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1、聚合酶链反应聚合酶链反应及基因突变检测方法及基因突变检测方法上海交通大学医学院刘湘帆 讲师PCR原理原理5533d.NTPs耐热DNA聚合酶引物5353535353535353添加反应混合液添加反应混合液及样本及样本变性变性535353535353退火退火加入试管中加入试管中延伸延伸53535353继续延伸继续延伸535355TaqTaq353TaqTaq55循环循环PCR原理原理5353535355335353第二个循环第二个循环4个拷贝个拷贝第三个循环第三个循环8个拷贝个拷贝53535353535353535353533553535353第第n个循环个循环2n个拷贝个拷贝PCR原理原理94

2、 C(30 s)40-60 C(30 s)72 C(30-60 s/kb)MeltAnnealExtendThe Polymerase Chain Reaction (PCR)1820-30X94 C(30 s)40-60 C(30 s)72 C(30-60 s/kb)MeltAnnealExtendCycle #2NIH20-30X引物浓度：引物浓度：0.1 0.2umol/L,浓度过高容易生成引物二聚体浓度过高容易生成引物二聚体n指数增长期n线形增长期n平台期循环数 # 理论值 实际值Log 产物DNAPCR过程的实时监测绝对定量绝对定量 PCR1.外参照系统的设置2.内参照系统的设置 实

3、时定量 PCR 对核酸扩增反应进行直接和动态的监测， 实现对靶基因的实时定量分析TaqManTM5533d.NTPsThermal Stable DNA PolymerasePrimers5353535353535353Add Master Mix and SampleDenaturation535353535353AnnealingReaction TubeTaql53RQProbe53RQ5353TaqManTMExtension Step531. Strand DisplacementTaq3QR5533QTaqR52. Cleavage3. PolymerizationComplete53QTaqR354. Detection533QTaqR5l lR53RQ实时定量RT-PCR检测CEA基因拷贝数在监测胃肠癌微转移中的应用正常成人体内CEA基因表达胃肠癌肿瘤组织中CEA基因的表达胃肠癌患者外周血中CEA基因的表达DMD基因外显子缺失的检测基因外显子缺失的检测B

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