检测生物组织中的糖类脂肪和蛋白质

1、一实验目的：    尝试用化学试剂检测生物组织中糖类、脂肪和蛋白质二实验原理：某些化学试剂能使生物组织中的有关有机化合物，产生特定的颜色反应。1可溶性还原糖（如葡萄糖、果糖、麦芽糖）与斐林试剂发生作用，可生成砖红色的Cu2O沉淀。如：葡萄糖+ Cu(OH) 2  _加热_       葡萄糖酸 + Cu2O（砖红色）+ H2O， 即Cu(OH)2被还原成Cu2O，葡萄糖被氧化成葡萄糖酸。2脂肪可以被苏丹染液染成橘黄色（或被苏丹染液染成红色）。淀粉遇碘变蓝色。3蛋白质

2、与双缩脲试剂发生作用，产生紫色反应。（蛋白质分子中含有很多肽键，在碱性NaOH溶液中能与双缩脲试剂中的Cu2+作用，产生紫色反应。）三实验材料1做可溶性还原性糖鉴定实验，应选含糖高，颜色为白色的植物组织，如苹果、梨。（因为组织的颜色较浅，易于观察。）2做脂肪的鉴定实验。应选富含脂肪的种子，以花生种子为最好，实验前一般要浸泡34小时（也可用蓖麻种子）。3做蛋白质的鉴定实验，可用富含蛋白质的黄豆或鸡蛋清。四、实验试剂斐林试剂（包括甲液：质量浓度为0.1g/ mL NaOH溶液和乙液：质量浓度为0.05g/ mL CuSO4溶液）、苏丹或苏丹染液、双缩脲试剂（包括A液：质量浓度为0.1g/ mL N

3、aOH溶液和B液：质量浓度为0.01g/ mL CuSO4溶液）、体积分数为50%的酒精溶液，碘液、蒸馏水。五、方法步骤：（一）可溶性糖的鉴定操 作 方 法注 意 问 题解 释1. 制备组织样液。（去皮、切块、研磨、过滤）苹果或梨组织液必须临时制备。因苹果多酚氧化酶含量高，组织液很易被氧化成褐色，将产生的颜色掩盖。2. 取1支试管，向试管内注入2mL组织样液。  3. 向试管内注入1mL新制的斐林试剂，振荡。应将组成斐林试剂的甲液、乙液分别配制、储存，使用前才将甲、乙液等量混匀成斐林试剂； 切勿将甲液、乙液分别加入苹果组织样液中进行检测。斐林试剂很不稳定，甲、乙液

4、混合保存时，生成的Cu ( OH ) 2在70900C下分解成黑色CuO和水；甲、乙液分别加入时可能会与组织样液发生反应，无Cu ( OH ) 2生成。4. 试管放在盛有50-650C温水的大烧杯中，加热约2分钟，观察到溶液颜色：浅蓝色 棕色 砖红色（沉淀）最好用试管夹夹住试管上部，使试管底部不触及烧杯底部，试管口不朝向实验者。也可用酒精灯对试管直接加热。防止试管内的溶液冲出试管，造成烫伤； 缩短实验时间。（二）脂肪的鉴定操 作 方 法注 意 问 题解 释花生种子浸泡、去皮、切下一些子叶薄片，将薄片放在载玻片的水滴中，用吸水纸吸去装片中的水。干种子要浸泡34小时，新花生的浸泡时间可缩

5、短。因为浸泡时间短，不易切片，浸泡时间过长，组织较软，切下的薄片不易成形。切片要尽可能薄些，便于观察。在子叶薄片上滴23滴苏丹或苏丹染液，染色1分钟。染色时间不宜过长。 用吸水纸吸去薄片周围染液，用50%酒精洗去浮色，吸去酒精。 酒精用于洗去浮色，不洗去浮色，会影响对橘黄色脂肪滴的观察。同时，酒精是脂溶性溶剂，可将花生细胞中的脂肪颗粒溶解成油滴。用吸水纸吸去薄片周围酒精，滴上12滴蒸馏水，盖上盖玻片。 滴上清水可防止盖盖玻片时产生气泡。低倍镜下找到花生子叶薄片的最薄处，可看到细胞中有染成橘黄色或红色圆形小颗粒。装片不宜久放。时间一长，油滴会溶解在乙醇中。 

6、;三、蛋白质的鉴定操 作 方 法注 意 问 题解 释制备组织样液。（浸泡、去皮研磨、过滤。） 黄豆浸泡1至2天，容易研磨成浆，也可购新鲜豆浆以节约实验时间。鉴定。加样液约2ml于试管中，加入双缩脲试剂A，摇匀；再加入双缩脲试剂B液34滴，摇匀，溶液变紫色。A液和B液也要分开配制，储存。鉴定时先加A液后加B液。  CuSO4溶液不能多加。先加NaOH溶液，为Cu2+与蛋白质反应提供一个碱性的环境。A、B液混装或同时加入，会导致Cu2+变成Cu ( OH ) 2沉淀，而失效。否则CuSO4的蓝色会遮盖反应的真实颜色。可用蛋清代替豆浆。蛋清要先稀释。如果稀释不够，在实验

7、中蛋清粘在试管壁，与双缩脲试剂反应后会粘固在试管内壁上，使反应不容易彻底，并且试管也不易洗干净。附：淀粉的检测和观察用试管取2ml待测组织样液，向试管内滴加2滴碘液，观察颜色变化。碘液不要滴太多以免影响颜色观察 【学习重难点】 检测生物组织中的糖类、脂肪和蛋白质【重要考点】主要的考点是鉴定所用的试剂及相应的颜色反应，斐林试剂和双缩脲试剂的区别（溶液浓度不同，使用原理不同，使用方法不同）；实验选材等。【基础回顾】 1、检测还原糖所使用的试剂是 ，该试剂使用时，应先 ，该试剂与还原糖作用形成 色沉淀。 2、检测脂肪所用的试剂是 ，该试剂与脂肪作用被染成 色。 3、检测蛋白质所用的试剂是

8、，该试剂与蛋白质作用，产生 色，使用时应 。 4，检测淀粉使用试剂是 ，作用的结果是呈 色。 【重点问题探究】1、  选材：要富含有待测的物质，且颜色近于无色或白色（为什么？）2、  还原糖鉴定过程中颜色变化过程：蓝色（氢氧化铜的颜色）棕色（氢氧化铜和氧化亚铜混合物的颜色）砖红色（氧化亚铜的颜色）。3、 斐林试剂和双缩脲试剂的区别 （1）相同点：试剂组成相同，都是由NaOH溶液和CuSO4溶液两部分组成。 NaOH溶液的浓度相同，都是0.1gml. (2)不同点： CuSO4溶液的浓度不同。斐林试剂中的浓度是0.05 gml，双缩脲试剂中浓度是0.01 gml。 用量不同。

9、斐林试剂中把甲液（NaOH）和乙液（CuSO4）等量混合1ml使用；双缩脲试剂是先在含蛋白质的溶液中加入1mlA液（NaOH溶液），混合均匀后，再滴几滴B液（CuSO4溶液，量较少）。 使用方法不同：斐林试剂中两部分试剂要现配现用，且把待测试管放在盛有5065度的温水的大杯中加热约2min而双缩脲试剂是先加A液（NaOH）1ml，摇匀后再加B液（CuSO4）4滴再摇匀。 原理不同： 斐林试剂是指新制的Cu(OH)2悬浊溶液。还原糖与新制的Cu(OH)2在加热煮沸条件下，能生成砖红色的氧化亚铜沉淀。实验过程中，必须先把甲液（NaOH）和乙液（CuSO4）等量混合，让其反应生成Cu(OH)2后，才

10、能加入到含有还原糖的组织液中。如果先后或者说分别把NaOH溶液和CuSO4溶液加入到含有还原糖的组织液中，组织液中的有机酸会与NaOH迅速反应，使反应物中没有Cu(OH)2或Cu(OH)2不足，从而使还原糖与Cu(OH)2的反应不能进行或现象不明显，影响了还原糖的鉴定。 双缩脲反应是指具有两个或两个以上肽键的化合物在碱性条件下与Cu2+反应，生成紫色的络合物。所有的蛋白质均有此显色反应。它是NaOH和CuSO4两种溶液。在实验过程中，先在含蛋白质的溶液中加入1ml的NaOH溶液，混合均匀后，再滴几滴CuSO4溶液（量较少）。即先后加入NaOH和CuSO4溶液。如果在NaOH中滴几滴CuSO4溶

11、液混合后，再加入到含蛋白质的溶液中，混合液就没有Cu2+，显色反应就不会发生。    4、 可溶性还原糖、脂肪、蛋白质的鉴定的实验原理、方法、步骤和现象： 知识点可溶性还原糖 脂肪 蛋白质实验原理与斐林试剂生成砖红色沉淀被苏丹染成橘黄色（或被苏丹染成红色）与双缩脲试剂反应产生紫色物质选 材含糖量较高、颜色为白色或近于白色的植物组织，苹果、梨最好富含脂肪的种子，以花生最好浸泡12d的黄豆种子（或用豆浆）或用鸡蛋蛋白 方 法苹果切块研磨过滤滤液制作花生种子的切片黄豆浸泡切片研磨过滤滤液 鉴定步骤样液加斐林试剂振荡水浴加热煮沸切片染色漂洗镜检组织样液

12、加双缩脲试剂A再加双缩脲试剂B观察颜色变化实 验 现 象蓝色棕色砖红色沉淀脂肪被苏丹染成橘黄色（或被苏丹染成红色）加双缩脲试剂A无明显变化，加双缩脲试剂B后溶液变成紫色 注意事项1、选材要用含糖较高、颜色为白色或近于白色的植物组织2、斐林试剂不稳定，一般配制成甲液（NaOH：0.01 gml）和乙液（CuSO4：0.05 gml）来保存，用时必须将甲、乙两液混合均匀后使用，切勿分别加入组织样液中进行检测。1、切片要尽可能的薄；2、染色后一定要用50%的酒精溶液洗去浮色；3、观察时找最薄处，最好只有12层细胞1、用鸡蛋蛋白时，一定要加以稀释，如果稀释不够，与双缩脲试剂发生反应后会粘固在试管内壁上

13、，使反应不彻底，且试管不易洗干净；2、双缩脲试剂使用时，应先加A造成碱性环境，再加B 【典例分析】将面包团包在纱布中在清水中搓洗，鉴定粘留在纱布上是粘稠物和洗出的白浆分别用的试剂是（ ） A 碘液、苏丹溶液 B、双缩脲试剂、碘液 C、亚甲基蓝溶液、苏丹溶液 D、碘液、斐林试剂【巩固练习】1、下列各项可作为鉴定生物组织中还原糖的理想材料的是（ ） A、韭菜 B、白菜 C、菠菜 D、梨2、在麦芽糖酶溶液中加入双缩脲试剂，其结果应该是（ ） A、产生气泡 B、溶液呈蓝色 C、溶液呈紫色 D、产生砖红色沉淀3、在“检测生物组织中糖类、脂肪和蛋白质”实验中，对实验材料的选择，下列叙述错误的是（

14、 ） A、甘蔗茎的薄壁组织、甜菜的块根等，都含有较多的糖且近于白色，因此可以用于进行还原糖的鉴定 B、花生种子含脂肪多且子叶肥厚，是用于脂肪鉴定的理想材料 C、大豆种子蛋白质含量高，是进行蛋白质鉴定的理想植物组织材料 D、鸡蛋清含蛋白质多，是进行蛋白质鉴定的动物材料4、据药理研究，一种茅草的根内含有降血糖的因子及多种有益于健康的成分，某公司将它开发成一种保健饮料。该产品是否适用于糖尿病患者，生物学兴趣小组的同学以此作为研究课题，请你完成下面的实验鉴定报告。 （1）实验目的：鉴定一种茅草的根是否含有还原糖和淀粉。 （2）实验原理：还原糖可用 试剂，淀粉可用 试剂来检测。 （3）实验材料：一种茅草的根、所需试剂、刀片、载玻片、酒精灯、试管夹、火柴、滴管 （4）实验步骤： 鉴定还原糖： ； 鉴定淀粉： ； （5）实验现象： ； （6）结果分析： 。 （7）在鉴定还原糖的实验操作中应注意： 。5、&