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文档简介

1、专题1基因工程1 .基因工程又叫做 或。就是按照人们的愿望,把一种生物的某 种基因提取出来,加以 ,然后放到另一种生物的细胞里, 改造生物 的。2 .基因工程是在 上进行的设计施工, 基本工具是:基因的剪刀(分子手术刀) ;基因的针线(分子缝合针)一一;基因的 ( 分子运输 车)。3 .限制酶(又称) :主要从 中分离纯化出来;能够识别双链DNA分子的某种 ,并且使每一条链中 的两个核甘酸之间的 断 开,因此具有 。 DNA分子经限制酶切割产生的DNA片段末端有 和两种形式。例如,EcoRI限制酶识别的序列是 ,在 之间切割;Sma!限制酶识别的序列是,在 之间切割。4 . DNA连接酶的作用

2、是将 拼接(即形成,注意不是黏合或形成氢 键)成新的DNA分子(注意DNA聚合酶只能在有 的条件下将 加到 DN*段的 ,形成磷酸二酯键);E-coli DNA1接酶来源于 ,只能将双链 DNA片段 之间连接起来;而 T4 DNA连接酶能缝合 ,但连接平末端的之间的效率。5 .最常用的载体是 ,它是一种 、结构简单、独立于细菌 之 外,并 的很小的。6 .真正被用作载体的质粒都是在天然质粒的基础上进行过 的,其上有一个至多 个,供外源DNA片段(基因)插入其中;还有特殊的, 供。7 .重组质粒进入受体细胞后,在细胞中进行自我复制(具有),或 上,随染色体DNA进行同步复制;在基因工程中使用的载

3、体除质粒外, 还、 等。8 .基因工程的基本操作流程: 一 一9 .目的基因主要是指 ,也可以是一些 ;目的基因可以从自然界中 已有的物种中分离出来 (,建立 从中获取或通过 获取,-般只适合于 ,真核基因因为含有 不适合该类方法),也可以用人工的方 法合成(,通过 mRNA转录彳#到 cDNA然后建立 从中获取或通过 获取;如果基因比较小且核甘酸序列已知,也可以通过 用化学方法直接人 工合成)。10 .基因组文库的构建: 将某种生物体内的 DNA 提取出来,选用适当的 ,将DNA切成一定范围大小的DNA片段,然后,将这些DNA片段分别与 连接起来,导入中储存,每个受体细菌都含有了一段不同的D

4、NA片段,而这个群体包含了这种生物的。11 .CDNA文库的构建:用某种生物发育的 通过 产生_(_ 互补DNA)片段,与 连接后储存在一个受体菌群中。12 . cDNAC库属于 。与基因组文库比较:cDNAC库较小,,仅含有某种生 物的 , ;而基因组文库 较 大,,含有某种生物的, 仅。13 . PCR是 的缩写,它是一项利用 的原理在生物的核酸合成技术。反应中需要加入的物质有、 (的DNA聚合酶)、(dATP 、dTTP、dGTP dCTP)等;基本过程是:加热至9095 c使 一冷却至 5560 c使 一加热至 7075 c 使,如此反复进行,目的基因以(2n)形式扩增。14 .是基因

5、工程的核心,其目的是 , 并且可以,同时,使目的基因能够 。15 .基因表达载体的组成:、。 启动子是一段有特殊结构的 ,位于基因的 ,是 的部位,能驱动基因 ;终止子也是一段有特殊结构的 ,位于基因的 , 其作用是使 下来;标记基因的作用是为了,从而将含有目的基因的细胞 出来,最常用的标 记基因是。16 .将目的基因导入植物细胞最常用的方法是 ,另外还有 和17 .农杆菌是一种生活在土壤中的 ,能在自然条件下感染 ,而 对大多数没有感染能力。当植物体受到损伤,伤口处的细胞会分泌大量的 , 吸引农杆菌移向这些细胞, 这时农杆菌中的 上的 ( 可转移的DNA)可转移 至受体细胞,并且 到受体细胞

6、 上。18 .农杆菌转化法是将目的基因插入到 上,通过农杆菌的 作用,使目的基 因进入植物细胞并插入到 植物细胞中 上,使目的基因的遗传特性得以;基因枪法是利用压缩气体产生的动力,将包裹在金属颗粒表面的 打入受体细胞中,使目的基因与其整合并表达的方法, 是 常用的一种基因转化 方法;花粉管通道法是在植物受粉后, ,剪去,然后滴 加,使目的基因借助 进入受体细胞。19 .将目的基因导入动物细胞最常用的方法是 ,基本的操作程序是:提纯含有 目的基因的表达载体一从雌性动物体内取出卵 _(体内受精或体外受精均可以 )一采用显微注 射仪进行 一早期胚胎培养一胚胎移植 (哺乳动物)。20 .原核生物通常作

7、为受体细胞的原因是 、等, 其中以 应用最为广泛。21 .将目的基因导入大肠杆菌(细菌)最常用的方法是 :先用 处理细胞,使 细胞处于一种能吸收周围环境中 DNA分子的生理状态,即处于 ,再将 溶于缓冲液中与 混合。22 .目的基因导入受体细胞后,是否可以 其遗传特性,需要通过:首先要检测转基因生物的染色体DNA上,检测方法是采 用,即在 上用等作标记,以此作为 ,使探针与待检基因组 DNA交,如果显示出 , 则表明目的基因已插入染色体 DNA中;(2)其次要检测目的基因,检测方法也是采 用,同样用 作,但是与 杂交;最后要检测目的基因,检测方法是从转基因生物中提 取,用相应的 进行,若 出现

8、,则表明目的基因已形成蛋白质产品;(4)有时还要进行 的鉴定,如需要做抗虫或抗病的 ,又如需要将基 因工程产品与天然产品的功能进行 。23 .用于转基因植物的抗虫基因有 、等。Bt毒蛋白基因是从 中分离出来的,Bt毒蛋白 被害虫的消化酶降解后会成为 ,但对哺乳动物无毒害作用。24 .用于转基因植物的抗病基因有 ( 抗病毒)、( 抗 病毒)、( 抗真菌)、( 抗真菌)等。25 .用于转基因植物的抗逆基因有(抗盐碱和抗干旱)、(抗寒)、抗除草剂基因等。26 . ( 乳房生物反应器)技术:将 与 等调控组件,通过 等方法,导入哺乳动物的 中,然后,将受精卵送入母体内,使其生长发育成转基因动物。27

9、. 治疗遗传病的最有效的手段,它通过把 导入病人体内,使该基因的 表达产物发挥功能, 从而达到治疗疾病的目的。用于基因治疗的基因有三类: 、和。28 . 是指以 作为基础,通过或,对现有 进行改造,或制造一种新的,以满足人类的生产和生活的需求。(基因工程在原则上只能生产自然界 蛋白质)29 .蛋白质工程的基本途径:一 一 一。(天然蛋白质合成的过程: 一 )30 .蛋白质工程成功难度很大,主要是因为蛋白质发挥功能必须依赖于正确 的,而目前科学家对大多数蛋白质的 的了解还很不够。附:部分标准答案 专题 1 基因工程1 基因拼接技术DNA 重组技术。修饰改造,定向地, 遗传性状。2 . DNA分子

10、水平限制酶; DNA连接酶;运载体一一质粒、噬菌体和动植物病毒等。3 限制性核酸内切酶原核生物特定核苷酸序列 特定部位磷酸二酯键 专一性 黏性末端平末端 -GAATTC- G 与 A -CCCGGG- C 与 G4 DNA 片段磷酸二酯键 单个核苷酸末端 大肠杆菌互补的黏性末端两种末端,比较低。5 .质粒 裸露的 拟核DNA 具有自我复制能力双链环状DN册子。6 .人工改造限制酶切割位点标记基因,重组DNA的鉴定和选择。7 .复制原点整合到染色体DNA入噬菌体的衍生物、动植物病毒。8 .获取目的基因-构建基因表达载体-将目的基因导入受体细胞-目的基因的检测与鉴定。9 编码蛋白质的基因具有调控作

11、用的因子直接分离基因组文库PCR 原核基因内含子 人工合成 cDNA 文库 PCR DNA 合成仪 。10全部限制酶 载体 受体菌的群体所有基因。11 某个时期的 mRNA 反转录 cDNA 载体12 部分基因文库无启动子、 内含子 部分基因,可以进行物种间的基因交流; 有启动子、内含子, 全部基因 部分基因可以进行物种间的基因交流。13 .聚合酶链式反应DNA双链复制体外复制特定 DNA片段模板DNA DNMI物、Taq酶(耐高温dNTP DNA解链-引物结合到互补DNA1- Taq聚合酶从引物起始进行互补 链的合成, 指数。14基因表达载体的构建使目的基因在受体细胞中稳定存在 遗传给下一代

12、表达和发挥作用。15.启动子、目的基因、终止子、标记基因、复制原点DNA 片段 首端RNA聚合酶识别和结合转录出 mRNA DNA 片段 尾端 转录在所需要的地方停止鉴别受体细胞中是否含有目的基因 筛选 抗生素抗性基因。16农杆菌转化法基因枪法 花粉管通道法。17原核生物双子叶植物和裸子植物 单子叶植物酚类化合物 Ti 质粒 T-DNA 整合染色体的DNA±18 Ti 质粒的 T-DNA 转化 染色体的 DNA 稳定维持和表达 表达载体 DNA 单子叶植物 花粉形成的花粉管还未愈合前柱头 重组 DNA 花粉管通道 。19显微注射技术卵 显微注射 。20繁殖快、多为单细胞、遗传物质相对

13、较少大肠杆菌 。21.转化法Ca 2+感受态重组表达载体DNA分子感受态细胞。22稳定维持和表达检测与鉴定:(1)是否插入了目的基因 DNA 分子杂交技术含有目的基因的DNA片段放射性同位素 探针 杂交带(2) 是否转录出了 mRNA 核酸分子杂交技术放射性同位素标记的目的基因 探针mRNA;(3) 是否翻译成蛋白质 蛋白质 抗体 抗原抗体杂交杂交带(4) 个体生物学水平接种实验活性比较。23 Bt 毒蛋白基因、蛋白酶抑制剂基因、淀粉酶抑制剂基因、植物凝集素基因 苏云金芽 孢杆菌有毒的多肽。24病毒外壳蛋白基因病毒的复制酶基因 几丁质酶基因 抗毒素合成基因25调节细胞渗透压的基因鱼的抗冻蛋白基因 。26 乳腺生物反应器 目的

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