免疫学检验基础理论知识

1、免疫学检验基础理论知识免疫学检验基础理论知识抗原: 凡能刺激机体产生抗体和致敏淋巴细胞并能与之发生特异性结合的物质称为抗原(antigen、Ag)。抗原物质具有免疫原性与反响原性。 免疫原性抗原作用: 指能刺激机体产生抗体和致敏淋巴细胞的特性。 反响原性抗原反响: 指抗原与相应的抗体或致敏淋巴细胞发生反响的特性。完全抗原与半抗原 完全抗原: 具有免疫原性与反响原性的物质，多为分子量大于5000的蛋白质。 半抗原: 只具有反响原性而无免疫原性的物质，一般为小分子化合物，例如某些激素、药物等。抗体: 机体受到抗原物质刺激后，由B淋巴细胞转化为浆细胞产生的，能与相应抗原发生特异性结合的免疫球蛋白(I

2、g)。抗体的根本构造 所有种类Ig的单体分子构造都是相似的，即由两条一样的重链(H)和两条一样的轻链(L)四条肽链构成的“Y字形的分子。 IgM:分子量最大的免疫球蛋白，抗原刺激诱导的体液免疫应答中最先产生的抗体。在感染过程中血清IgM水平升高，说明有近期感染，有助于早期诊断。IgG:血清中含量最高，是再次免疫应答的主要抗体，是唯一能够通过胎盘的抗体。感染后出现时间较晚，持续时间较长，是既往感染的标志。IgA:分为血清型和分泌型，分泌型IgA是参与粘膜局部免疫的主要抗体。IgE:血清中含量最少，介导1型超敏反响。IgD:血清型IgD作用尚不清楚。定义：抗原与相应抗体之间的特异性结合反响。原理：

3、抗原抗体的特异性结合是基于抗原决定簇与抗体超变区分子间的构造互补性和亲和性。这种特性是有抗原、抗体分子空间构型所决定的。 特异性 空间构造互补，如同钥匙和锁，一一对应。 共同抗原：物质外表往往不止一种抗原决定簇，两种不同抗原物质可具有局部一样或类似构造的抗原决定簇。能与彼此相应的抗体出现穿插反响。 比例性比例性 指抗原与抗体特异性结合反响时，生指抗原与抗体特异性结合反响时，生成肉眼可见结合物的量与反响物浓度成肉眼可见结合物的量与反响物浓度的关系，只有当二者浓度比例适当是，的关系，只有当二者浓度比例适当是，才出现可见反响。才出现可见反响。 钩状效应倒钩：抗体过量钩状效应倒钩：抗体过量- -前带，

4、前带，抗原过量抗原过量- -后带。后带。 可逆性可逆性 抗原与相应抗体结合复合物后，在一定条件下又可解离为游离抗原与抗体的特性称为抗原抗体结合的可逆性。 复合物解离因素：1.抗体对相应抗原的亲和力。2.环境因素。PH值，离子强度。 反响物自身因素反响物自身因素抗原：理化性状，外表抗原决定簇的种抗原：理化性状，外表抗原决定簇的种类和数目类和数目抗体：抗体： 来源：来源不同动物的免疫血清，等来源：来源不同动物的免疫血清，等价带宽窄不同。价带宽窄不同。 浓度：与相应抗原浓度适宜才易出浓度：与相应抗原浓度适宜才易出现可见反响。现可见反响。 特异性与亲和力：早期获得的抗血特异性与亲和力：早期获得的抗血清

5、亲和力低，特异性好；后期获得的清亲和力低，特异性好；后期获得的往往亲和力高。诊断试剂尽可能选高往往亲和力高。诊断试剂尽可能选高特异性、高亲和力的抗体。才能提高特异性、高亲和力的抗体。才能提高试验的可靠性。试验的可靠性。 反响环境条件反响环境条件电解质电解质 反响必须要有电解质参与。反响必须要有电解质参与。酸碱度酸碱度 一般以一般以pH6pH69 9为易为易温度温度 一般以一般以15 15 40 40，最适温度为，最适温度为37 37 。范围内温度越高反响速度越快，。范围内温度越高反响速度越快，温度越低反响越慢但结合的越结实。温度越低反响越慢但结合的越结实。56 56 会导致解离甚至变性。会导致

6、解离甚至变性。双抗体夹心法 适用于检测分子中具有至少两个抗原决定簇的多价抗原，而不能用于小分子半抗原。 利用连接在固相载体上的抗体和酶标抗体可分别与样品中被检测抗原分子上的两个不同抗原决定簇结合，形成固相抗体-抗原-酶标抗体免疫复合物。151、抗体包 被于载体外表3、加酶标抗体 与抗原结合4、加酶作用的底物产生颜色2、加待检物抗原与抗体结合4、加酶作用的底物 不产生颜色洗涤洗涤洗涤洗涤1、抗体包 被于载体外表2、加待检物无抗 原与抗体结合3、加酶标抗体 无抗原结合+ +- -Y YY YY YE EY YE EY YE EY YY YE EY YE EY YE EY YY YY YY YE E

7、Y YE EY YE EY YY YY YY YY YY YY YY YY YY YY YY YY YY YY YY YY YY Y双抗体夹心法测抗原双抗体夹心法测抗原间接法 此法是测抗体的常用方法。将抗原连接在固相载体上，样本中待检抗体与之结合成 固相抗原-待检抗体复合物，再用酶标二抗针对待检抗体的抗体与固相复合物中的抗体结合。171、抗原吸附于载体外表2、加待检物无抗体与抗原结合3、加酶标抗Ig与抗体结合4、加酶作用的底物产生颜色1、抗体吸附于载体外表2、加待检物有抗体与抗原结合3、加酶标的抗Ig抗体4、加酶作用的底物不产生颜色洗涤洗涤洗涤洗涤- -Y YE EY YY YY YE EY

8、YE EY YY YY YE EY YY YE EY YY YE EY YY YE EY YY YE EY YE EY Y间接法测抗体间接法测抗体竞争法 竞争法可用于抗原和半抗原的定量测定，也可对抗体进展测定。 酶标记抗原抗体与待测品中的抗原抗体具有一样的与固相抗体结合的能力；反响体系中，固相抗体抗原和酶标抗原抗体是固定限量，且前者的结合位点少于酶标记与待测抗原抗体分子数量和；反响后，结合于固相载体上的复合物中被测定的酶标抗原抗体的量与待测品中的抗原抗体的浓度成反比。19洗涤洗涤+ +- -Y YY YY YY YY YY YE EY YY YE EY YY YY YY YE EY YY YE

9、 EY YE EY YE EY YE E2 2、加待检物、加待检物抗原与酶标抗抗原与酶标抗原竞争与抗体原竞争与抗体结合结合3 3、加酶作用、加酶作用的底物不显色的底物不显色或显色弱或显色弱3 3、加酶作用、加酶作用的底物显色的底物显色1 1、抗体包、抗体包被于载体外表被于载体外表1 1、抗体包、抗体包被于载体外表被于载体外表2 2、加待测物、加待测物和酶标抗原，和酶标抗原，酶标抗原与抗酶标抗原与抗体结合体结合Y YE E竞争法测抗原竞争法测抗原捕获法 最常用于IgM抗体检测。先将针对IgM的第二抗体连接于固相载体，用以结合样品中所有的IgM抗体，然后参加特异抗原与待检IgM抗体结合；再参加抗原

10、特异的梅标抗体，最后形成固相二抗- IgM-抗原-梅标抗体复合物。21洗涤洗涤洗涤洗涤+ +- -E EY YE EY YE EY YE EY YE EY YY YY YY YY Y Y YY Y 1 1、固相化抗人、固相化抗人IgMIgMY YY YY YY YY YY YY YY YY YY YY YY YY YY YY YY YY YY YY YY YY YY YY YY YY YY YY YY YY YY YY YY YY YY YY YY Y1 1、固相化抗人、固相化抗人IgMIgM2 2、加待测物、加待测物特异性特异性IgMIgM与与非特异性非特异性IgMIgM和抗人和抗人IgMIgM结合结合3 3、加特异性、加特异性抗原，与特异抗原，与特异性抗体结合性抗体结合4 4、加酶标抗体、加酶标抗体与特异性抗原结与特异性抗原结合，加底物显色