DNA的粗提取和鉴定

1、1课题课题 DNA的的粗粗提取与鉴定提取与鉴定染色体成分染色体成分蛋白质蛋白质RNA(少量少量)DNA234酶的专一性酶的专一性）高温高温DNADNA耐高温耐高温DNADNA和蛋白质对高温耐受性不同：蛋白质、和蛋白质对高温耐受性不同：蛋白质、DNADNA热稳定性不同。大多数蛋白质不能忍受热稳定性不同。大多数蛋白质不能忍受60608080的高温，而的高温，而DNADNA在在8080以上才会变性。以上才会变性。DNADNA对洗涤剂耐受性对洗涤剂耐受性 洗涤剂能够瓦解细胞膜，但对洗涤剂能够瓦解细胞膜，但对DNADNA没有影响。没有影响。洗涤剂洗涤剂51 1）不同浓度）不同浓度NaClNaCl中中DN

2、ADNA溶解度不同。溶解度不同。 2 2）DNADNA与其他细胞成分在酒精中溶解度不同，与其他细胞成分在酒精中溶解度不同，DNADNA不溶于酒精，细不溶于酒精，细胞中某些蛋白质则溶于酒精。胞中某些蛋白质则溶于酒精。3 3）DNADNA和蛋白质对酶耐受性不同：酶的专一性和蛋白质对酶耐受性不同：酶的专一性蛋白酶水解蛋蛋白酶水解蛋白质。但是对白质。但是对DNADNA没有影响。没有影响。4 4）DNADNA和蛋白质对高温耐受性不同：蛋白质、和蛋白质对高温耐受性不同：蛋白质、DNADNA热稳定性不同。热稳定性不同。大多数蛋白质不能忍受大多数蛋白质不能忍受60608080的高温，而的高温，而DNADNA在

3、在8080以上才会变以上才会变性。性。5 5）DNADNA和蛋白质对洗涤剂耐受性不同：洗涤剂能够瓦解细胞膜，和蛋白质对洗涤剂耐受性不同：洗涤剂能够瓦解细胞膜，但对但对DNADNA没有影响。没有影响。提取提取DNA的原理包括的原理包括DNA的的 两个方面两个方面 溶解性和耐受性溶解性和耐受性1.DNA的粗提取实验原理的粗提取实验原理6鸡血红细胞、白细胞中都有细胞鸡血红细胞、白细胞中都有细胞核，含大量的核，含大量的DNA,DNA,既经济又易取既经济又易取 73 3、方法与过程、方法与过程 1).1).制鸡血细胞液制鸡血细胞液0.1g/mL柠檬酸钠柠檬酸钠100mL活活鸡鲜血鸡鲜血180mL500m

4、L烧杯中，玻棒烧杯中，玻棒搅拌搅拌，离心或静置沉淀。离心或静置沉淀。离心或静置后去掉上清液离心或静置后去掉上清液血浆血浆血细胞血细胞8方法步骤方法步骤 加入物质加入物质 目的目的 1 1.制备鸡血细胞液制备鸡血细胞液 柠檬酸钠溶液柠檬酸钠溶液 2 2.提取鸡血细胞细胞核物质提取鸡血细胞细胞核物质 20 m120 m1蒸馏水（过滤：去除破裂的细胞膜和核膜等）蒸馏水（过滤：去除破裂的细胞膜和核膜等） 幻灯片 18 3 3.溶解细胞核内的溶解细胞核内的 DNADNA 2 mo12 mo1 L L 的的NaClNaCl溶液溶液4040mLmL 幻灯片 18 4 4.析出含析出含DNADNA的黏稠物的黏

5、稠物 蒸馏水蒸馏水 5 5.滤取含滤取含DNADNA的黏稠物的黏稠物 6 6.将将DNADNA的黏稠物再溶解的黏稠物再溶解 2 mol2 molL L 的的NaClNaCl溶液溶液20 mL20 mL 7 7.过滤含过滤含DNADNA的的NaCNaCl l 溶液溶液 8 8.提取含有杂质较少的提取含有杂质较少的 DNADNA 冷却的冷却的9595的酒精的酒精50 mL50 mL 幻灯片 18 A A:(1)1)向试管中加入向试管中加入2 mol2 molL L 的的NaClNaCl溶液溶液5 5mLmL (2)2)加入加入DNADNA (3)43)4 mLmL二苯胺试剂二苯胺试剂 9 9.DN

6、ADNA的鉴定的鉴定 B B:(1)(1)向试管中加入向试管中加入2mol2molL L 的的NaClNaCl溶液溶液5 5mLmL (2)4 m2)4 mL 二苯胺试剂二苯胺试剂 用多层纱布用多层纱布过滤过滤，含，含DNA的粘稠物留在纱布上。的粘稠物留在纱布上。 用两层纱布过滤用两层纱布过滤滤液中含有滤液中含有DNA。911整个实验中整个实验中加入加入“两次蒸馏水，两次蒸馏水，三次三次NaClNaCl溶液溶液，一次酒精，一次酒精”NaClNaCl酒精最好用酒精最好用95%95%的冷酒精的冷酒精; ;加蒸馏水或加入酒精用玻棒搅拌时加蒸馏水或加入酒精用玻棒搅拌时, ,动作要动作要轻缓且朝一个方向

7、轻缓且朝一个方向。保证保证DNADNA分子的完整性。分子的完整性。121.1.下图为下图为“DNADNA粗提取和鉴定粗提取和鉴定”实验的相关操作。这些操作目的正实验的相关操作。这些操作目的正确的是确的是（）A.A.是洗涤血细胞，去除血细胞表面的杂质是洗涤血细胞，去除血细胞表面的杂质B.B.是溶解是溶解DNADNA，去除不溶于酒精的杂质，去除不溶于酒精的杂质C.C.是溶解是溶解DNADNA，去除不溶于，去除不溶于2 mol/L NaCl2 mol/L NaCl溶液的杂质溶液的杂质D.D.是稀释是稀释NaClNaCl溶液，去除不溶于低浓度溶液，去除不溶于低浓度NaClNaCl溶液的杂质溶液的杂质是

8、释放核物质是释放核物质是提纯是提纯DNADNA，去除溶于酒，去除溶于酒精的杂质，精的杂质，稀释稀释NaClNaCl溶液，析出溶液，析出DNADNA。C13植物细胞植物细胞需要先用需要先用洗涤剂洗涤剂（洗发香波、沐浴液、洗洁（洗发香波、沐浴液、洗洁精等）精等）溶解细胞膜。溶解细胞膜。 洗涤剂可以瓦解细胞膜洗涤剂可以瓦解细胞膜的原因是：的原因是：洗涤液中含有十二烷基硫酸钠和洗涤液中含有十二烷基硫酸钠和碱，碱，它们可使细胞膜破裂，蛋白它们可使细胞膜破裂，蛋白质变性，使蛋白质与质变性，使蛋白质与DNADNA分离开来。分离开来。 动物细胞膜是不用试剂（动物细胞膜是不用试剂（洗涤剂）洗涤剂）破坏的，破坏的

9、，因为动物细胞膜外面没因为动物细胞膜外面没有细胞壁的保护有细胞壁的保护，放在清水中自，放在清水中自然的就会吸水而胀破，释放出其然的就会吸水而胀破，释放出其中的中的DNADNA等物质。等物质。 142.2.（20072007年高考生物试题）年高考生物试题） 在某些深海鱼中发现的抗冻蛋白基因，对提高在某些深海鱼中发现的抗冻蛋白基因，对提高农作物的抗寒能力有较好的应用价值，该基因农作物的抗寒能力有较好的应用价值，该基因可以从这些鱼的可以从这些鱼的DNADNA中扩增得到。中扩增得到。试述在提取和试述在提取和纯化纯化DNADNA时影响提纯效果的因素及其依据。（时影响提纯效果的因素及其依据。（列列举两点）

10、举两点） 选择选择NaCl溶液的合适浓度，利用溶液的合适浓度，利用DNA和其它杂质在和其它杂质在不同不同NaCl溶液中溶解溶液中溶解 度不同的特性，达到分离目的；度不同的特性，达到分离目的；加人一定量酒精，使部分蛋白质杂质溶解于酒精，加人一定量酒精，使部分蛋白质杂质溶解于酒精， 与与DNA分离；分离；加人蛋白酶，除去蛋白质杂质的干扰；加人蛋白酶，除去蛋白质杂质的干扰；控制控制DNA提取的温度，使大多数蛋白质杂质变性。提取的温度，使大多数蛋白质杂质变性。153.3.（多选）下（多选）下表是关于表是关于DNADNA粗提取与鉴定实验中所使用粗提取与鉴定实验中所使用的材料、操作及其作用的表述。正确的是

11、（的材料、操作及其作用的表述。正确的是（ ）试剂试剂操作操作作用作用A A柠檬酸钠溶液柠檬酸钠溶液与鸡血混合与鸡血混合防止血液凝固防止血液凝固B B蒸馏水蒸馏水与鸡血细胞混合与鸡血细胞混合保持细胞形状保持细胞形状C C蒸馏水蒸馏水加入到溶解有加入到溶解有DNADNA的的NaClNaCl中中析出析出DNADNA丝状物丝状物D D冷却的酒精冷却的酒精加入到过滤后加入到过滤后DNADNA的的NaClNaCl中中产生特定的颜色反应产生特定的颜色反应AC164.4.实验中实验中NaClNaCl的物质的量浓度为的物质的量浓度为2 mol2 molL L和和0.14 mol0.14 molL L对对DNAD

12、NA有何影响有何影响? ?3.3.在在DNADNA的粗提取实验过程中，两次向烧杯中的粗提取实验过程中，两次向烧杯中加入蒸馏水的作用是加入蒸馏水的作用是( )( )。A.A.稀释血液、冲洗样品稀释血液、冲洗样品B.B.使血细胞破裂、降低使血细胞破裂、降低NaClNaCl浓度使浓度使DNADNA析出析出C.C.使血细胞破裂、增大使血细胞破裂、增大DNADNA溶解量溶解量 D.D.使血细胞破裂、提取含杂质较少的使血细胞破裂、提取含杂质较少的DNADNAB答：前者是答：前者是溶解溶解DNADNA，后者是使，后者是使DNADNA析出析出5.DNA5.DNA遇二苯胺遇二苯胺( (沸水浴沸水浴) )会染成会染成( ) ( ) A. A.砖红色砖红色 B.B.橘黄色橘黄色 C.C.紫色紫色 D.D.蓝色蓝色D17 6.DNA6.DNA在在 NaClNaCl溶液中的溶解度有两重性，随着溶液中的溶解度有两重性，随着 NaClNaCl溶溶液浓度的变化而变化。液浓度的变化而变化。(1)(1)请在下列浓度的请在下列浓度的 NaClNaCl溶液中，选出能使溶液中，选出能使DNADNA析出最彻析出最彻底的一种和溶解度最高的一种底的一种和溶解度最高的一种_。 A A0.14 mol/L0.14 mol/LB B2 mol/L2 mol/L C C0.15 mol