琼脂糖凝胶电泳注意事项及操作流程

1、.琼脂糖凝胶电泳注意事项及操作流程凝胶电泳操作注意事项：1. 缓冲系统：在没有离子存在时，电导率最小，DNA 不迁移，或迁移极慢，在高离子强度的缓冲液中，电导很高并产热，可能导致DNA 变性，因此应注意缓冲液的使用是否正确。长时间高压电泳时，常更新缓冲液或在两槽间进行缓冲液的循环是可取的。2. 琼脂糖：不同厂家、不同批号的琼脂糖，其杂质含量不同，影响DNA 的迁移及荧光背景的强度，应有选择地使用。3. 凝胶的制备：凝胶中所加缓冲液应与电泳槽中的相一致，溶解的凝胶应及时倒入板中，避免倒入前凝固结块。倒入板中的凝胶应避免出现气泡，影响电泳结果。4. 样品加入量：一般情况下，0.5cm 宽的梳子可加

2、0.5ug的 DNA 量，加样量的多少依据加样孔的大小及DNA 中片段的数量和大小而定，过多的量会造成加样孔超载，从而导致拖尾和弥散，对于较大的DNA 此现象更明显。5. 电泳系统的变化会影响 DNA 的迁移，加入 DNA 标准参照物进行判定是必要的。6. DNA 样品中盐浓度会影响 DNA 的迁移率，平行对照样品应使用同样的缓冲条件以消除这种影响。7. DNA 迁移率取决于琼脂糖凝胶的浓度，迁移分子的形状及大小。采用不同浓度的凝胶有可能分辨范围广泛的DNA 分子，制备琼脂糖凝胶可根据DNA 分子的范围来决定凝胶的浓度。小片段的DNA 电泳应采用聚丙烯酰胺凝胶电泳以提高分辨率。可编辑.琼脂糖加

3、样时候注意事项：1 、 用移液抢将样品加至点样孔。每孔点样的体积一般少于25ul ，因此吸取每一个样品时，操作要稳当且细心。2 、 常加一定量的蔗糖来增加样品的浓度，以使每个样品停留在各自的点样孔中。3 、 在样品中加入水溶性的阴离子追踪染料（如溴酚蓝），用以看出样品移动的距离。4 、 在一个或几个孔中加入标准分子质量样品，电泳结束后，根据已知分子质量的带的相应位置可用来做出标准曲线。5 、 电泳一般是在追踪染料泳动到胶的80% 部位时停止。注意电泳期间，电泳槽盖要安全盖好，以防止液体蒸发，又可以降低电击的可能性。6 、 电泳结束后，将胶浸没在1mg/L的溴化乙锭（ EB）中， 5min后即可

4、看到DNA 带，EB 通过插入在双螺旋的配对核苷酸之间同NDA 结合。另一种方法是电泳时，在胶中加入EB。7 、 在紫外灯下，由于EB 发出强烈的橘红色的荧光，所以可以看到DNA 带。利用这种方法检测的界限是每条带约10ng DNA。带上塑料安全眼镜可防止紫外光对眼睛的伤害。可用尺子来测量每条带至点样孔的距离。同样，利用特制的照相机和调焦器，也可以对凝胶拍照。8 、 如果要对某一条带（如质粒）进一步分析，可用小刀将含该带的凝胶切割下来，从带中回收 DNA 。可编辑.琼脂糖核酸电泳实验操作流程1.用蒸馏水将制胶模具和梳子冲洗干净，放在制胶平板上，封闭模具边缘，架好梳子；2.根据欲分离DNA 片段

5、大小用凝胶缓冲液配制适宜浓度的琼脂糖凝胶：准确称量琼脂糖干粉，加入到配胶用的三角烧瓶内，定量加入电泳缓冲液（一般2030 ml）；3.放入到微波炉内加热熔化。冷却片刻， 加入一滴荧光染料，轻轻旋转以充分混匀凝胶溶液，倒入电泳槽中，待其凝固；4.室温下 3045分钟后凝胶完全凝结，小心拔出梳子，将凝胶安放在电泳槽内；5.向电泳槽中倒入电泳缓冲液，其量以没过胶面1mm为宜，如样品孔内有气泡，应设法除去；6.在 DNA 样品中加入10 ×体积的载样缓冲液（loading buffer），混匀后，用枪将样品混合液缓慢加入被浸没的凝胶加样孔内；7.接通电源，红色为正极，黑色为负极，切记DNA 样品由负极往正极泳动(靠近加样孔的一端为负 )。一般 60 100V电压，电泳20 40min即可；8. 根据指示剂泳动的位置，判断是否终止电泳；9.电泳完毕， 关上电源， 在凝胶成像仪上观察电泳带及其位置，并与核酸分子量标准Marker比较被扩增产物的大小。琼脂糖凝胶浓度与线形DNA 的最佳分辨范围琼脂糖凝胶浓度线形DNA 的最佳分辨范围（bp ）可