多肽切割简介

1、The Peptide Quality Standard多肽切割简介 The Peptide Quality Standard切割流程图切割流程图准备工作准备工作切割液的选择切割液的选择切割液的配制切割液的配制仪器设备的调试仪器设备的调试加入切割液并于摇床震荡加入切割液并于摇床震荡抽滤并收集滤液抽滤并收集滤液沉淀、离心、洗涤沉淀、离心、洗涤得粗品肽抽干送得粗品肽抽干送QCThe Peptide Quality Standard切割前准备工作切割前准备工作n文件和树脂一一对应检查n树脂称重n切割液配制n切割液低温储存:(-20) E液不得超过一周 F液不得超过一个月The Peptide Qua

2、lity Standard切割液的选择切割液的选择n根据肽的序列上氨基酸的不同，选用不同根据肽的序列上氨基酸的不同，选用不同的切割液，除去肽链上氨基酸的保护基团。的切割液，除去肽链上氨基酸的保护基团。含有含有Trp，Met或或Cys(Trt)YESNOE液液F液液The Peptide Quality Standard切割液的配比切割液的配比nE E液：液：TFA:TFA:茴香硫醚茴香硫醚: :苯酚苯酚:EDT:EDT:水水 =87.5:5:2.5:2.5:2.5 =87.5:5:2.5:2.5:2.5nF F液：液：TFA:TIS:TFA:TIS:水水=95:2.5:2.5=95:2.5:2

3、.5* *注：注：苯酚的体积是指在熔点下熔融的体积，其他苯酚的体积是指在熔点下熔融的体积，其他液体为常温下的体积。液体为常温下的体积。还原切割液：还原切割液：10ml的的E液加液加100-200mg的的NH4I,0.5ml的的DMS,摇匀，静置，用上清液！摇匀，静置，用上清液！The Peptide Quality Standard切割液用量切割液用量n一般按一般按10-15ml/g 10-15ml/g 树脂加入切割液。树脂加入切割液。n如如0.2mmol0.2mmol的合成量，树脂的取代度为的合成量，树脂的取代度为0.50.5左右，这样合成前空白树脂重为左右，这样合成前空白树脂重为0.40.

4、4克，克，加上合成后由肽链引起的增重加上合成后由肽链引起的增重(15(15肽肽) )，树，树脂大约脂大约0.7g0.7g，因此，需要加入大约，因此，需要加入大约8ml8ml切切割液。割液。The Peptide Quality Standard切割时间切割时间n切割时间：是指向树脂中加入切割液开始，到用切割时间：是指向树脂中加入切割液开始，到用乙醚沉淀滤液为止这段时间。乙醚沉淀滤液为止这段时间。 大部分大部分linkerlinker用用TFATFA处理处理2.5h2.5h已经足够，但是要完全去除一些侧链已经足够，但是要完全去除一些侧链保护基团则须要延长一些时间。保护基团则须要延长一些时间。n切

5、割时间对肽链的影响：切割时间太长，肽链容切割时间对肽链的影响：切割时间太长，肽链容易断裂，粗品中的产品含量就少；切割时间太短，易断裂，粗品中的产品含量就少；切割时间太短，树脂上的肽链没能完全切下来，或者肽链上氨基树脂上的肽链没能完全切下来，或者肽链上氨基酸侧链保护基团不能完全除去。对于酸侧链保护基团不能完全除去。对于3030个以上的个以上的肽来说，适当延长时间。对于切割不完全的树脂肽来说，适当延长时间。对于切割不完全的树脂和粗品肽可依据已得粗品的质量、色谱和质谱，和粗品肽可依据已得粗品的质量、色谱和质谱，考虑重切。考虑重切。 The Peptide Quality Standard减压过滤减压

6、过滤n用切割液将附着在切割管上的树脂洗下来，用切割液将附着在切割管上的树脂洗下来，收集滤液。收集滤液。*注意：标签号码对应。包括树脂切割管、切注意：标签号码对应。包括树脂切割管、切割液收集管和砂心漏斗上的标签号码一一割液收集管和砂心漏斗上的标签号码一一对应。对应。The Peptide Quality Standard沉淀、离心、洗涤沉淀、离心、洗涤n根据大多数肽在非溶剂中不溶的特性及温根据大多数肽在非溶剂中不溶的特性及温度越低，溶解度越低的性质，我们用冷乙度越低，溶解度越低的性质，我们用冷乙醚来沉淀溶解在切割液中的多肽。醚来沉淀溶解在切割液中的多肽。n操作时应注意：操作时应注意：n1 1）、

7、看收集管中滤液的量。一般少于）、看收集管中滤液的量。一般少于15ml15ml的，的， 用一个离心管离心即可；多于用一个离心管离心即可；多于15ml15ml的要用两个离的要用两个离心管，以洗涤完全。心管，以洗涤完全。The Peptide Quality Standard 2 2）、边倒边用乙醚冲，使在乙醚中析出的肽尽量分散。如出现结块、）、边倒边用乙醚冲，使在乙醚中析出的肽尽量分散。如出现结块、抱团等现象，应用干净的玻璃棒将其打散。抱团等现象，应用干净的玻璃棒将其打散。 如用玻璃棒还不能将其打散或粘在玻璃棒上，则需将其用如用玻璃棒还不能将其打散或粘在玻璃棒上，则需将其用TFATFA溶解后再溶解

8、后再用乙醚沉淀。用乙醚沉淀。 3 3）、离心时，离心机的转速为）、离心时，离心机的转速为3500Rad/Min3500Rad/Min， 离心时间为离心时间为2min2min，确，确保肽能完全沉淀下来。保肽能完全沉淀下来。 4) 4) 如序列为短肽或者序列中疏水性氨基酸较多如序列为短肽或者序列中疏水性氨基酸较多, ,用乙醚沉淀时需加入用乙醚沉淀时需加入一定量的石油醚一定量的石油醚, ,再离心。如还不能沉淀下来，则需将上清液旋蒸。再离心。如还不能沉淀下来，则需将上清液旋蒸。The Peptide Quality Standard得粗品肽抽干送得粗品肽抽干送QCn将离心好的粗品肽于真空干燥器中，抽真将离心好的粗品肽于真空干燥器中，抽真空空12小时以上，送小时以上，送QC检测并复核称量粗品检测并复核称量粗品重量。重量。The Peptide Quality Standard安全防护安全防护n在切割操作中一