3_药物的杂质检查--

1、1第三章第三章 药物的杂质检查药物的杂质检查2 一、掌握一般杂质检查的原理、方法和计一、掌握一般杂质检查的原理、方法和计算。算。 二、熟悉特殊杂质检查的方法和原理。二、熟悉特殊杂质检查的方法和原理。 三、了解热分析在药物分析中的应用。三、了解热分析在药物分析中的应用。 药典中检查项下包括：药典中检查项下包括： 有效性：有效性： 药物生物利用度药物生物利用度 均一性均一性 ：含量均匀度、溶出度、重量差异：含量均匀度、溶出度、重量差异 纯度检查：纯度检查： 药物中杂质的控制药物中杂质的控制 安全性：安全性： 异常毒性、热源、无菌异常毒性、热源、无菌第一节第一节 概概 述述2.2.杂质杂质(Impu

2、rities) 指药物中存在的无治疗作用或影响药物的稳定性和疗效，指药物中存在的无治疗作用或影响药物的稳定性和疗效，甚至对机体健康有害的物质。甚至对机体健康有害的物质。3 3、药物纯度与试剂纯度、药物纯度与试剂纯度 药物的纯度和化学试剂的纯度在要求上不同：药物的纯度和化学试剂的纯度在要求上不同：药物只有合格品与不合格品；药物只有合格品与不合格品；一般化学试剂分为一般化学试剂分为4 4个等级（基准试剂、优级纯、分析纯、个等级（基准试剂、优级纯、分析纯、 化学纯）化学纯）一、药物纯度的概念与要求一、药物纯度的概念与要求1.纯度（纯度（Purities）药物的纯净程度药物的纯净程度合成过程中，原料不

3、纯或反应不完全，中间体、合成过程中，原料不纯或反应不完全，中间体、副产物在精制中未除尽副产物在精制中未除尽制剂过程制剂过程试剂、溶剂、还原剂残留试剂、溶剂、还原剂残留异构体、多晶体异构体、多晶体使用的金属器皿、装置、工具引入的金属杂质使用的金属器皿、装置、工具引入的金属杂质生产生产过程过程贮藏贮藏过程过程1杂质的来源杂质的来源在温度、湿度、日光、空气等外界条件影响下，或在温度、湿度、日光、空气等外界条件影响下，或因微生物的作用，引起药物发生水解、氧化、分解、因微生物的作用，引起药物发生水解、氧化、分解、异构化、晶型转变、聚合、潮解和发霉等变化。异构化、晶型转变、聚合、潮解和发霉等变化。l如：具

4、有酯键、酰胺、环酰胺、卤代烃等药物易水解；具有如：具有酯键、酰胺、环酰胺、卤代烃等药物易水解；具有Ar-OH , -SH , -NO2 , -CHO , C=C-C=C等结构的药物在空气中易氧化。等结构的药物在空气中易氧化。工业用工业用NaCl (Br-、I-、SO42-、K+、Ca2+、Mg2+、Fe3+)BaCl2 , , 过滤（除过滤（除SO42-）滤滤 液液Na2CO3 , ,过滤（除过滤（除Ba2+ 、 Ca2+、Mg2+）滤滤 液液稀稀HCl中和中和蒸发、重结晶蒸发、重结晶药用药用NaCl需检查项目：需检查项目： Ba2+ 、SO42- 、Ca2+、Mg2+、酸碱度、澄清度、酸碱度

5、、澄清度、 K+、 I- 、 Br-、铁盐、砷盐、重金属、铁盐、砷盐、重金属)盐酸金霉素盐酸金霉素-晶型晶型H2O-晶型晶型麻醉乙醚麻醉乙醚日光、空气日光、空气醛、过氧化物醛、过氧化物OH-,H2O青霉噻唑酸青霉噻唑酸分解分解青霉醛、青霉胺青霉醛、青霉胺青霉素青霉素按毒性分类按毒性分类毒性杂质和信号杂质毒性杂质和信号杂质按来源分类按来源分类按理化性质分类按理化性质分类工艺杂质、降解杂质、反应工艺杂质、降解杂质、反应物和试剂中混物和试剂中混入的杂质入的杂质有机杂质、无机杂质、残留有机杂质、无机杂质、残留溶剂溶剂一般杂质一般杂质特殊杂质特殊杂质v一般杂质一般杂质：在自然界中分布较广泛，在多种药物：

6、在自然界中分布较广泛，在多种药物的生产和贮存过程中易引入的杂质，如酸、碱、的生产和贮存过程中易引入的杂质，如酸、碱、水分、水分、Cl-、SO42-、铁盐、重金属、砷盐、残渣等。、铁盐、重金属、砷盐、残渣等。v 特殊杂质特殊杂质：根据药物的性质和一定的生产方法与：根据药物的性质和一定的生产方法与工艺条件可能引入的杂质，是某种药物所特有的。工艺条件可能引入的杂质，是某种药物所特有的。l定义定义 ：指药物中所含杂质的最大允许量：指药物中所含杂质的最大允许量杂质限量杂质限量=杂质最大允许量杂质最大允许量供试品量供试品量100%单位通常以单位通常以%或百万分之几（或百万分之几（ppm , 106)表示。

7、表示。1 1、杂质限量、杂质限量 杂质限量对于不同杂质各不相同。如杂质限量对于不同杂质各不相同。如As对对人体毒性大，其限量规定较严，一般最大限量人体毒性大，其限量规定较严，一般最大限量不超过百万分之十（不超过百万分之十（10 ppm）；如）；如Pb重金属，重金属，允许存在的最大限量一般不超过百万分之五十允许存在的最大限量一般不超过百万分之五十（50 ppm）。）。2 2 限量计算限量计算杂杂质质限限量量控控制制限量检查限量检查对照法对照法灵敏度法灵敏度法比较法比较法定量测定杂质含量定量测定杂质含量 以待检杂质标准液一定量为对照，以待检杂质标准液一定量为对照，将供试品、对照分别置一支纳氏比色管

8、将供试品、对照分别置一支纳氏比色管或锥形瓶中，在相同条件处理后，比较或锥形瓶中，在相同条件处理后，比较反应结果。反应结果。 在供试液中直接加入试剂，在一定在供试液中直接加入试剂，在一定反应条件下观察有无反应出现。反应条件下观察有无反应出现。 取一定量供试品测定特定待检杂取一定量供试品测定特定待检杂质的参数与规定的限量比较。质的参数与规定的限量比较。l计算：计算： 杂质限量杂质限量=杂质最大允许量杂质最大允许量供试品量供试品量 100%=标准溶液浓度标准溶液浓度标准溶液体积标准溶液体积供试品供试品量量100%即：即：L =C VS100%L-杂质限量杂质限量S-供试品量供试品量C、V-标准液浓度

9、、体积标准液浓度、体积计算时应注意：单位换算、供试液或标准液的稀释倍数。计算时应注意：单位换算、供试液或标准液的稀释倍数。示例一 茶苯拉明中氯化物检查 取本品取本品0.30g 置置200 ml量瓶量瓶中，加水中，加水50ml、氨试液、氨试液3ml和和10%硝酸铵溶液硝酸铵溶液6ml，置，置水浴水浴上加热上加热5min，加硝酸银试液，加硝酸银试液25ml，摇匀，再置水浴上加热摇匀，再置水浴上加热15min，并时时振摇，放冷，加水稀释至，并时时振摇，放冷，加水稀释至刻度，摇匀，放置刻度，摇匀，放置15min，滤过，取续滤液，滤过，取续滤液25ml置纳氏比色管中，置纳氏比色管中，加加稀硝酸稀硝酸10

10、ml，加水稀释至，加水稀释至50ml，摇匀，在暗处放置，摇匀，在暗处放置5min，与标，与标准氯化钠溶液准氯化钠溶液( (10gCl-/ml)1.5 ml制成的对照液比较，求氯化物制成的对照液比较，求氯化物的限量。的限量。示例三 肾上腺素上酮体的检查 取本品取本品0.2g, ,置置100ml量瓶中，加盐酸溶液量瓶中，加盐酸溶液(9-2000)溶解并溶解并稀释至刻度，摇匀，在稀释至刻度，摇匀，在310nm处测定吸光度不得超过处测定吸光度不得超过0.05，酮，酮体的百分吸收系数为体的百分吸收系数为435，求酮体的限量，求酮体的限量V=100 mlC=A/E=0.05/435=1.1510-4 g/

11、100ml S=0.2 gl（1）国家生产实际情况：工艺条件、设备等。）国家生产实际情况：工艺条件、设备等。l（2）杂质对人体危害程度：）杂质对人体危害程度：As、Pb、CN-等。等。l（3）用药途径、周期、剂量：）用药途径、周期、剂量： 外用药外用药 周期长周期长 限量要求不是很严格限量要求不是很严格 内服药内服药 剂量大剂量大 限量要求较严格限量要求较严格 注射用药注射用药 限量要求严格限量要求严格l（4）参考先进国家的药典）参考先进国家的药典3 3 杂质限量制订依据杂质限量制订依据（一）氯化物（一）氯化物l1、原理、原理： Cl + Ag+l2、检查法：、检查法：HNO3 AgCl（浑浊

12、）（浑浊）供供试试品品稀稀HNO310mlH2OAgNO31ml标标准准溶溶液液稀稀HNO310mlH2OAgNO31ml 暗处放置5min(避免AgCl分解)3、反应条件、反应条件（1）灵敏度（合适的浑浊度）：）灵敏度（合适的浑浊度）： Cl 以以5080m mg/50ml （相当于（相当于 NaCl标准液标准液58ml）为宜，）为宜， AgCl的浊度梯度明显。的浊度梯度明显。（2）酸及酸度：）酸及酸度：HNO3 加入量：加入量：10ml稀稀HNO3 或或1 ml浓浓HNO3 /50ml 加入作用：加速加入作用：加速AgCl浑浊的生成，又可防止形成浑浊的生成，又可防止形成Ag2CO3、Ag2

13、O、Ag3PO4。（3）温度：）温度：l以以3040 产生的浑浊最大，结果也稳定，但供试液与对照液产生的浑浊最大，结果也稳定，但供试液与对照液相同条件下处理，仍可在室温进行。相同条件下处理，仍可在室温进行。（4）避光：暗处放置）避光：暗处放置5分钟后比较。从比色管上方向下观察。分钟后比较。从比色管上方向下观察。（1）供试液不澄明：）供试液不澄明：l应过滤，其滤纸应用含应过滤，其滤纸应用含HNO3 的蒸馏水洗净。的蒸馏水洗净。HNO3 + 3Cl- +3H+Cl2 +2H2O +NOClCl2 +NO4 4、干扰及排除、干扰及排除(2) 供试液有色：供试液有色：l可利用本身颜色为背景或外加试剂调

14、色。可利用本身颜色为背景或外加试剂调色。KMnO4 （ Cl- ）C2H5OHMn2+ （ Cl- ）枸橼酸铁铵枸橼酸铁铵（ Cl- ）两等份两等份供试供试对照对照AgNO3过滤过滤标准液标准液AgNO3HNO3浑浊浑浊内消色法内消色法外消色法外消色法 NaHCO3 （ Cl- ）CO2+Cl-NaI (Cl-)HNO330%H2O2I2Cl-（无色）（无色）（3 3）药物干扰：）药物干扰：无机卤素药物：无机卤素药物：CO32-药物：药物：l标准液：标准液：K2SO4 ( 0.1mg SO42-/ml )l灵敏度：标准灵敏度：标准K2SO4 1.0-5.0 ml l酸及酸度：酸及酸度：HCl

15、稀稀HCl 2 ml/50 ml （pH=1)lHCl作用：加速作用：加速BaSO4的生成，又可防止生成的生成，又可防止生成BaCO3、Ba3(PO4)2等。等。SO42-+ Ba2+HClBaSO4(浑浊）浑浊）原理：原理：Fe3+ 6SCN稀稀HClFe(SCN)63- （红色，比色）（红色，比色）1 1、原理、原理：2 2、检查法、检查法：ChP、USP显色，立即与同法制成的显色，立即与同法制成的对照溶液比较对照溶液比较加水溶解加水溶解25ml稀稀HCl4ml过硫酸铵过硫酸铵 50mg加水稀释加水稀释35ml30%硫氰酸铵溶液硫氰酸铵溶液3ml加水定容加水定容供试品供试品（2）酸：稀）酸

16、：稀HCll在中性或碱性液中，在中性或碱性液中， Fe3+可水解生成棕色的水合羟基铁离可水解生成棕色的水合羟基铁离子或红棕色的子或红棕色的Fe(OH)3沉淀，故反应应在酸性液中进行。沉淀，故反应应在酸性液中进行。l由于由于HNO3有强氧化性，可能使有强氧化性，可能使SCN被破坏，且被破坏，且HNO3中中含有含有HNO2，能与，能与SCN生成红色化合物（生成红色化合物（NOSCN），故不），故不能选用能选用HNO3。3 3、反应条件、反应条件：（1）供试品取样量：目视比色）供试品取样量：目视比色Fe3+以以10-50m mg/50ml为宜，相为宜，相当于当于10 m mg Fe3+ /ml的硫酸

17、铁铵标准液的硫酸铁铵标准液15ml，色泽梯度明显。，色泽梯度明显。25l HNO3: 必须加热煮沸除去必须加热煮沸除去NO，因，因HNO2可能与可能与SCN生生成红色化合物（成红色化合物（NOSCN）。）。 （3）加入氧化剂：）加入氧化剂： 使使Fe2+ Fe3+ l 过硫酸铵过硫酸铵：2Fe2+ （NH4)2S2O8HCl2Fe3+（NH4)2SO4SO42-+注意事项：注意事项： 铁盐与硫氰酸的反应是可逆反应，加入过量的硫铁盐与硫氰酸的反应是可逆反应，加入过量的硫氰酸铵，不仅可以增加生成配位离子的稳定性，提高氰酸铵，不仅可以增加生成配位离子的稳定性，提高反应灵敏度，还能消除反应灵敏度，还能

18、消除Cl-，PO43-，SO42-，枸橼酸根，枸橼酸根阴离子等与铁盐形成配合物而引起的干扰。阴离子等与铁盐形成配合物而引起的干扰。 若供试液管与对照液管色调不一致，或所呈硫若供试液管与对照液管色调不一致，或所呈硫氰酸铁的颜色较浅不便比较时，可分别转至分液漏氰酸铁的颜色较浅不便比较时，可分别转至分液漏斗中，各加正丁醇或异戊醇提取，分取醇层比色。斗中，各加正丁醇或异戊醇提取，分取醇层比色。具环状结构的有机药物，需经具环状结构的有机药物，需经700700800800炽灼破坏处理后再炽灼破坏处理后再依法检查。依法检查。l重金属：在规定条件下能与硫代乙酰胺或硫化钠显色的金属，重金属：在规定条件下能与硫代

19、乙酰胺或硫化钠显色的金属，如如Ag、Hg、Pb、Cd、Bi、As、Zn、Co、Ni、Cu、Sb、Sn等。其中以等。其中以Pb最为普遍，故以最为普遍，故以Pb为代表。为代表。 第一法第一法第四法第四法重金属含量低的药物重金属含量低的药物(25m mg)第三法第三法使用范围使用范围微孔滤膜法微孔滤膜法硫化钠法硫化钠法溶于碱性水溶液而难于溶于稀酸或溶于碱性水溶液而难于溶于稀酸或在稀酸中生成沉淀的药物在稀酸中生成沉淀的药物方法方法硫代乙酰胺法硫代乙酰胺法溶于水、稀酸、乙醇的药物溶于水、稀酸、乙醇的药物炽灼后的硫代乙炽灼后的硫代乙酰胺法酰胺法含芳环、杂环以及难溶于水、稀酸含芳环、杂环以及难溶于水、稀酸、

20、乙醇的药物、乙醇的药物第二法第二法ChP1.1.检查法：检查法：（1 1） 第一法：第一法： 原理：原理： Pb2+ H2SpH=3.5PbS（黄色（黄色 棕黑色）棕黑色）H2S：原来采用：原来采用 FeS + HClH2S从从ChP(90版版)开始采用开始采用硫代乙酰胺硫代乙酰胺pH=3.5H2S+ CH3CONH2硫代乙酰胺优点：无恶臭，浓度易控制。硫代乙酰胺优点：无恶臭，浓度易控制。H2O如：苯佐卡因，甲硝唑等如：苯佐卡因，甲硝唑等供试品供试品500600 完全灰化完全灰化HNO3蒸干蒸干HCl金属氯化物金属氯化物水浴蒸除水浴蒸除HCl残渣，调残渣，调pHpH值值缓缓炽灼缓缓炽灼炭化炭化

21、放冷放冷H2SO4 0.5-1.0ml加热加热H2SO4 除尽除尽按第一法检查按第一法检查注意：做空白试验注意：做空白试验 如：磺胺类，巴比妥类等药物如：磺胺类，巴比妥类等药物有色供试液有色供试液CABFE滤器下部滤器下部滤器上盖滤器上盖连接头连接头辅助滤板辅助滤板D滤膜滤膜(直径直径10mm, 孔径孔径3.0m)垫圈垫圈(外径外径10mm,内径内径6mm)（1）适合的酸碱度：）适合的酸碱度： 硫代乙酰胺硫代乙酰胺 ： pH3.5 醋酸醋酸-醋酸钠缓冲液醋酸钠缓冲液 硫化钠硫化钠 ： 碱性碱性(2) 适合的比色浓度：含适合的比色浓度：含Pb1020 2 2、条件：、条件：32 （1）供试品如有

22、色，需经处理后方可检查。 A. 外消色法：在对照管中加稀焦糖溶液或其他无干扰的有色溶液。 B. 内消色法 C. 改用第四法，微孔滤膜过滤法3 3 干扰及排除干扰及排除33（2）若供试品中有微量）若供试品中有微量Fe3+存在，会氧化硫化氢生成存在，会氧化硫化氢生成单质硫，干扰比色，加入抗坏血酸或盐酸羟胺（单质硫，干扰比色，加入抗坏血酸或盐酸羟胺（0.51.0g）还原）还原Fe3+为为Fe2+，可消除干扰。，可消除干扰。（3）若供试品为铁盐，）若供试品为铁盐，Fe3+在盐酸中生成在盐酸中生成HFeCl 62- ，用乙醚提取除去，剩余微量铁在氨碱性溶液中，加用乙醚提取除去，剩余微量铁在氨碱性溶液中，

23、加KCN掩蔽，然后用第三法检查掩蔽，然后用第三法检查 （4）若药物本身能生成不溶性硫化物时，可加入掩蔽）若药物本身能生成不溶性硫化物时，可加入掩蔽剂消除干扰。如剂消除干扰。如ZnSO4中重金属的检查，要在碱性下中重金属的检查，要在碱性下加加KCN掩蔽掩蔽Zn2+后，依第三法检查后，依第三法检查1 1、古蔡氏法、古蔡氏法 （1）原理）原理砷斑砷斑AsO43-SnCl2KI AsO33- 新生态新生态H2AsO33-HgBr2AsH3As3+Pb(AC)2Zn + 2HCl（黄（黄棕色）棕色）l H2：由：由 Zn + 浓浓HCl制备，与三价砷生成制备，与三价砷生成AsH3气体。气体。l 酸性酸性

24、SnCl2作用：作用： As5+ As3+ KI被氧化生成的被氧化生成的I2转变为转变为I-，并与，并与Zn2+形成稳定的形成稳定的配位化合物，有利于砷化氢气体的不断生成。配位化合物，有利于砷化氢气体的不断生成。在锌粒表面形成在锌粒表面形成ZnSn齐，使氢气均匀发生。齐，使氢气均匀发生。抑制抑制Sb的干扰。的干扰。各试剂的作用：各试剂的作用：lKI作用：作用： As5+ As3+ 。 被氧化生成的被氧化生成的I2转变为转变为I-，并与，并与Zn2+形成稳定的形成稳定的配位化合物，有利于砷化氢气体的不断生成。配位化合物，有利于砷化氢气体的不断生成。 抑制抑制Sb的干扰。的干扰。l醋酸铅棉花作用：

25、除去硫化物的干扰。醋酸铅棉花作用：除去硫化物的干扰。H2S+Pb(AC) 22HAC+PbSHgS+H2SHgBr2+ 2HBr有孔玻璃有孔玻璃旋塞旋塞导气管导气管AsH3发生瓶发生瓶60mg如葡萄糖酸锑钠如葡萄糖酸锑钠概念概念：指药物在规定条件下，经干燥后减失的重指药物在规定条件下，经干燥后减失的重量。主要控制药物中的水分、挥发性物质。量。主要控制药物中的水分、挥发性物质。测定方法测定方法有：有：l1.1.常压恒温干燥法常压恒温干燥法 ：l适于对热稳定的药物，如适于对热稳定的药物，如NaClNaCl等。等。l恒重：供试品连续两次干燥或炽灼后的重量差异在恒重：供试品连续两次干燥或炽灼后的重量差

26、异在0.3mg0.3mg以下的重量。以下的重量。2.2.干燥剂干燥法干燥剂干燥法： 适于受热易分解或挥发的药物，如适于受热易分解或挥发的药物，如NHNH4 4ClCl、硝酸、硝酸异山梨酯等。异山梨酯等。l 常用干燥剂有：常用干燥剂有：P2O5、硅胶、浓、硅胶、浓H2SO43.3.减压干燥法减压干燥法： 适于熔点低、受热不稳定及难除去水的药物，适于熔点低、受热不稳定及难除去水的药物，如肾上腺素、布洛芬等。如肾上腺素、布洛芬等。4 .4 .热分析法热分析法（Thernal analysis ): 指研究物质在加热或冷却过程中发生的物理或化学变化与温度变化的关系的一种分析方法。l常用的方法有：常用的

27、方法有：（1 1）热重分析法）热重分析法（TGA)l优点：适于样品量少、贵重样品或空气中易氧化的样品，且分析速度快。供试品供试品参比物质参比物质同时升温同时升温TT =T供供T参参（2 2）差示热分析法（）差示热分析法（DTA) )1不吸热，不放热不吸热，不放热2放热放热3吸热吸热TT（3 3）差示扫描量热法（）差示扫描量热法（DSC)DSC)供试品供试品参比物质参比物质同一温度同一温度TE吸热变化，增补能量，峰向上吸热变化，增补能量，峰向上放热变化，释放能量，峰向下放热变化，释放能量，峰向下（七）炽灼残渣（七）炽灼残渣供试品供试品炭化炭化H2SO4湿润湿润700-800 灰化灰化残渣（多为金

28、属氧残渣（多为金属氧化物或无机杂质）化物或无机杂质）H2SO4硫酸盐硫酸盐（八）有机溶剂残留量（八）有机溶剂残留量 用以检查药物在生产过程中引入的有害有机溶剂，如苯、用以检查药物在生产过程中引入的有害有机溶剂，如苯、氯仿、二氯甲烷、甲苯、环氧乙烷等。氯仿、二氯甲烷、甲苯、环氧乙烷等。分类使用举例毒性乙酸、乙醚、乙酸乙酯、乙醇乙酸、乙醚、乙酸乙酯、乙醇、甲酸、甲酸推荐使用推荐使用危险性较小危险性较小三类溶剂三类溶剂避免使用避免使用苯、四氯化碳苯、四氯化碳二类溶剂二类溶剂有一定毒性有一定毒性限量使用限量使用乙腈、三氯甲烷、二氯甲烷、乙腈、三氯甲烷、二氯甲烷、吡啶、四氢呋喃、甲苯吡啶、四氢呋喃、甲苯

29、毒性较大，致癌，毒性较大，致癌，对环境有害对环境有害一类溶剂一类溶剂GC法法检查方法：检查方法：第三法溶液直接进样法毛细管柱顶空进样等温法毛细管柱顶空进样程序升温法被检查的有机溶剂数量少且极性差异较小的情况被检查的有机溶剂数量多且极性差异较大的情况分类适用范围第一法第二法中国药典方法中国药典方法（九）水分测定法（九）水分测定法3222SOHI2OHSOI%100FB(%)WA供试品中水分的含量A供试品消耗供试品消耗FisherFisher试液的体积试液的体积B空白消耗空白消耗FisherFisher试液的体积试液的体积F每每1mlFisher1mlFisher试剂相当于水的重量试剂相当于水的重

30、量(mg)(mg)W供试品的重量供试品的重量费休氏法费休氏法I2+SO2+N+H2ONHI2+NHSO4CH3指示终点方法：指示终点方法： FisherFisher试液颜色试液颜色 淡黄色淡黄色红棕色红棕色 永停法永停法甲醇甲醇l在特殊杂质检查中应用很多，具有简便、快速、不需特殊在特殊杂质检查中应用很多，具有简便、快速、不需特殊设备、灵敏度较高的优点。设备、灵敏度较高的优点。（一）色谱分析法（一）色谱分析法比移值比移值1. 薄层色谱法：薄层色谱法：原点至溶剂前沿的距离原点至溶剂前沿的距离原点至斑点中心的距离原点至斑点中心的距离 fR薄层涂布：薄层涂布：无粘合剂无粘合剂 含粘合剂：含粘合剂：常加

31、入常加入1015% 煅石膏煅石膏 (CaSO42H2O,180烘烘4h)或或0.50.7%羧甲基纤维素钠水溶液羧甲基纤维素钠水溶液 杂质对照品法杂质对照品法适用于已知杂质并能够得到杂质对照品的情况适用于已知杂质并能够得到杂质对照品的情况 供试品溶液自身稀释对照法供试品溶液自身稀释对照法 适用于杂质的结构不能确定或无杂质对照品的情况适用于杂质的结构不能确定或无杂质对照品的情况( (仅限于仅限于二者的颜色相近或相同的情况二者的颜色相近或相同的情况) ) 杂质对照品法与供试品溶液自身稀释对照法并用杂质对照品法与供试品溶液自身稀释对照法并用 适用于存在多个杂质适用于存在多个杂质 对照药物法对照药物法

32、无合适的杂质对照品，或者是供试品显示的杂质斑点颜色和无合适的杂质对照品，或者是供试品显示的杂质斑点颜色和主成分颜色有差异，难以判断限量。主成分颜色有差异，难以判断限量。检查方法检查方法枸橼酸乙胺嗪枸橼酸乙胺嗪NNCH3CONC2H5C2H5I2蒸气显色供试液中如显与对照品相应供试液中如显与对照品相应的杂质斑点，颜色与对照品的杂质斑点，颜色与对照品主斑点比较，不得更深。主斑点比较，不得更深。l规定：l 如显杂质斑点，如显杂质斑点，其颜色与对照溶其颜色与对照溶液所显主斑点相液所显主斑点相比较，不得更深比较，不得更深吡罗昔康供试液吡罗昔康供试液 吡罗昔康供试液吡罗昔康供试液 20mg/ml 0.20

33、mg/ml 吡罗昔康中检查吡罗昔康中检查“有关物质有关物质”例；氢溴酸加兰他敏中例；氢溴酸加兰他敏中检检“其它生物碱其它生物碱” 12 1-供试品液供试品液 2-氢溴酸加兰他敏氢溴酸加兰他敏2 、HPLC法法l内标法加校正因子测定法内标法加校正因子测定法：用于有杂质对照品时能够测定杂质：用于有杂质对照品时能够测定杂质的校正因子杂质的含量测定。的校正因子杂质的含量测定。l外标法外标法：用于有杂质对照品或杂质对照品易制备的情况。：用于有杂质对照品或杂质对照品易制备的情况。l加校正因子的主成分自身对照测定法加校正因子的主成分自身对照测定法：用于有杂质对照品时，：用于有杂质对照品时，杂质的含量测定杂质

34、的含量测定l不加校正因子的主成分自身对照测定法不加校正因子的主成分自身对照测定法 ：用于没有杂质对照：用于没有杂质对照品的情况品的情况l面积归一化法面积归一化法：粗略测量供试品中杂质的含量：粗略测量供试品中杂质的含量 Ai / Cif =Ar / Cr供试品供试品+内标内标 ：测定：测定i内标内标 r 杂质对照品杂质对照品 x 待检杂质待检杂质Ai / Ci f=Ax / Cx Cx = f AxAi / Ci （1 1）内标法加校正因子测定法）内标法加校正因子测定法杂质对照品杂质对照品+内标内标 ：测定校正因子：测定校正因子 l供试液、杂质对照品液分别进样测定供试液、杂质对照品液分别进样测定

35、Axmx=Ar mr mx = mr AxAr（2 2）外标法）外标法（3 3）加校正因子的主成分自身对照法）加校正因子的主成分自身对照法 =As/CsAr/CrAs-药物对照品的峰面积药物对照品的峰面积Ar-杂质对照品的峰面积杂质对照品的峰面积Cs-药物对照品的浓度药物对照品的浓度Cr-杂质对照品的浓度杂质对照品的浓度 供试溶液和供试液稀释后的对照液分别进样供试溶液和供试液稀释后的对照液分别进样： 各杂质峰面积乘以相应的各杂质峰面积乘以相应的后与对照液主成分峰面积比较。后与对照液主成分峰面积比较。 建立方法时，建立方法时，测定校正因子测定校正因子：杂质对照品杂质对照品和和药物对照药物对照品品

36、进样计算校正因子进样计算校正因子, 可直接载入正文。可直接载入正文。l无杂质对照品时采用此法。无杂质对照品时采用此法。l将供试溶液稀释成一定浓度作为对照溶液，调节检测灵敏将供试溶液稀释成一定浓度作为对照溶液，调节检测灵敏度（对照溶液主成分峰高约为满量程横的度（对照溶液主成分峰高约为满量程横的20%-25%）后，）后，分别进样，将供试溶液中各杂质峰面积及总和与对照溶液分别进样，将供试溶液中各杂质峰面积及总和与对照溶液主成分峰面积主成分峰面积比较。比较。l例例1：甲硝唑中检：甲硝唑中检“2-甲基甲基-5-硝基咪唑硝基咪唑”l供试液：供试液：0.1 mg/ml 对照溶液：对照溶液：0.01 mg/m

37、l l规定：供试液色谱图中各杂质峰面积之和不得大于对照溶液主成分峰规定：供试液色谱图中各杂质峰面积之和不得大于对照溶液主成分峰面积的面积的1%。（4 4）不加校正因子的主成分自身对照法）不加校正因子的主成分自身对照法例：氧氟沙星中检例：氧氟沙星中检“有关物质有关物质”供试液：供试液：1.2 mg/ml 对照溶液：对照溶液：2.4g/ml 规定：供试液色谱图中单个杂质峰面积不得大于规定：供试液色谱图中单个杂质峰面积不得大于对照溶液主成分峰面积（对照溶液主成分峰面积（0.2%）；各杂质峰面积）；各杂质峰面积之和不得大于对照溶液主成分峰面积的之和不得大于对照溶液主成分峰面积的2.5倍倍（0.5%）。

38、）。0.02.55.07.510.012.515.0 min010203040mV伊维菌素溶液中伊维菌素溶液中“有关物质有关物质”的检的检查查对照溶液对照溶液供试溶液供试溶液稀释稀释10倍倍A主主=72181A1+A2+A3 =672601230.02.55.07.510.012.515.0 min010203040mV（5）峰面积归一化法）峰面积归一化法总峰面积（除溶剂峰外）总峰面积（除溶剂峰外）杂质峰面积总和杂质峰面积总和100% 规定限量规定限量3 、GC法法l内标法加校正因子法：用于有杂质对照品时能够测定杂质的校内标法加校正因子法：用于有杂质对照品时能够测定杂质的校正因子杂质的含量测定

39、。正因子杂质的含量测定。l外标法：用于有杂质对照品或杂质对照品易制备的情况。外标法：用于有杂质对照品或杂质对照品易制备的情况。l峰面积归一化法：粗略测量供试品中杂质的含量峰面积归一化法：粗略测量供试品中杂质的含量 l标准溶液加入法标准溶液加入法（二）光谱分析法（二）光谱分析法1 紫外分光光度法紫外分光光度法(UV）地蒽酚地蒽酚（二羟基蒽醌）（二羟基蒽醌）432nm地蒽酚基本无吸收地蒽酚基本无吸收二羟基蒽醌最大吸收二羟基蒽醌最大吸收规定：规定：0.01%的供试溶液在的供试溶液在432nm处的处的A 0.12一定频率的红外光辐照能导致被照射物质分子在振动、转动能级上的跃迁。当分子中某些化学键或基团（具有偶极特性）的振动频率与红外辐射的频率一致时，分子便吸收此红外辐射（一种共振吸收）。若以频率连续改变的红外光辐照试样，由于试样对不同频率的红外光的吸收不同，便得到以吸光度A或透光率T为纵坐标，红外辐射波数或波长为横坐标的红外光谱图。如如 -OH：36503200cm-1有强宽峰，有强宽峰， 14