宫颈癌基因EEmRNA南阳讲课

1、 与与 HPV癌基因E6/E7mRNA 主要内容 报告解读、处理建议1 临床意义、适用范围 32 主要内容1 HPV癌基因E6/E7mRNA 1v2.型别：120多种（依据L1 DNA）v1.结构： 外壳蛋白：L1蛋白（72个五聚体）， L2蛋白（12个）。 内部遗传物质：闭环、双链DNA 。 （不含 RNA）v3.分类：依据生物特性、致癌性 高危型HPV(HR-HPV)：16、18、31、33、35、39、45、51、52、56、58、59、68、66 低危型HPV（LR-HPV）：6、11、42、43、44 什么是E6/E7 mRNA ?L1: 主要衣壳蛋白，是疫苗的主要成分。 L2: 次

2、要衣壳蛋白，是市售抗体的主要识别位点。E4：结合并破坏细胞角蛋白网，形成挖空细胞的外观。E2：负性调节E6和E7，维持凋亡和细胞周期的调控。通常在病毒发生整合时失活。HPV 的主要致癌基因E6通过抑制p53而阻断凋亡E7 通过抑制pRB使细胞周期失控。XHPV的基因片段及功能E6/E7 mRNA ?高危亚型HPV感染宫颈上皮细胞，将产生两种癌蛋白：E6和E7蛋白。癌蛋白可与宿主细胞的细胞周期调节蛋白（抑癌蛋白如P53、RB等）相结合，导致细胞周期控制失常，发生癌变。 （人民卫生出版社、妇产科学、2004年1月第6版）致癌原理 E6/E7 mRNA与宫颈癌的关系E6、E7mRNA-是宫颈病变是宫

3、颈病变开始和进展开始和进展的必由之的必由之路路!HPV感染在宫颈细胞内的表达过程基因改变早于细胞改变基因改变早于细胞改变E6/E7mRNA： 是致癌基因E6/E7表达的直接产物； 是最终致癌物-E6/E7癌蛋白合成的模板； 是宫颈病变开始和进展的必要条件！ 小结小结 主要内容1 E6/E7mRNA的临床意义与适用范围 2高危的HPV感染宫颈上皮细胞癌基因E6、E7 mRNAE6、E7 癌蛋白E6、E7 癌蛋白与抑癌蛋白P53、RB等结合宫颈细胞CIN或癌变癌基因E6、E7 DNAHPV病毒学检测病毒癌基因学检测细胞形态学检测HPV L1 DNAHPV L1 mRNAHPV L1 蛋白HPV复制

4、繁殖HPV感染后演变路径及宫颈癌筛查&诊断方法应用检测方法检测方法检测靶标检测靶标主要检测意义主要检测意义巴氏涂片巴氏涂片宫颈上皮细胞宫颈上皮细胞提示提示宫颈细胞宫颈细胞已发生的病变情况，筛查的基本已发生的病变情况，筛查的基本方法。主要用于评估现阶段宫颈（病变）情况。方法。主要用于评估现阶段宫颈（病变）情况。液基细胞学液基细胞学（TCTTCT）HPVHPV病毒学病毒学HPVHPV病毒病毒DNADNA提示是否有提示是否有病毒病毒感染。主要用于评估现阶段宫感染。主要用于评估现阶段宫颈是否有病毒感染。颈是否有病毒感染。癌基因癌基因E6/E7 mRNA检测检测病毒癌基因病毒癌基因E6/E7 mRNAE

5、6/E7 mRNA提示病毒提示病毒癌基因已经癌基因已经转录表达转录表达。可用于了解人体宫颈细胞或组织癌变的可用于了解人体宫颈细胞或组织癌变的发发展趋势展趋势。阴道镜检阴道镜检宫颈内表面宫颈内表面提示已经发展到提示已经发展到宫颈表面宫颈表面的病变及其位置。主的病变及其位置。主要是更直接辅助检查现阶段宫颈（病变）情况。要是更直接辅助检查现阶段宫颈（病变）情况。宫颈活检宫颈活检宫颈组织宫颈组织提示提示宫颈组织宫颈组织病变情况，确诊金标准。病变情况，确诊金标准。 临床意义-特异性强、阳性预测值高正常宫颈感染HPV轻度宫颈上皮内瘤变(CIN )中度宫颈上皮内瘤变(CIN )高度宫颈上皮内瘤变(CIN )

6、原位癌浸润癌依靠免疫力80%自行消退06-18 个月至少2年后5-10 年后一过性感染持续性感染62%转为正常16%进一步进展22%维持原状54%转为正常30%进一步进展16%维持原状100%HPV感染致宫颈癌模式图什么样的感染者会进一步进展呢？哪种检测方法能提示？什么样的感染者会进一步进展呢？哪种检测方法能提示？E6/E7mRNA检测 1、发现已感染HPV，且癌基因已经表达的宫颈病变高风险 者, 特异性强、阳性预测值高； 2、弥补：细胞学检测敏感性； HPV检测特异性； 阴道镜/活检的漏检等。 3、预测发展趋势，指导后续治疗、随访。提供关键的癌变信息，治疗更提供关键的癌变信息，治疗更及时及时

7、，预防更，预防更有效有效！ 小 结 适用范围（不局限于30岁以上人群）： 1、筛查：细胞学+ E6/E7 mRNA检测； 2、辅助诊断： （1）细胞学+E6/E7 mRNA检测； （2）若HPV（+） E6/E7 mRNA检测； （3）病理组织+ E6/E7 mRNA检测。 3、手术后及随访时: 组织学+癌基因E6/E7 mRNA； 细胞学+ E6/E7 mRNA检测。v TCT结果正常的女性，在正常筛查间隔内一定是安全的吗？v TCT结果：ASCUS，如何评估风险？ 直接镜检&活检：过度检查？ 随访：漏诊？ v 30岁以下妇女，感染率高，清除率高，HPV（+）率高，该如何评估风险？筛查 常见

8、问题. .Intracellular Human Papillomavirus E6, E7 mRNA Quantification Predicts CIN 2 + in Cervical Biopsies Better Than Papanicolaou Screening for Women Regardless of Age. Arch Pathol Lab Med. 2012；136:956-960.E6/E7 mRNA检测； 联合TCT筛查 基因改变早于细胞形态改变，辅助提高细胞学敏感性，ASC-US分流 30岁以下女性筛查效率。 筛查应用v CIN1风险评估？随访时间确定。v C

9、INII-III的患者，手术方式 术后随访。 特殊病例：未生育女性、妊娠女性？ 随访间隔？ 辅助诊断 常见问题：正常宫颈感染HPV轻度宫颈上皮内瘤变(CIN )中度宫颈上皮内瘤变(CIN )高度宫颈上皮内瘤变(CIN )原位癌浸润癌依靠免疫力80%自行消退06-18 个月至少2年后5-10 年后一过性感染持续性感染62%转为正常16%进一步进展22%维持原状54%转为正常30%进一步进展16%维持原状100%HPV感染致宫颈癌模式图预测性能预测性能ASCUS & LSILASCUS & LSIL者，者，2年内跟踪诊断至年内跟踪诊断至CIN2+女性：女性：HPV HPV E6E6、E7 mRNA

10、作为监测手段：检测呈阳性数量约是阴性数量的作为监测手段：检测呈阳性数量约是阴性数量的69.8倍。倍。HPV HPV DNADNA作为监测手段：检测呈阳性数量约是阴性数量的作为监测手段：检测呈阳性数量约是阴性数量的5.7倍。倍。Tor Molden etc. Predicting CIN2+ when detecting HPV mRNA and DNA by PreTect HPV-Proofer and consensus PCR: a 2-year follow-up of women with ASCUS or LSIL Pap smear. International Journal

11、of Cancer. Int. J. Cancer, 2005,114: 973976.E6/E7 mRNA检测 辅助活检后人群的后续处理，提高诊断水平：n 组织学CIN1，建议采用E6/E7mRNA检测： E6/E7mRNA检测阳性，建议缩短随访时间； E6/E7mRNA检测阴性，建议根据医嘱随访。n 组织学CIN2+，建议采用E6/E7mRNA检测： E6/E7mRNA检测阳性，建议积极治疗； E6/E7mRNA检测阴性，建议保守治疗，密切随访。 辅助诊断应用v 手术后残端是否会残留病毒？复发的可能性多大？ v 术后随访间隔是多久，确定依据是什么？ 术后随访 常见问题：Detection

12、of Residual/Recurrent Cervical Detection of Residual/Recurrent Cervical Disease after Successful LEEP Conization: the Disease after Successful LEEP Conization: the Possible Role of mRNA-HPV Test.Possible Role of mRNA-HPV Test.LeepLeep锥切术成功后检测剩余锥切术成功后检测剩余/ /复发的宫颈疾病：复发的宫颈疾病：mRNA HPVmRNA HPV检测可能发挥的作检测可

13、能发挥的作用。用。14%-70%的阳性切缘患者的阳性切缘患者5-15%的干净切缘患者的干净切缘患者 存在复发宫颈疾病的风险。存在复发宫颈疾病的风险。E6/E7E6/E7mRNAmRNA检测的随访检测的随访 Detection of Residual/Recurrent Cervical Disease after Successful LEEP Conization: the Possible Role of mRNA-HPV Test. Current Pharmaceutical Design 2013,19,1450-1457. 术后，mRNA（+）比mRNA（-）复发的几率更高n=11

14、6（CIN患者经LEEP刀治疗后）E6/E7 mRNA检测，辅助术后的后续处理：n 手术后，病理组织学诊断+E6/E7mRNA检测n 术后随访，细胞学+E6/E7mRNA检测。 术后随访应用病例分析-30岁已婚女性 2013.12.3体检： E6/E7mRNA(+) 低度风险 TCT正常未进行干预性治疗，3个月复查 2014.3.25 细胞学：ASC-US E6/E7mRNA(+) 高度风险 术后病检结果：宫颈1点、6点慢性宫颈炎，部分区域呈湿疣性改变；12点处小灶区域CIN2LEEP3: 2012.9月，广东一家医院，一病人66岁TCT HSIL，E6、E7mRNA检测阴 性，TCT阅片老师

15、认为那个标本报告为癌都不为过，所以进行活检，但 活检结果为CIN1-2级，临床医生对活检不满意，并考虑到该病人年龄 比较大，行使锥切后活检，活检结果CIN1。1：2012.3月，河北一医院对一LEEP术后45岁病人加做E6，E7mRNA检 测，发现拷贝值为2万多，两周后重新取样检测，发现E6,E7 mRNA 检测仍有一万多拷贝，于是重新取样活检，发现切缘为CIN3级。2：2012.7月浙江余姚市一医院，一病人HPV 检测阴性，TCT检测正常， E6、E7mRNA检测一万多拷贝，主任对该检测结果质疑，对该病人进行 活检，病理结果CIN23级。病例病例 主要内容1 报告解读及处理建议 3 细胞细胞

16、学学E6E6、E7E7mRNAmRNA结果解读结果解读临床处理建议临床处理建议 正常正常-未检测到癌未检测到癌基因转录。基因转录。1年后复查细胞学和年后复查细胞学和E6/E7 mRNA。 +癌基因转录癌基因转录，未观察到，未观察到细胞形态的细胞形态的改变。改变。酌情进行阴道镜检或酌情进行阴道镜检或6个月后复查细胞学和个月后复查细胞学和E6/E7 mRNA。ASC-ASC-USUS -未检测到癌未检测到癌基因转录。基因转录。6-12个月复查细胞学和个月复查细胞学和E6/E7 mRNA。 +癌基因已经癌基因已经开始转录，开始转录，细胞形态处细胞形态处于转变期。于转变期。异常异常-癌基因此时癌基因此

17、时处于转录不处于转录不活跃状态。活跃状态。 +癌基因已经癌基因已经开始转录，开始转录，细胞形态已细胞形态已经明显改变经明显改变，处于细胞，处于细胞形态改变状形态改变状态。态。阴道镜/活检如无病变，半年后复查E6/E7 mRNA如E6/E7 mRNA（+），查细胞学细胞学ASC-US,阴道镜检如E6/E7 mRNA（-），半年后查E6/E7 mRNA+细胞学。阴道镜/活检无病变：严密随访CIN2+:相应手术治疗组织组织学学E6E6、E7E7mRNAmRNA结果解读结果解读临床处理建议临床处理建议 CIN1CIN1-未检测到癌未检测到癌基因转录。基因转录。 立即用病理标本的石蜡切片做立即用病理标本

18、的石蜡切片做E6/E7mRNA检测检测+癌基因处于癌基因处于转录活跃状转录活跃状态，进展风态，进展风险较大。险较大。1、建议用病理标本的石蜡切片做建议用病理标本的石蜡切片做E6/E7 mRNA检测，作为检测，作为 治疗的辅助指标。治疗的辅助指标。2、严格随访或进行积极处理（如冷冻、电灼的病灶处理严格随访或进行积极处理（如冷冻、电灼的病灶处理CIN2CIN2/3/3 -癌基因处于癌基因处于转录不活跃转录不活跃状态。状态。1、立即用病理标本的石蜡切片做立即用病理标本的石蜡切片做E6/E7 mRNA检测，作为检测，作为治疗的辅助指标。治疗的辅助指标。 2、临床处理请参照宫颈癌诊治指南临床处理请参照宫

19、颈癌诊治指南。3、建议术后建议术后6个月进行细胞学及个月进行细胞学及E6/E7 mRNA检测。检测。 +癌基因处于癌基因处于转录活跃状转录活跃状态，进展风态，进展风险较大。险较大。1、建议用病理标本的石蜡切片做建议用病理标本的石蜡切片做E6/E7 mRNA检测，作为检测，作为治疗的辅助指标。治疗的辅助指标。 2、临床处理请参照指南临床处理请参照指南,如宫颈如宫颈切除或消融。建议积极处理及严格随访。切除或消融。建议积极处理及严格随访。3、建议术后建议术后6个月残端进行细胞学及个月残端进行细胞学及E6/E7 mRNA检测。检测。E6/E7mRNA（-），），6个月复查细胞学及个月复查细胞学及E6/

20、E7mRNA检测。检测。E6/E7mRNA（+）、）、6个月复个月复查细胞学查细胞学ASCUS或或E6/E7mRNA(+)，建议积极处理，建议积极处理,如如冷冻、电灼或冷冻、电灼或LEEP。报告单解读阴性报告单解读阳性取样方法取样方法一、细胞样本一、细胞样本二、组织样本二、组织样本石蜡切片：石蜡切片：厚度厚度3-5um切片切片4-10片片宫颈上皮脱落细胞宫颈上皮脱落细胞同同TCT可与可与TCT共用共用（一般（一般5-10ml，不少于，不少于3ml）小结小结 高危HPV的E6/E7致癌基因表达产生E6/E7癌蛋白是宫颈癌的关键病因。 E6/E7mRNA： 是E6/E7癌蛋白合成的模板； 是宫颈癌

21、变的必由之路！ E6/E7mRNA检测： 筛查、辅助诊断、术后随访。 检测取样： 脱落细胞同TCT 组织取样：石蜡切片 感谢您的倾听！祝：身体健康祝：身体健康 工作顺利工作顺利 心想事成！心想事成！高危亚型HPV感染宫颈上皮细胞，将产生两种癌蛋白：E6和E7蛋白。癌蛋白可与宿主细胞的细胞周期调节蛋白（抑癌蛋白如P53、RB等）相结合，导致细胞周期控制失常，发生癌变。 （人民卫生出版社、妇产科学、2004年1月第6版）致癌原理 E6/E7 mRNA与宫颈癌的关系E6、E7mRNA-是宫颈病变是宫颈病变开始和进展开始和进展的必由之的必由之路路!E6/E7mRNA： 是致癌基因E6/E7表达的直接产物； 是最终致癌物-E6/E7癌蛋白合成的模板； 是宫颈病变开始和进展的必要条件！ 小结小结 适用范围（不局限于30岁以上人群）： 1、筛查：细胞学+ E6/E7 mRNA检测； 2、辅助诊断： （1）细胞学+E6/E7 mRNA检测； （2）若HPV（+） E6/E7 mRNA检测； （3）病理组织+ E6/E7 mRNA检测。 3、手术后及随访时: 组织学+癌基因E6/E7 mRNA； 细胞学+ E6/E7 mRNA检测