登革热检测规程(20220216032439)

1、登革热一登革病毒感染与机体免疫反响登革病毒感染后，潜伏期为314天，通常47天，潜伏期内采集的患者标本尚不能检 出登革病毒或相应的机体免疫反响。发病后，病毒在血液中存在的时间病毒血症期约为 7 天，病毒NS1抗原在血液存在的时间略长。发病后 45天内，可在病人的血清、血浆、白细胞、 脑脊液和尸检组织标本中别离到病毒，病毒核酸及NS1抗原在这个时期的检出率高。病人血液中抗体水平，因个体免疫状态不同而具有显著差异。假设以前没有感染过登革病毒或其他黄病 毒，或接种过黄病毒疫苗如：乙脑、黄热等，病人首次感染抗体免疫反响呈现为特异性抗 体水平缓慢升高，IgM抗体出现最早，随后出现的是IgA和IgG抗体。

2、在发病后35天的患者 中IgM抗体检出率约为50%发病后第5天的患者中检出率约为80%而在发病后第10天患者 中，约99%勺患者可检出。IgM抗体水平在发病后2周达顶峰，然后逐步下降，可保持 23个 月。IgA抗体出现略晚于IgM抗体，可保持约45天。在发病一周后，可在血液标本中检出较低 滴度的IgG抗体，之后抗体滴度缓慢升高，可持续存在多月甚至终生。如果病人属于再次感染 登革病毒登革病毒感染者以前曾感染过登革病毒，有时可能是曾接种其他黄病毒疫苗或感染 过其他黄病毒，抗体滴度可快速升高并可和多种黄病毒产生反响。主要为高水平的IgG抗体,在急性期即可检出，可持续存在 10个月以上，甚至终生。Ig

3、A抗体也可在急性期标本中检出。 再次感染登革病毒的病人恢复期早期的IgM抗体滴度明显低于首次感染，甚至无法检出，通过 计算IgM/IgG抗体比例，可以区分首次或再次登革病毒感染。IgA抗体检测试剂在临床诊断中的 应用尚处于评价阶段。登革病毒 IgM/IgG 抗体检测规程【方法】胶体金法【预期用途】登革热 Dengue Fever 是 一种由登革病毒引起的急性传染病，主要流行于热带和亚热带国家和地区。登革病毒为单股正链 RNA病毒，在分类学上属于黄病毒科，黄病毒属 flavivirus。病毒核心为 RNA与蛋白质组 成的 20 面立体对称的病毒颗粒，外层为两种糖蛋白组成的包膜，包膜含有型和群特异

4、性抗原。病毒基因编码3个结构蛋白核衣壳蛋白C,膜蛋白M,包膜蛋白E和7个非结构蛋白 NS1,NS2a,NS2b,NS3,NS4a,NS4b,NS5 。登革病毒感染可导致机体产生免疫应答，并产生病毒特异性的抗 体。初次感染者，发病后 35天可在血液中检出病毒 IgM 抗体，发病 2周后到达顶峰，可维持 23个月， 发病 1 周后可检出病毒 IgG 抗体， IgG 抗体可维持数年甚至终生。检测临床登革热病症的病人样本中登革病毒 抗体，有助于登革热的辅助诊断。【检验原理 】 采用胶体金免疫层析技术，在玻璃纤维上预包被胶体金标记的登革病毒抗原Au-Dengue-Ag 和羊IgG(Au- 羊 IgG)

5、，在硝酸纤维素膜上 IgG 检测线， IgM 检测线和对照线处分别包被鼠抗人 IgG 单克隆抗体，鼠 抗人 IgM 单克隆抗体和鼠抗羊 IgG 单克隆抗体。检测阳性标本时，样本中登革热病毒 IgG 抗体或 IgM 抗体 与 Au-Dengue-Ag 结合形成复合物，由于层析作用复合物沿纸条向前移动，经过IgG 检测线或 IgM 检测线时与预包被的鼠抗人 IgG 单抗或鼠抗人 IgM 单抗形成“ Au-Dengue-Ag Dengue 病毒抗体鼠抗 人 IgG 单抗或鼠抗人 IgM 单抗固相材料夹心物而富集显色，胶体金标记羊 IgG 那么在对照线与鼠抗羊 IgG 单克隆抗体结合富集显色，阴性标本

6、那么仅在对照线处显色。【试剂组成成分 】1 ，登革病毒 IgM/IgG 抗体试剂检测线：鼠抗人 IgM 抗体、鼠抗人 IgG 抗体 对照线：鼠抗羊 IgG 抗体结合垫：胶体金标记登革病毒抗原和胶体金标记羊 IgG2 ，梓品稀释液3 ， 2uL 吸管【样本要求 】1 ，检测样本为血清或血浆，防止溶血。2，血浆可用肝素、柠檬酸钠或 EDTA抗凝。3，采集后的标本及时检测，2-8C密封保存7天，长期保存需冷冻-20C，忌反复冻融。【 检验方法 】检测前先将冷藏的试剂和待测样本恢复至室温1 ， 处理好样本，取出试剂检测卡，水平放置并作好标记。2 ,用移液器吸取样本 2uL，或以试剂配置吸管吸取样本至2

7、uL刻线，滴加在检测卡样本孔S1孔。3， 在检测卡稀释液孔 S 孔滴加 2 滴 70-100uL 样品稀释液。4 ，20 分钟同观察记录结果。【结果报告 】阳性：质控线C和检测线G、检测线M丨都出现紫红色条带，表示样品中含有登革病毒IgM/IgG抗体。质控线C和检测线G都出现紫红色条带，表示样品中含有登革病毒IgG抗体。质控线C和检测线M丨都出现紫红色条带，表示样品中含有登革病毒IgM抗体。阴性：仅在质控线C出现紫红色条带，检测区 M、检测区G丨未出现紫红色条 带，表示样品中没有登革病 毒抗体或抗体浓度低于试剂的检出水平。无效：质控线C未出现紫红色条带，表示操作不当或者试剂失效，应重新检测。【

8、报告方式 】检测线G、检测线M丨都出现紫红色条带登革热病毒 IgM/IgG 抗体测定： IgM 阳性 + IgG 阳性 +【考前须知 】1 ， 检测按照传染病实验管理标准和生物平安守那么的规定操作，实验后按传染性废物处理。2 ， 操作应严格按说明书进行。3 ， 保持良好的实验室环境。4， 严格控制在 20 分钟内观察结果， 20 分钟后观察结果无效 。【传染性 废物处理】1 ， 所有实验室工作人员应熟知并遵守本制度；由专职清洁人员负责实验废弃物处理。 实验室放置装有垃圾袋的有盖污物桶，并贴有明显标识。2 ， 每天实验结束后，及时清理并妥善包裹废弃物，送出实验室并作好实验室废弃物处理记录。3 ，

9、 不具有传染性的实验室废弃物如产品包装材料和废纸等办公垃圾，应与传染性废弃物区分开来，作为普通废弃物单独送医疗废物集中处理中心统一处理。4 ， 血袋、装血液的试管、离心管、吸头等由科室洗涤人员用有效氯浓度 0.3 的爱尔施消毒液充分浸泡60120分钟，进行初步消毒处理。5 ， 进行初步消毒处理的血袋、试管和与受血液污染的棉球、纸片、一次性口罩、帽子等传染性或可疑传染性废弃物一起放入黄色胶袋中，由废物集中处理中心无害化处理中心封 闭运输至燃烧中心进行无害化燃烧处理。6， 每天实验前，在清洗盆中参加半盆有效氯浓度 0.3 %的爱尔施消毒液，实验中将玻片、离心管、吸管、吸头等回收物品充分浸泡 601

10、20 分钟，进行初步消毒处理。7 ， 收集一天的污染物品用流动水冲洗，然后进行高压灭菌处理。登革热 NS1 抗原检测规程【方法】胶体金法【预期用途】本试剂采用免疫层析技术，定性检测人血清、血浆或者全血中的登革热 NS1 抗原。适用于登革病毒感染的早 期辅助诊断和筛查。登革热是由登革病毒分 4 个血清型， DENV 1 4引起的，通过伊蚊传播的急性传染病，多见于热带和亚 热带地区。临床类型可分为登革热、登革热出血热和登革休克综合征三种，该病传播迅速，主要临床表现包 括发热、头痛、全身肌肉关节疼痛、极度乏力、皮疹、淋巴结肿大、白细胞减少。初次感染登革热病毒患者， 一般临床表现较轻，可表现为无病症隐

11、性感染，或轻型、典型登革热；再次感染异型登革病毒时，病情较为 严重，临床上出现登革出血热和休克综合征的概率增加，病死率高，是一种具有严重危害性的传染病。【检验原理 】 本试剂方法采用免疫层析法，应用双抗体夹心法定性检测登革热NS1 抗原。登革热NS1抗原测试条的硝酸纤维素膜检测区 T上包被有抗登革热病毒 NS1蛋白单克隆抗体，质控区C 上包被有抗鼠 IgG 多克隆抗体，当样本中含有登革病毒 NS1 抗原且浓度高于最低检出限时，标记有胶体金的 抗登革病毒 NS1 蛋白单克隆抗体下血清、血浆或全血中的登革病毒 NS1 抗原结合形成反响复合物，在层析作 用下复合物没着硝酸纤维素膜向前移动，与硝酸纤维

12、素膜上检测区T预先包被的抗登革热 NS1抗原单克隆抗体结合形成复合物，并最终形成一条肉眼可见的红色反响线，此时的结果为阳性。相反，当样本中不含有 登革病毒NS1抗原且浓度低于最低检出限时，那么检测区 T无红色反响线出现，此时结果为阴性。无论样本 中是否有NSI抗原，在质控区C都会形成一条红色反响线。【主要组成成份 】 试剂盒由测试卡和吸管组成。测试条由硝酸纤维素膜、样品垫、结合垫、吸水纸、 PVC 板等其他支持物组。硝酸纤维素膜包被有抗登革病毒 NS1 蛋白单克隆抗体和抗鼠 IgG 多克隆抗体，结合垫含 有胶 体金标记的抗登革病毒 NS1 蛋白单克隆抗体。【样本要求 】1 ， 血清、血桨、全血

13、样本均可用于测试。2 ， 全血样本采集后尽可能立即使用，如不能立即检测可蒋样本放置于 2-8C 冷藏，全血样本需在 3 天内完成检测。3， 血清 /血桨如不能及时测试应放置于 2-8C 冷藏，可保存两周，如需长期保存应置 -20C 冷冻保存，测 试前注意恢复至室温。4， 注意高浓度的黄疸样本、高度溶血样本、或肉眼可见多絮状沉积的乳糜血样本，将对检测结果的干扰， 因此在使用样本前注意样本的外观。检验方法 】检测前先将冷藏的试剂和待测样本恢复至室温1 ，取出测试卡平放于台上，并做好标记2 ，有吸管吸取样本血清 / 血桨/ 全血样本，垂直参加 2-3 滴约 60-80uL 于加样孔中，3， 15-20 分钟观察显示结果， 30 分钟后显示结果无临床意义。【结果报告 】NS1抗原阳性：两条红色线，即在检测区 T及质控区C各出现一条红色线。NS1抗原阳性：一条红色线，即在质控区 C出现一条红色。无效：即在质控区C无红色反响线出现。此时建义重测。【检验方法局限性 】1 ， 当测试样本中登革病毒 NS1 抗原低于最低检出限或在感染的某个阶段不存在将会出现阴性结果，