）为纵坐标y，芦丁质量浓度为横坐标x，绘制标准曲线(见图1)。得到芦丁质量浓度x与吸光度y关系曲线的回归方程为： y=8.3437x+0.0033，R=0.9932. 材料与方法材料与

6、方法 提取液中总黄酮的含量测定：称取脱脂柑橘皮粉2.00g，提取完毕后，容量瓶定容至100ml，取2ml提取液测其吸光度，测定方法同上。 根据公式（1）计算由标准曲线换得的总黄酮的浓度，计算公式： C=y-0.00338.3437 （2） y 单因素试验或正交试验中测得的吸光度（A） 根据公式（2）计算提取液中总黄酮提取率，计算公式： W（%）=c2.00 （3） W柑橘皮总黄酮提取率（%） C由标准曲线换算得的总黄酮浓度（mg/ml）结果与分析 单因素实验 称取相同质量的橙皮粉末5份各2.00g，设定提取液体积50ml，pH值11.0，超声时间15min，浸泡时间分别为1h，3h，6h，9h

7、,12h。然后再4000rpm下离心20min，大孔树脂吸附，分别取上清液于100ml容量瓶中，定容，取2ml提取液经NaNO-Al(NO)3显色后，在波长 510nm下测吸光度。结果与分析 浸泡时间对黄酮提取液吸光度的影响结果与分析 提取液pH值对黄酮提取液吸光度的影响结果与分析 提取液体积对黄酮提取液吸光度的影响结果与分析 超声时间对黄酮提取液吸光度的影响结果与分析 正交试验 它根据正交性从全面试验中挑选出部分有代表性的点进行实验，这些点具备了齐整可比,均匀分散的特点。正交试验设计是试验优化的常用方法。所谓试验优化，是指在最优化思想的指导下，进行最优设计的一种优化方法。它从不同的优良性出发

8、，合理设计试验方案，有效控制试验干扰，科学处理试验数据，全面进行优化分析，直接实现优化目标，已成为现代优化技术的一个重要方面。本文采用3水平的L9 (34）四因素三水平的正交试验确定最佳提取工艺。结果与分析 黄酮提取工艺中的影响因素和水平结果与分析 正交试验表结果与分析 提取液pH对黄酮的提取影响最大，其次是固液质量比、浸泡时间，影响最小的是超声处理时间。既影响提取的主次因素为BCAD。最佳因素水平为A1B3C2D2,即最佳提取工艺为浸泡时间8h、提取液pH12、体积45ml、超声处理时间15min。讨论与结论 本研究以澄清石灰水为溶剂从橙皮中提取黄酮类化合物，以浸泡时间、提取液pH、固液质量比、超声处理时间为影响因素，单因素实验中各个因素的最优条件范围分别为22.5倍原料干重提取液，pH为11.0左右的石灰水，常温侵泡9h后，超声处理15min。在正交试验中优组合为，浸泡时间8h、提取液pH为11.0、提取液体积45ml、超声处理时间15min。黄酮的提取工艺影响程度为提取液pH固液质量比浸泡时间超声处理时间。优组合时，黄酮提取率最高，为3.586%。致谢 在本试验的设计、操作和论文的撰写过程中，得到