阿司匹林抗血小板凝集和抗血栓作用及机制研究ppt课件

1、阿司匹林抗血小板凝集和抗血栓作用及机制研讨设计成员：设计成员：研讨背景研讨背景阿司匹林: 解热镇痛抗炎药； 对血小板聚集有抑制造用，阻止血 栓构成； 临床可用于预防暂时性脑缺血发作、心肌堵塞、心房颤抖、人工心脏瓣膜、动静脉瘘或其他手术后的血栓构成研讨背景研讨背景血栓：活动物机体在心脏或血管内某一部分因血液成分发生析出、凝集和凝固所构成的固体状物质血栓构成的机理：心、血管内膜损伤血流形状改动血液性质改动研讨背景研讨背景抗血栓药分为：抗凝血药、抗血小板聚集药和溶血栓药抗血小板聚集药分为三代：阿司匹林为第一代，噻氯匹啶为第二代，血小板糖蛋白b/a受体拮抗剂为第三代。其中，血小板糖蛋白b/a受体拮抗剂

2、的问世是抗血小板治疗中的一个重要里程碑。实验目的实验目的讨论阿司匹林抗血小板的聚集和抗血栓作用及机制实验资料实验资料实验动物：雄性实验动物：雄性SDSD大鼠大鼠4040只只, ,体体重重200g200g左右左右实验器材：微循环察看分析系实验器材：微循环察看分析系统，冷光源，统，冷光源， ChronoLog 591ChronoLog 591全血血小板聚全血血小板聚集仪及配套设备，集仪及配套设备， TXB2 TXB2和和6-6-keto-PGF1keto-PGF1放射免疫分析测定放射免疫分析测定盒，低速离心机，聚苯乙烯离盒，低速离心机，聚苯乙烯离心管，一次性无菌塑料注射器，心管，一次性无菌塑料注射

3、器，温浴槽，胃管，开口器温浴槽，胃管，开口器实验药品：实验药品：0.25mg/ml0.25mg/ml二磷酸二磷酸腺苷腺苷ADPADP，3.8%3.8%枸椽酸钠枸椽酸钠( (柠檬酸钠柠檬酸钠), ),阿司匹林注射液，阿司匹林注射液，生理盐水，孟加拉红溶液，生理盐水，孟加拉红溶液，0.3%0.3%戊巴比妥钠戊巴比妥钠TXB2和和6-keto-PGF1放射放射免疫分析测定盒免疫分析测定盒ChronoLog 591全血血小板全血血小板聚集仪聚集仪实验步骤实验步骤复制血栓大鼠模型复制血栓大鼠模型尾部静注孟加拉红溶液尾部静注孟加拉红溶液15mg/kg15mg/kg；0.3%0.3%戊巴比妥钠麻醉戊巴比妥钠

4、麻醉60mg/kg60mg/kg；耳部平铺，察看并记录大鼠耳廓耳部平铺，察看并记录大鼠耳廓目的血管的血流形状；目的血管的血流形状；用波长为用波长为540nm540nm的冷光源照射大的冷光源照射大鼠耳廓目的血管，察看并记录血鼠耳廓目的血管，察看并记录血流形状，以不同时间点血流速度流形状，以不同时间点血流速度及血流完全停顿的时间作为评价及血流完全停顿的时间作为评价血栓构成的目的。血栓构成的目的。实验步骤实验步骤阿司匹林抗血小板聚集测定阿司匹林抗血小板聚集测定 1. 1. 分组及给药分组及给药 3030只只SDSD雄性大鼠称重标志，雄性大鼠称重标志，随机分为随机分为6 6组，每组组，每组5 5只只

5、2 2血小板聚集率测定血小板聚集率测定 取阿司匹林灌胃前自每组取阿司匹林灌胃前自每组大鼠腹腔取血大鼠腹腔取血0.5ml0.5ml测定血小板聚测定血小板聚集率集率 3 3TXB2TXB2、6-keto-PGF16-keto-PGF1测定测定原理原理 膜磷脂膜磷脂磷脂酶磷脂酶A2环氧酶环氧酶COX-1花生四烯酸花生四烯酸PGG2,PGH2PGG2,PGH2TXA2合成酶合成酶PGI2合成酶合成酶PGI2TXA2促进血小板聚集；促进血小板聚集；收缩血管收缩血管抑制血小板凝集抑制血小板凝集;扩张血管扩张血管TXB26-keto-PGF1aTXB2TXB2、6-keto-PGF16-keto-PGF1测

6、测定定在以上结果中找出阿司匹林抗凝效果最正确时剂量。取十只老鼠分两组，a空白组，b治疗组，按原方法复制大鼠模型。第一天，空腹静脉抽血0.5ml，试管3500r/min离心20min，取上清液，放射免疫法测定TXB2、6-keto-PGF1程度。a组大鼠生理盐水灌胃7d，按上面选出的最正确时剂量;b组大鼠阿司匹林注射液灌胃7d，按上面选出的最正确时剂量。第8天，按照上述方法反复测定TXB2、6-keto-PGF1程度。免疫组化免疫组化SPSP法测定法测定COXCOX一一1 1在血小板中在血小板中表达表达 空腹，腹腔静脉采血空腹，腹腔静脉采血5 mL5 mL； 离心分别富血小板血浆；离心分别富血小

7、板血浆； 血小板制片血小板制片 SPSP染色染色 光镜下结果判别：血小板染色呈棕褐光镜下结果判别：血小板染色呈棕褐色或棕黄色为阳性色或棕黄色为阳性(cox-1(cox-1的定位的定位) )，每，每张切片高倍镜下随机取张切片高倍镜下随机取5 5个视野，经图个视野，经图像分析仪进展定量吸光度扫描，求其像分析仪进展定量吸光度扫描，求其阳性信号平均吸光度值。阳性信号平均吸光度值。察看记录察看记录阿司匹林抗血小板作用凝集率阿司匹林抗血小板作用凝集率组别组别 灌胃前灌胃前 灌胃后灌胃后minmin123450察看记录察看记录治疗前后治疗前后TXB2，6-keto-PGF2含量比较含量比较组别组别AB TX

8、B2 6-keto-PGF2 TXB2 6-keto-PGF2 治疗前治疗前 治疗后治疗后 治疗前治疗前 治疗后治疗后组别组别对照组对照组低凝组低凝组中凝组中凝组高凝组高凝组 吸光度值吸光度值 1 2 3 4 5 平均值平均值COX-1蛋白染色后吸光度测定值记录表蛋白染色后吸光度测定值记录表预期结果预期结果血小板聚集率的测定中，对照组的血小板聚集率的测定中，对照组的聚集率最大，实验组都不同程度地聚集率最大，实验组都不同程度地降低；降低；TXB2TXB2明显下降，明显下降，6-keto-PGF1a6-keto-PGF1a细细微下降；微下降；各组血小板各组血小板COXCOX一一1 1表达程度表达程度( (即吸即吸光度值光度值) )大小不一，其中对照组吸大小不一，其中对照组吸光度最小、其他三组吸光度值随所光度最小、其他三组吸光度值随所测血小板凝聚率值的增大而增大测血小板凝聚率值的增大而增大预期结论预期结论阿司匹林具有抗血小板凝集作用；阿司匹林具有抗血小板凝集作用；阿司