Customer 病毒去除

1、Platzhalter Bild赛多利斯的病毒去除技术赛多利斯的病毒去除技术2.病毒过滤3.病毒灭活 4.病毒吸附 1.法规方面内容概要内容概要2.Virus Filtration3.Virus Inactivation 4.Virus Adsorption 1.法规方面检测原料血浆 (献血者监控, 检测/生产监控)生物工程 (原料,细胞系,基因稳定性)哺乳动物细胞 (细胞来源跟踪监控)验证病毒去除工艺病毒防护,病毒数降低程度,交叉污染控制检测成品法规: 安全策略Paul Ehrlich InstitutePaul Ehrlich InstitutePaul Ehrlich Institute

2、病毒去除 用户方面 - 用户须形成完备的病毒去除观念综合采用病毒灭活和病毒分离截留的方法 缺少相关的内源和外源病毒样品 法规要求病毒去除率应在 12 to 20 log10 至少使用两种病毒去除方法 至少有一种方法是针对无包膜的小病毒CPMP/ICH/295/95: Note for Guidance on Quality of Biotechnological Products.“Viral Safety Evaluation of Biotechnology Products Derived from Cell Lines of Human or Animal Origin. Octobe

3、r 1997”病毒污染- 污染机会 - 病毒颗粒和相关病毒 潜在的污染- 病毒意外污染 - 细胞系源于被病毒侵染的动物 操作处理中污染 污染的试剂ICH Q5A: Viral Safety Evaluation of Biotechnology Products Derived from Cell Lines of Human or Animal Origin, 1997病毒去除 工艺总结 -病毒去除病毒灭活病毒灭活纳滤 15nm to 75nm热灭活 溶液加热灭活 干热灭活 蒸汽灭活光照灭活 射线紫外 微波分离法 层析 乙醇抽提 其他沉淀方法化学灭活 溶煤 去垢剂 化学试剂 pH病毒裂解 高

4、压循环 超临界流体病毒去除 主要供应商 - 病毒过滤 Asahi 病毒吸附 Pall Millipore GE Healthcare Merck Biorad病毒灭活 GE Healthcare New York Blood center patent Sartorius 提供全部技术完整的病毒去除平台成品灌装亲和层析柱或其他纯化步骤病毒截留滤芯 抛弃型滤器 病毒去除病毒去除 针对所有病毒 紫外灭活 抛弃型紫外灭活装置 病毒灭活病毒灭活 针对非包膜小病毒膜吸附抛弃型层析装置病毒吸附病毒吸附 针对所有病毒 还可去除HCP, DNA / RNA 和内毒素内容概要2.病毒截留过滤3.Virus In

5、activation 4.Virus Adsorption 1.Regulatory Aspects Virosart CPV 病毒截留过滤器 -膜材质为聚醚砜典型病毒截留率 PPV 或 PP7 (约20nm粒径) ，LRV 4PR772 (约50nm 粒径) ，LRV 6完整性测试使用水 (4.5 bar max 22ml/min/10”)Sartopore 0,1m 作为预过滤蒸汽或高压灭菌病毒去除至少 3 - 4 log，并且蛋白收率 95%相关的特定和非特定的标准病毒去除特性料液情况 (大分子蛋白，宿主细胞，等) 病毒截留滤器在工艺中的位置 挑战性物质 (细胞碎片，宿主细胞等)具有可放

6、大性病毒截留滤器应验证考察的方面 CPV上表面CPV下表面0,2m和 CPV 膜电镜对比0,2m膜上表面0,2m膜下表面Virosart CPV 挑战实验，料液为 2% BSA ， PBS pH 6,9病毒粒径nm核酸型包膜Log10 TCID50/ml料液体积mlLRVPPV18-25ss-DNANo8.1506,0Reo-360-80ds-RNANo8.8507.9HAV27-32ss-RNANo5.6505.4BVDV40-70ss-RNAYes7.150 5.9SV-4042ds-DNAYes7.6506.3MuLV80-110ss-RNAYes7.850 6.2Data determ

7、ined by Analysis GmbH Kln, Germany 2004 Virosart CPV 产品线 - 5cm 抛弃型 Virosart CPV Minisart 20cm抛弃型 Virosart CPV Midisart 150cm抛弃型 Virosart CPV 囊式滤器 0.7m抛弃型 Virosart CPV 囊式滤器 1.4m抛弃型 Virosart CPV 囊式滤器 2.1m抛弃型 Virosart CPV 囊式滤器Analysis Dr. Andreas ImmelmannBiomedizinische Test GmbHGottfried Hagen-Strass

8、e 62D 51105 KlnGermanyPhone: +49-221-346-1800Fax: +49-221-346-1801Email: infoanalysis-gmbh.dewww.anaylsis-gmbh.de德国独立的病毒实验室 New Lab BioQuality AG Dr. Klaus KellingsMax Planck- Srasse 15AD 40699 ErkrathGermanyPhone: +49-211-92-55-300Fax: +49-211-92-55-333Email: infonewlab.dewww.newlab.deVirosart CPV

9、文件 -Virosart CPV launch packageVirosart CPV 完整的文件 -文件货号产品手册85030-521-89产品信息85030-522-03操作手册SPK6520-e05021验证指南85030-522-02病毒信息指南85030-521-91Virosart CPV 标准滤芯订货信息 - 产品货号Virosart CPV 10” 滤芯5452528V1Virosart CPV 20” 滤芯5452528V2Virosart CPV 30” 滤芯5452528V3Virosart CPV 囊式滤器定货信息 - 产品货号Virosart CPV 10” Maxi

10、Caps5452528V1-SSVirosart CPV 20” MaxiCaps5452528V2-SS Virosart CPV 30” MaxiCaps5452528V3-SS 内容概要2.Virus Filtration3.病毒紫外灭活 4.Virus Adsorption 1.Regulatory Aspects 紫外灭活自1940s紫外灭活病毒方法已经被证实有效Wolf AM, Mason J, et al. (1947). Ultraviolet irradiation of human plasma to control homologous serum jaundice. J

11、AMA 135: 476 - 477.最新的研究已经确认紫外法是一种有效的病毒灭活方法Hart H, Reid K & Hart W (1993). Inactivation of viruses during ultraviolet light treatment of human intravenous immunoglobulin and albumin. Vox Sang. 64: 82 88Chin S, Jin R, et al. (1997). Virucidal treatment of blood protein products with UVC radiation

12、. Photochem. Photobiol. 65: 432 435Wang J, Mauser A, Chao SF, Remington K, Treckmann R, Kaiser K, Pifat D, Hotta J. Virus inactivation and protein recovery in a novel ultraviolet-C reactor. Vox Sang. 2004 May;86(4):230-8.紫外灭活技术 X-raysUltraviolet LightVisible LightInfrared780400315280200100Hg low pre

13、ssurelamp 254 nmSpectral curve ofDNA/RNA damageWavelength nmUVCUVBUVAVacuum UV破坏病毒的 DNA / RNA Dean Vortices 迪恩涡技术优化病毒灭活工艺Dean Vorticeslight intensity depth of penetration Minimised residence times; controlled mixing & within laminar flow by dean vortices紫外灭活病毒保留时间 00,511,52相对保留时间相对保留时间病毒蛋白量病毒蛋白量

14、一般反应装置 带有环状帽损伤蛋白区域低病毒灭活区域特氟龙螺旋管紫外灯石英玻璃管内部凸缘紫外灭活装置结构不同规模的紫外病毒灭活装置 2 to 20 l/h20 to 150 l/h小试规模生产规模紫外病毒灭活装置验证方面参数MuLVBVDVReo-3HAVPPV单抗收率*包膜YesYesNoNoNo-核酸类型RNARNARNARNADNA-LRV at 50 J/m4,35,736,814,736,5297%LRV at 38 J/m3,33,852,562,923,1698%LRV at 30 J/m3,33,402,033,043,4098%Data determined by Analys

15、is GmbH, Germany 2004 病毒灭活：蛋白完整性研究*紫外光照能量 (J/cm)单体a活性a% 单体% 收率 mg/ml% 收率0.00077.09100%4.98100%0.00976.94100%4.9299%0.02477.00100%4.8998%0.04976.6499%4.8698%0.07276.3799%4.7896%0.14475.1397%4.8197%0.28871.9193%4.4690%0.43169.4390%4.3287%(a average of triplicate samples)* Wang J, Mauser A, Chao SF, Re

16、mington K, Treckmann R, Kaiser K, Pifat D, Hotta J. Virus inactivation and protein recovery in a novel ultraviolet-C reactor. Vox Sang. 2004 May;86(4):230-8.Platzhalter Bild病毒灭活:蛋白确认研究光照处理抗体 (2mg/ml PBS 缓冲液)侵染法检测 PPV病毒去除 log10 值 4 log10 PPV 抗体性质研究 (二维凝胶电泳, Maldi-Toff) 紫外光照处理 未进行紫外光照处理 赛多利斯公司与用户进行研发和

17、临床前研究研究紫外光照对目标蛋白的影响 在赛多利斯公司或用户处进行在赛多利斯公司或用户处进行单体活性裂解理化分析SDS 电泳, HPLC, 二维凝胶电泳. 赛多利斯公司与用户进行临床研究1st 生产期临床样品前进行病毒挑战研究生产期临床样品前进行病毒挑战研究 2nd 生产生产III 期临床样品前进行病毒挑战研究期临床样品前进行病毒挑战研究病毒灭活研究内容概要2.Virus Filtration3.Virus Inactivation 4.病毒吸附 1.Regulatory Aspects 膜层析技术: 基本原理膜层析产品与颗粒胶电镜照片对比孔径 颗粒胶与层析膜对比 -颗粒胶颗粒胶粒径分布为：

18、15 -160 m孔径分布为： 15 - 40 nm层析膜高开孔结构孔径： 250 - 3000 nm 膜层析技术: 基本原理“不是过滤膜”开放孔结构 3 m低压力降单纯的对流传质 扩散效应最小化应用于去除：宿主细胞蛋白，DNA，内毒素和病毒膜层析产品与颗粒胶电镜照片对比病毒去除至少 3 - 4 log，并且蛋白收率 95%相关的特定和非特定的标准病毒去除特性 物质平衡和独立的吸附机制具有可放大性膜层析系统应验证考察的方面 层析膜形成层析床单张层析膜厚度0.275 mm最多 60层叠加形成16mm厚柱床36cm 膜面积= 1ml 床体积= 30mg 载量膜床体积： 1l 到2.1ml 载量：

19、30g到 60mg 抛弃型技术 捕获，精致和病毒去除 膜层析 抛弃型实验室规模产品 -膜层析 生产规模抛弃型产品 - 膜床体积： 7ml 到 530ml 载量： 0.2 到16g抛弃型技术捕获，精致和病毒去除 膜层析 可重复使用产品 - 膜床体积： 35ml 到 2.130ml 载量： 1 到 64g 反复使用技术 捕获和精制膜层析去除病毒病毒粒径(nm) 包膜 Sartobind Q去除因子 (log10) Run 1 Sartobind Q去除因子 (log10) Run 2SV-40: Simian Virus -4045no1.25 0.461.34 0.43Reo-3: Reovir

20、us Type III75-80no4.07 0.503.62 0.42MuLV: Murine Leukemia Virus80-110yes3.80 0.394.40 0.56PRV: Pseudorabies virus150-250yes3.97 0.443.88 0.38Galliher, P., Fowler, E., Millennium Pharmaceuticals Inc.), “Validation of Impurity Removal by the CMAPATH-1H Biomanufacturing Process”IBCs Biopharmaceutical P

21、roduction Week, Paradise Point Resort San Diego, CA, November 12-15, 2001膜层析去除病毒病毒粒径(nm)包膜 Sartobind Q去除因子 (log10) Run 1 Sartobind Q去除因子 (log10) Run 2MMV: Minute Mouse Virus16 - 25no6.67 0.244.41 0.37Reo-3: Reovirus Type III75-80no7.28 0.307.53 0.29MuLV: Murine Leukemia Virus80-110yes5.57 0.256.29 0.32PRV: Pseudorabies virus