DB5301∕T 67-2021 马铃薯脱毒组培苗繁育技术规程

1、ICS 65.020.20CCS B 23DB5301昆明市地方标准DB 5301/T 672021马铃薯脱毒组培苗繁育技术规程2021 - 12 - 31 发布2022 - 01 - 01 实施昆明市市场监督管理局发 布学兔兔 标准下载DB5301/T 672021目次前言III1 范围12 规范性引用文件13 术语和定义14 组培室的要求24.1 组培室布局24.2 设施、设备及药品34.3 培养基配方34.4 卫生要求35 脱毒材料的选取45.1 植株初选45.2 材料选择45.3 类病毒筛查46 脱毒与培养46.1 外植体材料预处理46.2 无菌苗培养基的制备46.3 外植体消毒46.

2、4 离体培养无菌苗56.5 茎尖培养基的制备56.6 茎尖剥离与接种56.7 茎尖培养57 病毒检测和品种真实性鉴定57.1 病毒检测57.2 品种真实性鉴定68 核心苗保存与基础苗培养68.1 操作步骤68.2 培养条件69 组培苗扩繁69.1 基础苗复检69.2 培养基制备69.3 无菌接种79.4 扩繁79.5 瓶苗培养7IDB5301/T 672021附录 A（规范性）组培设施、设备及药品8附录 B（规范性）MS 培养基配方和母液配制要求10附录 C（规范性）无菌苗培养基配方12附录 D（规范性）茎尖培养基配方13附录 E（规范性）脱毒苗扩繁培养基配方14附录 F（规范性）核心苗保存培

3、养基配方15IIDB5301/T 672021前言本文件按照GB/T 1.1-2020标准化工作导则 第1部分：标准化文件的结构和起草规则的规定起草。本文件由昆明市农业农村局归口。本文件起草单位:昆明市农业科学研究院、云南师范大学马铃薯科学研究院。本文件主要起草人: 张丽芳、蒋瑜、朱维贤、邹万君、杨春利、李灿辉、刘卫民、施林、李荣琼、李华、李昌远、王薇、储丽章、迟静娣、杨永东、汪忠明。IIIDB5301/T 672021马铃薯脱毒组培苗繁育技术规程1 范围本文件规定了组培室的要求，脱毒材料的选取、无菌苗培养、茎尖脱毒与培养、病毒和品种真实性鉴定及组培苗扩繁等技术操作规程。本文件适用于马铃薯脱毒

4、和脱毒组培苗的扩繁。2 规范性引用文件下列文件中的内容通过文中的规范性引用而构成本文件必不可少的条款。其中，注日期的引用文件，仅该日期对应的版本适用于本文件；不注日期的引用文件，其最新版本（包括所有的修改单） 适用于本文件。GB/T 293752012马铃薯脱毒试管苗繁育技术规程GB/T 293782012马铃薯脱毒种薯生产技术规程NY/T 4012000脱毒马铃薯种薯（苗）病毒检测技术规程NY/T 1963-2010马铃薯品种鉴定3 术语和定义GB/T 29375-2012界定的与下列术语和定义适用于本文件，为了便于使用，以下重复列出了GB/T 29375-2012的部分术语和定义。3.1脱

5、毒应用茎尖分生组织培养技术，脱去主要危害马铃薯的病毒和类病毒。3.2叶原基在茎尖生长点的基部形成的突起。来源：GB/T 293752012，3.13.3茎尖芽顶端部分（0.1 mm10 mm）其中包括分生组织（0.05 mm0.1 mm）及芽原基和正在生长发育的叶原基。来源：GB/T 293752012，3.23.4茎尖分生组织茎部位具有持续或周期性分裂能力的细胞群。来源：GB/T 293752012，3.33.51DB5301/T 672021离体培养从植物体分离出符合需要的器官、组织、细胞、原生质体等，通过无菌操作，在人工控制条件下进行培养以获得再生的完整植株或生产具有经济价值的其它产品的

6、技术。来源：GB/T 293752012，3.43.6外植体指从生长健壮无病虫害的植株上取下用作离体培养材料的器官或组织的片段。3.7无菌苗指在无菌条件下，将马铃薯块茎芽或者大田马铃薯健康植株上的顶芽、腋芽或茎段按外植体的消毒流程进行严格的消毒后，接种在MS培养基或加激素的MS培养基上，在人工控制条件下培养获得的无菌完整植株。3.8脱毒核心苗应用茎尖分生组织培养技术获得的，经检测确认不带马铃薯卷叶病毒（PLRV）、马铃薯Y病毒（PVY）、马铃薯A病毒（PVA）、马铃薯X病毒（PVX）、马铃薯M病毒（PVM）、马铃薯S病毒（PVS） 等病毒和马铃薯纺锤块茎类病毒（PSTVD）、不带任何细菌和真菌

7、，经试种观察具有原品种典型性状的脱毒苗。3.9基础苗由核心苗繁殖的、经检测无病毒和类病毒的脱毒苗。4 组培室的要求4.1 组培室布局组培室建设时周围应无污染源，与大田生产隔离，选择向阳、通风、干燥、清洁的环境。应设置清洗室、配制室、灭菌室、无菌贮存室、缓冲间、更衣室、接种室、培养室等功能区，并应相互隔离。各功能区布局应遵循方便消毒、减少污染的原则。培养室可采用人工光源和全自然光两种，采用全自然光时，培养室宜选用玻璃或阳光板建设， 配备水帘和风机等降温设备，水帘外应加挂60目网纱；门口要建缓冲间，缓冲间地面应设置消毒槽。组培室各功能间布局见图1。2DB5301/T 672021图 1组培室各功能

8、间布局平面示意图4.2 设施、设备及药品4.2.1 生产组培苗的设施、设备见附录 A。4.2.2 生产组培苗的试剂见附录 B。4.3 培养基配方4.3.1 无菌苗培养基配方见附录 C。4.3.2 茎尖培养基配方见附录 D。4.3.3 脱毒苗扩繁培养基配方见附录 E。4.3.4 核心苗保存培养基配方见附录 F。4.4 卫生要求4.4.1 基本要求。组培室各功能间应保持干净、整洁，每周用 0.1 %的优氯净擦拭工作台面、窗台及拖地面。4.4.2 接种室。应定期使用 0.25%1%新吉尔灭擦拭窗台、小推车等，用 0.1 %的优氯净擦拭地面，隔天开启紫外灯，每次 40 min60 min。4.4.3

9、培养室。应定期使用 0.25%1%新吉尔灭擦拭培养架和窗台，用 0.1 %的优氯净擦拭地面。每周开紫外灯 1 次2 次，每次 40 min60 min。4.4.4 超净工作台。 每次使用前，应提前打开风机和紫外灯 30 min。接种时关闭紫外灯，用 75%酒精擦拭工作台面及内壁。每周 1 次2 次用 0.25%1% 新吉尔灭擦拭超净工作台的外表面。4.4.5 接种工具。每台超净工作台应备两套接种工具轮流使用。接种前对使用的镊子、剪刀、解剖刀 等工具进行灼烧或插入高温灭菌器中灭菌，冷却后使用。4.4.6 接种操作人员。进入接种室前，用肥皂或洗手液洗净双手，换上消毒工作服，戴好口罩。操作 过程中，

10、每转接完一瓶基础母瓶后用 75%的酒精清擦手和工作台面。4.4.7 消毒。全自然光培养室门口缓冲间地面消毒槽内应放入消毒剂，工作人员进入时应对鞋底消毒。4.4.8 污染瓶苗的处理。组培苗培养期间，经常观察组培苗的状况，发现污染应及时清除，污染瓶苗 经高压灭菌后再倒弃。3DB5301/T 6720215 脱毒材料的选取5.1 植株初选马铃薯生育期内，在土壤肥力中上等的地块，于现蕾期至开花期选择生长势强、具备原品种典型性状的健康植株，做好标记。5.2 材料选择5.2.1 选用植株进行培养时，应选取健康且具备品种典型性状植株的顶芽、腋芽或茎段作为外植体材 料。5.2.2 选用薯块芽进行培养时，在生育

11、后期到收获期，应在已做标记的植株中进行薯块复选。选择高产、大薯率高、无病斑、无虫蛀、无机械损伤，且皮色、肉色、薯形、芽眼等性状符合品种特征的健康 薯，清洗泥土后催芽，作为外植体材料。5.3 类病毒筛查入选的植株或块茎，按照NY/T 4012000中附录B给出的方法检测马铃薯纺锤块茎类病毒（PSTVd），筛选无马铃薯纺锤块茎类病毒（PSTVd）的块茎或植株作为培养无菌苗的材料。6 脱毒与培养6.1 外植体材料预处理6.1.1 植株处理将从田间选择的植株移栽至温室无菌盆土中生长一段时间，定期喷洒杀菌剂于植株上。6.1.2 块茎催芽和病毒钝化6.1.2.1 块茎自然出芽：入选的块茎经清洗、消毒后放置

12、于室内常温下自然萌发，待芽长至 2 cm3 cm 即可用于无菌苗的培养。对含有 S 病毒、X 病毒的块茎需置于 37 1 培养箱中处理 3 周4 周， 钝化病毒。6.1.2.2 人工方法催芽：入选的块茎经清洗后用 0.1%硫脲+5 mg/L 赤霉素溶液浸泡 5 min，取出晾干后，用 0.1 %多菌灵溶液浸泡 30 min 或 75%酒精喷湿进行表面消毒，置于 25 黑暗条件下催芽， 待芽长至 2 cm3 cm 即可用于无菌苗的培养。对含有 S 病毒、X 病毒的块茎需置于 37 1 培养箱中处理 3 周4 周，钝化病毒。6.2 无菌苗培养基的制备6.2.1 无菌苗培养基可用 MS 培养基或加激

13、素的 MS 培养基，配方参见附录 B 和附录 C。6.2.2 将制备好的培养基分装于培养容器中，盖好盖子。6.2.3 将制备好的培养基在高压蒸汽灭菌锅压力为 1.1 kg/cm2、温度为 121 条件下灭菌 25 min30 min，冷却后在洁净贮存室放置 3 d5 d 备用。6.3 外植体消毒6.3.1 取材：从处理过的块茎上取 2 cm3 cm 长的顶芽和侧芽，或取优选植株的顶芽、腋芽或茎段作为外植体材料。4DB5301/T 6720216.3.2 清洗：在流水下用软毛刷轻轻逐个刷洗外植体后放于烧杯中，用纱布封口，用自来水冲洗10 min20 min。6.3.3 消毒：在超净工作台上，先用

14、 75%的酒精浸 15 s，无菌水冲洗 2 次，再用 0.1 %的升汞浸泡 8 min10 min（或用 5 %次氯酸钠浸泡 15 min20 min），无菌水漂洗 5 次8 次。6.4 离体培养无菌苗6.4.1 接种和培养：在超净工作台上，对经严格消毒过的块茎芽、顶芽、腋芽或茎段等进行剪切，切 除下端药剂伤害的部分，接种在 MS 培养基或加激素的 MS 培养基上，在培养容器上注明品种名称和接种时间，放入培养室培养 3 周4 周。待芽长成含 4 片5 片叶子的小苗时，剪切成单节段，转接于同样的培养基上，培养成苗。同样方法扩繁 1 个2 个周期，待苗达一定数量后，从无菌苗上剥离茎尖。6.4.2

15、培养条件：无菌苗在温度 20 25 、相对湿度 70%、光照强度 2 000 Lux3 000 Lux 的条件下培养，光照时数 12 h/d。6.5 茎尖培养基的制备6.5.1 茎尖培养基配方参见附录 D。6.5.2 将制备好的茎尖培养基分装于培养容器中，盖好盖子。6.5.3 将制备好的培养基在高压蒸汽灭菌锅压力为 1.1 kg/cm2、温度为 121 条件下灭菌 25 min30 min，冷却后在洁净贮存室放置 3 d 5 d 备用。6.6 茎尖剥离与接种6.6.1 茎尖剥离与接种在超净工作台上操作。6.6.2 茎尖剥离与接种按下列步骤进行：a) 在解剖镜的载物台上放一张灭菌滤纸，将剪取的无

16、菌苗茎尖放置于滤纸上；b) 借助 40X 双目解剖镜，剥离茎尖直至露出半圆形光滑的生长点；c) 用锋利的无菌解剖针切取 0.2 mm 以下的带 1 个2 个叶原基的茎尖，迅速接种于茎尖培养基上，每瓶培养基内接种一个茎尖；d) 已接种的培养基封好口后，在容器上注明编号、品种名称、接种时间。6.6.3 在剥离过程中，应注意茎尖暴露的时间越短越好，切下的茎尖不应与已剥去部分、解剖镜台或 持芽的镊子接触。每剥一个茎尖后，换一张无菌滤纸。6.7 茎尖培养6.7.1 培养条件：接种好的茎尖放在培养室内培养，温度 20 25 ，光照 2 000 Lux3 000 Lux， 每天光照 12 h。6.7.2 茎

17、尖成苗：茎尖培养两周后，成活的茎尖明显变大变绿，50 d60 d 左右茎尖长成带 1 片2 片小叶的无根小芽，转入 MS 培养基（配方参见附录 B）中继续培养，30 d 左右长成带 4 片5 片叶子的完整试管苗。7 病毒检测和品种真实性鉴定7.1 病毒检测5DB5301/T 6720217.1.1 在超净工作台上取出试管苗将每株按 1 节2 节切段，转入 MS 培养基（配方参见附录 B）进行培养，每瓶接入一节段，新培养容器仍然使用与试管苗容器相同的编号和内容。7.1.2 成苗后，每个编号的抽取一株用于病毒检测，检测方法执行 NY/T 4012000 的规定，通过检测筛选出不含 PVX、PVY、

18、PVS、PLRV、PVM、PVA 等病毒和 PSTVd 的脱毒苗核心苗。7.2 品种真实性鉴定7.2.1 试种观察：对应编号，将经检测不带病毒的试管苗取出一部分移栽到防虫网棚，结出的小薯种 植到田间试种观察，检验其是否发生变异。7.2.2 DNA 分子标记：鉴定已脱毒的试管苗与原品种的关系，检测方法执行 NY/T 1963-2010 的规定。若试管苗的 DNA 图谱与原品种的一致，则判定二者为同一品种。8 核心苗保存与基础苗培养8.1 操作步骤核心苗保存培养基配方见附录 F，基础苗扩繁培养基用 MS 培养基（配方见附录 B）或其它脱毒苗扩繁培养基（配方见附录 E），步骤如下：a) 在超净工作台

19、上，用 75%酒精擦拭消毒核心苗瓶和待用的新培养基的瓶表面，并置于超净工作台上；b) 用经灼烧消毒并冷却好的镊子取出核心苗置于无菌牛皮纸上；c) 按茎节切段，每个切段带 1 个2 个叶片；d) 从剪下的切段中取 1 段2 段，腋芽朝上插入核心苗保存培养基中上，封好口，注明编号、品种名称及接种时间；将其余节段接入基础苗扩繁培养基，封好口，注明编号、品种名称及接种时间。8.2 培养条件8.2.1 核心苗保存条件：核心苗保存要放入相对低温的种质资源保存室，使其缓慢生长保存。温度10 12 、相对湿度 70%、光照强度 2 000 Lux3 000 Lux、光照时数 10 h/d。8.2.2 基础苗培

20、养条件：温度 22 25 、 相对湿度 70%、光照强度 2 000 Lux3 000 Lux、 光照时数 12 h/d。9 组培苗扩繁9.1 基础苗复检扩繁前检测基础苗是否带病毒（PVX、PVY、PVS、PLRV、PVM、PVA）和马铃薯纺锤块茎类病毒（PSTVd）。按照 NY/T 4012000 的附录 A 和附录 B 给出的方法进行检测。9.2 培养基制备9.2.1 培养基配制：选择用 MS 固体培养基（配方参见附录 B）或其他扩繁培养基（配方参见附录 E）。9.2.2 培养基分装：将配制好的培养基装入培养容器中（常用 350 ml 的罐头瓶），每瓶加入 35 ml40 ml 的培养基，

21、用封口膜或盖子封口。6DB5301/T 6720219.2.3 培养基灭菌：将培养基置于高压蒸汽灭菌锅，在压力为 1.1 kg/cm2、温度为 121 条件下灭菌25 min30 min，取出后在洁净贮存室放置 3 d 5 d 待用。9.3 无菌接种无菌接种操作要求见第 4 章。9.4 扩繁9.4.1 检测合格的基础苗在超净工作台上切段扩繁，组培苗扩繁按以下程序操作：a) 用 75%酒精擦拭基础瓶苗和备用的培养基，表面消毒后放置于超净工作台上备用；b) 打开基础母瓶，用无菌剪刀把苗从基部剪断，用无菌枪状镊子取出脱毒苗，置于事先准备好的 无菌牛皮纸上；c) 按茎节切断，每个切段带 1 个2 个叶

22、片；d) 用无菌镊子将剪好的茎段插到培养基上，腋芽朝上，每瓶插 15 个20 个茎段；e) 封口后，用记号笔注明编号、品种名称、接种时间。9.4.2 每个操作人员配备两套接种工具，交替灭菌使用。每接种完一瓶基础母瓶后，将镊子、剪刀等工具插入 75%酒精浸蘸，并在酒精灯上灼烧数秒至酒精干透或插入接种工具消毒器消毒。转接下一个母瓶苗时，应使用另一套消毒好的接种工具，同时换一张无菌牛皮纸。9.5 瓶苗培养9.5.1 接种好的瓶苗放入培养室，白天 22 25 ，夜间 16 20 ，光照采用全自然光或人工光源日光灯：a) 全自然光培养：玻璃或阳光板建成的全自然光培养室，光照强度控制在 4 000 Lux

23、10 000 Lux， 当光照强度超过 10 000 Lux，光照强度过强，不利于组培苗的生长，要进行适当的遮阳；b) 人工光源培养：光照强度 2 000 Lux3 000 Lux，光照时数 16 h/d。9.5.2 待苗长出 6 片7 片叶片，株高 7 cm8 cm 时，可再次切段繁殖或出瓶移栽。脱毒苗一般间隔25 d 左右继代繁殖一次。7DB5301/T 672021附录A（规范性）组培设施、设备及药品A.1 组培设施和设备A.1.1 防酸碱台面的试验台。A.1.2 冰箱。A.1.3 药瓶柜。A.1.4 器械柜。A.1.5 高压灭菌锅。A.1.6 干燥箱。A.1.7 空调和降温设施（湿帘、

24、风机等）。A.1.8 超净工作台。A.1.9 培养架（人工光源培养室里的培养架须装有日光灯）。A.1.10 浸泡洗涤水槽和冲洗水槽。A.1.11 培养瓶控水架。A.1.12 装培养瓶（或培养基）的塑料周转筐若干个。A.1.13 0.1 g电子天平、0.000 1 g电子天平。A.1.14 电动搅拌机。A.1.15 磁力搅拌机。A.1.16 酸度计。A.1.17 蒸馏水器。A.1.18 不锈钢锅或陶瓷桶。A.1.19 电磁炉。A.1.20 各种规格的容量瓶、棕色细口瓶、棕色广口瓶、移液管、烧杯、量筒、玻璃棒、吸管、洗耳球、 试剂勺等。A.1.21 大量的试管、三角瓶、培养瓶A.1.22 瓶盖、封

25、口膜、线绳。A.1.23 紫外灯。A.1.24 酒精灯。A.1.25 镊子、剪刀、手术刀、解剖针、解剖刀。A.1.26 温、湿度仪。A.2 药品A.2.1 氯化汞。A.2.2 高锰酸钾。A.2.3 次氯酸钠。A.2.4 75%乙醇、95%乙醇。A.2.5 6-苄氨基腺嘌呤（6-BA）、萘乙酸（NAA）、吲哚乙酸（IAA）、赤霉素（GA3）、激动素（KT）、D-泛酸钙。A.2.6 硫脲。8DB5301/T 672021A.2.7 新洁尔灭。A.2.8 优氯净。A.2.9 pH试纸。A.2.10 琼脂、卡拉胶。A.2.11 食用白糖、蔗糖。A.2.12 附录B附录E中的所有试剂。9DB5301/T

26、 672021附录B（规范）MS 培养基配方和母液配制要求B.1 MS培养基配方MS培养基配方见表B.1。表 B.1MS 培养配方表成分化学试剂质量浓度（mg/L）硝酸钾（KNO3）1 900硝酸铵(NH4NO3)1 650大量元素磷酸二氢钾(KH2PO4)170硫酸镁(MgSO47H2O)370氯化钙(CaCl22H2O)440硫酸锰（MnSO44H2O）22.3硫酸锌（ZnSO47H2O）8.6硼酸（H3BO3）6.2微量元素碘化钾（KI）0.83钼酸钠（Na2MoO42H2O）0.25硫酸铜（CuSO45H2O）0.025氯化钴（CoCl26H2O）0.025铁盐乙二胺四乙酸二(Na2E

27、DTA2H2O) 硫酸亚铁（FeSO47H2O）37.327.8肌醇100甘氨酸2有机物质盐酸硫胺素（B1）0.1盐酸吡哆醇（B6）0.5烟酸0.5食用白糖（蔗糖）30 g/L琼脂粉6.5 g/LB.2 MS培养基母液配制要求B.2.1 大量元素母液的配制：大量元素用量相对较大，其中KNO3、NH4NO3在配制培养基时按实际配制的体积来称取，随称随用，其余3种以每种试剂单独配制成母液。B.2.2 微量元素母液的配制：7种微量元素逐一称取、溶解后定容成一种母液。10DB5301/T 672021B.2.3 铁盐母液的配制：两种试剂分别称量并分别加热溶解，待两种试剂均溶解后混合，混合后的溶液继续加

28、热使其充分螯合，冷却后定容备用。B.2.4 有机物质母液的配制：肌醇在配制培养基时按实际配制的体积来称取，随称随用，其余4种有机 物质逐一称取、溶解后定容成一种母液。B.2.5 MS固体培养基：MS培养基+食用白糖（蔗糖）30 g/L+琼脂粉6.5 g/L，pH5.8。11DB5301/T 672021附录C（规范性）无菌苗培养基配方无菌苗培养基配方见表C.1。表 C.1无菌苗培养基配方表成分化学试剂质量浓度大量元素硝酸钾（KNO3） 硝酸铵(NH4NO3)磷酸二氢钾(KH2PO4) 硫酸镁(MgSO47H2O) 氯化钙(CaCl22H2O)1 900 mg/L1 650 mg/L170 mg

29、/L370 mg/L440 mg/L微量元素硫酸锰（MnSO44H2O） 硫酸锌（ZnSO47H2O） 硼酸（H3BO3）碘化钾（KI）钼酸钠（Na2MoO42H2O） 硫酸铜（CuSO45H2O） 氯化钴（CoCl26H2O）22.3 mg/L8.6 mg/L6.2 mg/L0.83 mg/L0.25 mg/L0.025 mg/L0.025 mg/L铁盐乙二胺四乙酸二(Na2EDTA2H2O) 硫酸亚铁（FeSO47H2O）37.3 mg/L27.8 mg/L有机物质肌 醇 甘氨酸盐酸硫胺素（B1） 盐酸吡哆醇（B6）烟酸100 mg/L2 mg/L0.1 mg/L0.5 mg/L0.5 m

30、g/L激素6-苄基氨基腺嘌呤(6-BA) 萘乙酸（NAA）赤霉素(GA3)0.3 mg/L1 mg/L0.05 mg/L0.1 mg/L0.2 mg/L糖食用白糖（蔗糖）30 g/L其它琼脂粉6.5 g/L12DB5301/T 672021附录D（规范性） 茎尖培养基配方茎尖培养基配方见表D.1。表 D.1茎尖培养基配方表成分化学试剂质量浓度MSaFAO(1986)bCIPc大量元素硝酸钾（KNO3）1 900 mg/L1 900 mg/L1 900 mg/L硝酸铵(NH4NO3)1 650 mg/L1 650 mg/L1 650 mg/L磷酸二氢钾(KH2PO4)170 mg/L170mg/

31、L170 mg/L硫酸镁(MgSO47H2O)370 mg/L370 mg/L370 mg/L氯化钙(CaCl22H2O)440 mg/L440 mg/L440 mg/L微量元素硫酸锰（MnSO44H2O22.3 mg/L0.5 mg/L22.3 mg/L硫酸锌（ZnSO47H2O）8.6 mg/L1.0 mg/L8.6 mg/L硼酸（H3BO3）6.2 mg/L1.0 mg/L6.2 mg/L碘化钾（KI）0.83 mg/L0.01 mg/L0.83 mg/L钼酸钠（Na2MoO42H2O）0.25 mg/L0.25 mg/L硫酸铜（CuSO45H2O）0.025 mg/L0.030.025

32、 mg/L氯化钴（CoCl26H2O）0.025 mg/L0.025 mg/L铁盐乙二胺四乙酸二(Na2EDTA2H2O)37.3 mg/L37.3 mg/L37.3 mg/L硫酸亚铁（FeSO47H2O）27.8 mg/L27.8 mg/L27.8 mg/L有机物质肌醇100 mg/L100 mg/L100 mg/L甘氨酸2.0 mg/L2.0 mg/L盐酸硫胺素（B1）0.5 mg/L1.0 mg/L0.5 mg/L盐酸吡哆醇（B6）0.5 mg/L1.0 mg/L0.5 mg/L烟酸0.5 mg/L1.0 mg/L0.5 mg/L硫酸盐腺嘌呤80 mg/L0.25 mg/L泛酸钙0.5 mg/L2.0 mg/L激素生物素0.2 mg/L激动素（KT）0.04 mg/L1.0 mg/L吲哚乙酸（IAA）0.1 mg/L 2.0 mg/L糖食用白糖（蔗糖）30 g20 g30 g其它琼脂粉6.5 g8g6 ga 茎尖培养基为MS 培养基加激素。b 联合国粮农组织推荐的茎尖培养基配方，见GB/T 293752012，附录B表B.1。c 国际马铃薯中心的茎尖培养基配方， 见GB/T 293752012，附录B表B.1。13DB5301/T 672021A附录E（规范性）脱毒苗扩繁培养基配