MMFSCNG婴幼儿配方食品和乳粉肌醇的测定

1、MMFSCNG02婴幼儿食品乳粉肌醇微生物法气相色谱法MM_FS_CNG_0207婴幼儿配方食品和乳粉肌醇的测定1.适用范围方法一适用于婴幼儿配方食品和乳粉中肌醇的测定，方法二适于乳粉中肌醇的测定.方法一：微生物法2,原理概要：通过Saccharomycesuvarum的生长情况来评价肌醇的含量。3 .主要试剂和仪器.主要试剂、菌种和培养基盐酸（体积比为1:1）、氢氧化钠（1mol/L）、肌醇标样（无水晶体）。菌不中:Saccharomycesuvarum。培养基：链抱霉菌琼脂培养基：3号蛋白陈5g,酵母浸膏5g,麦芽糖40g,琼脂15g。肌醇测定用培养基：葡萄糖100g，柠檬酸钾10g，柠檬

2、酸2g,磷酸二氢钾，氯化钾,硫酸镁,氯化钙,硫酸镒50mg氯化亚铁50mgDL色氨酸80mgL-胱氨酸，L异亮氨酸，匚赖氨酸，L.蛋氨酸，DL-苯基丙氨酸，匚酪氨酸，匚天门冬酰胺，DL.天门冬氨酸，DL-丝氨酸，甘氨酸,DL.苏氨酸，.缴氨酸组氨酸，L-脯氨酸,DL.丙氨酸JL.谷氨酸，精氨酸，盐酸硫胺素500pg,生物素16pg,泛酸钙5mg,盐酸毗哆醇1mg加蒸储水至1000mL,土（250。,仪器pH计；比色仪；250mL圆底烧瓶，与冷凝器连接的锥形玻璃接头。4 .样品制备.贮备菌种的制备从纯菌种中转接2个以上已制备好的麦芽浸出汁琼脂斜面。30C培养1624h。贮于冰箱中，保存期不要超过

3、2周，然后再转接到新的琼脂斜面上。接种的准备：最好在使用的当天从贮备菌种中转接到新配制的麦芽浸出汁琼脂斜面上，30（培养1624h。用接种环无菌地转接该菌种到一个灭菌生理盐水中，直到得到一定浓度菌体细胞的悬浮液。为了测定，制备一个酵母菌悬浮水溶液，这个悬浮液中酵母菌的浓度在mL分光光度计事先用水调到100%透光率，然后测定这个“标准”酵母菌的透光率。将新接种斜面中的菌体细胞移入到无菌生理盐水中，其浓度直到达到与上述标准溶液具有相同的透光率为止。标准溶液标准贮备液（肌醇的浓度为mL：称取100mg肌醇（该肌醇标样已放在干燥器中干燥24h），于容量瓶中用水稀释至500mL贮于冰箱。标准工作液（肌醇

4、的浓度为2pg/mL）:吸取5mL标准贮备液，用水稀至500mL定容。当天制备。5 .过程简述,样品的处理底烧瓶中5加干粉样品：精确称取一定量样品，这些样品中约含肌醇，移入250mL100mL盐酸（1:1），继续步骤。液体样品：吸一定量样品，这些样品中约含肌醇，加100mL盐酸，继续步骤。将装样品的圆底烧杯与冷凝器联结，经过6%通过蒸储将盐酸除去。将剩余物用蒸储水冲到烧杯中，用1mol/L氢氧化钠将溶液的pH值调至±。稀释至250mL过滤，弃去前部几毫升。这个溶液肌醇的浓度均为23g/mL。.标准曲线按表1顺序加入蒸镭水、标准溶液于培养管中，一式三份表1试管号No.1234567蒸储

5、水，mLr5r54321:0:标准溶液,mL0012345,测定液按表2顺序加入蒸储水、样品溶液于培养管中，一式三份表2试管号No.1234蒸锵水，mL4321样品溶液，mL1234,热处理用棉塞或不锈钢帽盖住所有试管，100蒸汽蒸10min。,接种冷却试管至30C以下。无菌添加接种物于基础贮备培养基中，以每100mL添加2mL的比例添加，混合，将上述已接种的培养基无菌加入到和的每个测定管中，每管加5mL（其中标准曲线中号试管只加5mL未接种的培养基）。J立兰J口乔将试管固定在机械振荡器上,以每分钟振荡100200次的往复运动中，2830C之间选择一个恒定温度（土C）培养2224h。,测定从振

6、荡器上取下试管，于100C蒸5min或每管加1滴杀菌剂（Thoral），以使其停止生长。试管被任何外来微生物污染则测定无效。通过对每个试管的视觉检查进行反应的预测，未接种管是清的，标准溶液和样品中应无其他微生物生长。充分混合每一个试管（也可以加一滴消泡剂），将反应液加到比色皿内，搅拌内容物，将比色皿放入到分光光度计的比色池内，波长为540660nm读出透光率或吸光度，稳定30s，每个试管稳定时间要相同。对于未接种管，将其透光率调到100%或吸光度为0），读出其他接种空白管的读数。将接种空白管的透光率调到100%或吸光度为0），依次读出其他每个管。对每个水平的测试溶液，计算每毫升中维生素的含量，

7、计算所得值的平均数，每个管测得值不得超过该平均值的土15%。如果所得到的管数，少于所测定的四种水平的稀释液的管数的2/3，用于计算样品浓度的数据是不充分的。如果剩余管数是原来管数的2/3或更多，则可根据平均值计算其样品的含量。注：不可使用金属帽（除了不锈钢盖），这是由于试管在培养振荡过程中有金属污染的可能性。6 .结果计算X250样品中肌醇的含量（mg/100g或mg/100mL）=-xHx100（1）m1000式中：x测定管中每毫升测试溶液中肌醇含量的平均值，Pg：m样品的质量或体积，g或mL7,允许差同一样品两次测定值之差不得超过两次测定平均值的10%。方法二.气相色谱法8 .原理概要样品

8、中的肌醇与衍生剂反应后，经气相色谱时行分离定量。9 .主要试剂和仪器,主要试剂N.三甲基硅基咪口坐、三甲基氯硅烷。,仪器气相色谱仪：FID检测器。色谱柱：50%Phenylmethylcloxane,Db-17（J&w）。idm。10 .过程简述,准确称取1g样品于烧杯中，用温水溶解，转至100mL容量瓶中，定容。取该溶液放入小试管中作为测定液。,准确称取50mg肌醇标样于小烧杯中，用水溶解，转至100mL容量瓶中，定容。用吸量管取该溶液5mL于一100mL容量瓶中，用水定容。取此溶液2mL于小试管中。.将上述分别含有样品和标准溶液的试管冷冻干燥。于每个试管中加1mL内标溶液（每毫升毗口定中含的慈），盖紧塞子，放置15mino于每个试管中加的N-三甲基硅基咪口坐和L，混合，静置15min后进样。,气相色谱条件：a）柱温：140260E（5C/min）;b）检测器：FID;c）检测器温度：280C；d）进样器：split（1:40）;e）进样器温度：280C；f）进样体积：1口L;g）流速：min。11 .结果计算A/Ab200xcx200样品中肌醇含量(mg