实验四、革兰氏染色法 ppt课件

1、思索题思索题1 1：培育基配置好后，为什么必需立刻：培育基配置好后，为什么必需立刻灭菌？如何检查灭菌后的培育基能否为无菌灭菌？如何检查灭菌后的培育基能否为无菌的？的？思索题思索题2 2：假设需求配制一种含有某抗生素：假设需求配制一种含有某抗生素的固体培育基，其中抗生素的终质量浓度的固体培育基，其中抗生素的终质量浓度或义务浓度为或义务浓度为50ug/mL50ug/mL，他将如何操作？，他将如何操作？提示：抗生素在高温下易失效提示：抗生素在高温下易失效实验四实验四 革兰氏染色法革兰氏染色法目的要求学习并掌握革兰氏染色法。学习并掌握革兰氏染色法。了解革兰氏染色原理。了解革兰氏染色原理。稳定显微镜的运

2、用方法及无菌操作技术。稳定显微镜的运用方法及无菌操作技术。v菌种菌种v参考菌：金黄色葡萄球菌参考菌：金黄色葡萄球菌(G+), 大肠杆菌大肠杆菌 (G-)v待测菌：蜡样芽孢杆菌、蓝细菌待测菌：蜡样芽孢杆菌、蓝细菌(微囊藻微囊藻)v仪器仪器 显微镜显微镜v资料资料 载玻片、香柏油、二甲苯、擦镜纸、载玻片、香柏油、二甲苯、擦镜纸、吸水纸、染色缸等吸水纸、染色缸等v染料染料 草酸铵结晶紫染色液、卢戈氏碘液、草酸铵结晶紫染色液、卢戈氏碘液、95%乙醇、乙醇、0.5%番红染色液番红染色液v制片制片v初染初染v媒染媒染v脱色脱色v复染复染v镜检镜检主要操作步骤主要操作步骤制片制片v要用活泼生长期的培育物进展

3、革兰氏染色要用活泼生长期的培育物进展革兰氏染色; ;v留意练习无菌操作；留意练习无菌操作；v在载玻片上滴一小滴生理盐水；在载玻片上滴一小滴生理盐水；v取菌不要贪多，接种环上肉眼可见菌苔痕取菌不要贪多，接种环上肉眼可见菌苔痕迹即可；迹即可；v菌苔在生理盐水中涂片要均匀，部分不宜菌苔在生理盐水中涂片要均匀，部分不宜过厚过厚, ,以免脱色不完全呵斥假阳性以免脱色不完全呵斥假阳性v涂片涂片-室温枯燥室温枯燥-固定固定初染初染 将玻片置于玻片搁架上，加草酸铵将玻片置于玻片搁架上，加草酸铵结晶紫染色液结晶紫染色液( (加量以盖满菌膜为度加量以盖满菌膜为度) )，染，染色色1min1min。倾去染色液，用自

4、来水小心地冲。倾去染色液，用自来水小心地冲洗。洗。媒染媒染 滴加碘液冲去水迹，再染滴加碘液冲去水迹，再染1-2min1-2min，水洗。水洗。脱色脱色 吸水纸吸去多余水分吸水纸吸去多余水分, ,滴加滴加95%95%乙醇，乙醇，脱色脱色20-30s20-30s立刻水洗，以终止脱色。立刻水洗，以终止脱色。复染吸水纸吸去多余水分复染吸水纸吸去多余水分, ,滴加番红，染色滴加番红，染色2-3min2-3min，水洗。最后用吸水纸悄然吸干。，水洗。最后用吸水纸悄然吸干。 枯燥后，置显微镜下察看。枯燥后，置显微镜下察看。 被染成蓝紫色者即为革兰氏阳性菌被染成蓝紫色者即为革兰氏阳性菌(G) 被染成红色者是革

5、兰氏阴性菌被染成红色者是革兰氏阴性菌(G-)革兰氏阳性和阴性菌细胞壁成分比较成分 占细胞壁干重的% 革兰氏阳性菌 革兰氏阴性菌肽聚糖 含量很高50-90 含量很低10磷壁酸 含量较高50 无类脂质 普通无 2 含量较高20蛋白质 无 含量较高vG-菌的细胞壁中含有较多易被乙醇溶解的类脂菌的细胞壁中含有较多易被乙醇溶解的类脂质，而且肽聚糖层较薄、交联度低，故用乙醇质，而且肽聚糖层较薄、交联度低，故用乙醇或丙酮脱色时溶解了类脂质，添加了细胞壁的或丙酮脱色时溶解了类脂质，添加了细胞壁的通透性，使结晶紫和碘的复合物易于渗出，结通透性，使结晶紫和碘的复合物易于渗出，结果细菌就被脱色，再经番红复染后就成红色。果细菌就被脱色，再经番红复染后就成红色。vG菌细胞壁中肽聚糖层厚且交联度高，类脂菌细胞壁中肽聚糖层厚且交联度高，类脂质含量少，经脱色剂处置后反而使肽聚糖层失质含量少，经脱色剂处置后反而使肽聚糖层失水、孔径减少，通透性降低，因此细菌仍保管水、孔径减少，通透性降低，因此细菌仍保管初染时的颜色，即结晶紫的蓝紫色。初染时的颜色，即结晶紫的蓝紫色。作作 业业 结果结果 简述简述4种细菌的染色结果外种细菌的染色