第二章药物分析基础分析方法验证

1、2022-3-191需验证的项目需验证的项目验证的内容验证的内容准确度准确度防腐剂防腐剂溶出度溶出度,释放度释放度鉴别试验鉴别试验杂质检查杂质检查含量测定药品质量标准分析方法验证药品质量标准分析方法验证 精密度精密度 专属性专属性 检测限检测限 重复性重复性中间精密度中间精密度重现性重现性 2022-3-192一、准确度一、准确度(一一) 含量测定方法含量测定方法 (二二) 杂质定量测定杂质定量测定 加入已知量杂质进行测试加入已知量杂质进行测试 (三三) 数据要求数据要求 9个测定结果个测定结果3个不同浓度个不同浓度(80,100,120)每个浓度各每个浓度各3份份v 准确度系指用该方法测定的

2、结果与准确度系指用该方法测定的结果与 真实值或参考值接近的程度真实值或参考值接近的程度v 一般用回收率一般用回收率(%)表示表示 定义定义）（加入量样品含量测得总量）回收率（% 100%）（加入量测得量）回收率（% 100%2022-3-193二、精密度二、精密度1.重复性重复性p 同一分析人员同一分析人员连续测定所得结连续测定所得结果的精密度果的精密度;p 也称批内精密也称批内精密度或日内精密度度或日内精密度 2.中间精密度中间精密度p 不同时间不同不同时间不同分析人员用不同分析人员用不同设备测定结果之设备测定结果之间的精密度间的精密度p 批批/日间精密度日间精密度 3.重现性重现性 p 在

3、不同实验室在不同实验室不同人员测定结不同人员测定结果之间的精密度果之间的精密度p 法定标准采用的法定标准采用的分析方法进行分析方法进行 v同一均匀供试品多次取样测定所得同一均匀供试品多次取样测定所得 结果之间的接近程度结果之间的接近程度 v标准偏差标准偏差(s,SD);相对标准偏差相对标准偏差(RSD)v数据要求同数据要求同“准确度准确度”定义定义2022-3-194三、专属性三、专属性(一一) 鉴别反应鉴别反应 空白空白, , 结构相结构相似物或有关物质呈似物或有关物质呈负反应负反应(三三) 含量与杂质测定含量与杂质测定 含杂质或降解产含杂质或降解产物的试样中各峰能物的试样中各峰能获得分离获

4、得分离v 在其他成分在其他成分(杂质杂质,降解产物降解产物,辅料等辅料等)可能可能 存在下存在下,方法能正确测定出被测物的特性方法能正确测定出被测物的特性v 鉴别鉴别,杂质检查和含量测定方法杂质检查和含量测定方法 定义定义与应用与应用2022-3-195四、检测限四、检测限 适用于可用目视法直接评价结果的适用于可用目视法直接评价结果的 分析方法分析方法, 非仪器分析法非仪器分析法 鉴别的显色法鉴别的显色法;杂质检查的杂质检查的TLCl适用于能直观显示信号与基线噪声适用于能直观显示信号与基线噪声 水平的分析方法水平的分析方法, 如如HPLC法法 l 信噪比信噪比S/N=3(2)时的相应浓度或量时

5、的相应浓度或量p 适用于不能直观比较信噪比的仪器适用于不能直观比较信噪比的仪器 分析方法分析方法, 如如UV-Vis法法 p 检测限检测限(limit of detection, LOD)是指试样中被是指试样中被测物能被检测出的最低浓度或量测物能被检测出的最低浓度或量LOD是一种限度检验效能指标是一种限度检验效能指标,反映方法灵敏度反映方法灵敏度 1.目视法目视法 2.信噪比法信噪比法 3.标准偏差标准偏差法法 空样样空SACSfLOD332022-3-196五、定量限五、定量限杂质和降解产物用定量方法研究时杂质和降解产物用定量方法研究时, 应确定应确定LOQ LOQ的测定方法与的测定方法与L

6、OD相同相同相应的系数相应的系数(倍数倍数)不同不同, 如信噪比如信噪比S/N=10定量限定量限(limit of quantitation, LOQ )是指试样是指试样中被测物能被定量测定的最低量中被测物能被定量测定的最低量;反映方法的灵敏度反映方法的灵敏度测定结果应具有一定准确度和精密度测定结果应具有一定准确度和精密度 2022-3-197六、线性与范围六、线性与范围范围系指方法适用的高低限浓度或量的区间范围系指方法适用的高低限浓度或量的区间在试验研究开始前确定验证的范围和方法在试验研究开始前确定验证的范围和方法在范围内应能达到一定精密度在范围内应能达到一定精密度,准确度和线性准确度和线性

7、p线性系指在设计的线性系指在设计的“范围范围”内内, 响应值响应值(y)与被与被测物浓度测物浓度(x)直接呈正比关系的程度直接呈正比关系的程度 y = ax + bp系列系列(n5)供试样品测定供试样品测定,以响应信号作为被测以响应信号作为被测物浓度的函数作图物浓度的函数作图p用最小二乘法进行线性回归用最小二乘法进行线性回归; 或经数学转换后或经数学转换后再进行线性回归再进行线性回归2022-3-198六、线性与范围六、线性与范围原料药原料药/制剂含量测定制剂含量测定: 80%120% 制剂含量均匀度检查制剂含量均匀度检查: 70%130% 溶出度或释放度检查溶出度或释放度检查: 下限下限-2

8、0%上限上限+20%特殊元素含量测定特殊元素含量测定: 下限下限-20%上限上限+20%杂质测定杂质测定: 限度限度20%如果杂质检查与含量测定同时进行如果杂质检查与含量测定同时进行, 杂质限度杂质限度-20含量上限含量上限+20% u涉及定量测定的项目均需对范围进行验证涉及定量测定的项目均需对范围进行验证如如: 含量测定含量测定, 含量均匀度含量均匀度, 溶出度或释放溶出度或释放度度, 特殊元素或特殊杂质的定量检查特殊元素或特殊杂质的定量检查2022-3-199七、耐用性七、耐用性耐用性系指在测定条件有小的变动时耐用性系指在测定条件有小的变动时, 测定测定结果不受影响的承受程度结果不受影响的

9、承受程度; 体现测定条件的体现测定条件的允许变动范围允许变动范围HPLC法典型因素有法典型因素有: 流动相的组成和流动相的组成和pH值值及流速及流速, 不同厂牌或不同批号的同类型色谱不同厂牌或不同批号的同类型色谱柱柱, 柱温等柱温等 GC法典型因素有法典型因素有: 不同厂牌或批号的色谱柱不同厂牌或批号的色谱柱, 固定相固定相, 不同类型的担体不同类型的担体, 柱温柱温, 进样口和检进样口和检测器温度等测器温度等 2022-3-1910八、验证内容的选择八、验证内容的选择 验证内容选择的一般原则验证内容选择的一般原则:非定量分析方法非定量分析方法 如鉴别如鉴别,杂质的限度检查法杂质的限度检查法:

10、 验验证证“专属性专属性”,“检测限检测限”和和“耐用性耐用性”定量分析方法定量分析方法 如原料药或制剂的含量测定及含如原料药或制剂的含量测定及含量均匀度量均匀度,溶出度或释放度的测定方法溶出度或释放度的测定方法: 除除“检测检测限限”和和“定量限定量限”外外, 其余均验证其余均验证微量定量分析方法微量定量分析方法 如杂质的定量测定方法如杂质的定量测定方法: 除除“检测限检测限”视情况而定外视情况而定外, 其余均验证其余均验证2022-3-1911八、验证内容的选择八、验证内容的选择 验证内容验证内容分析项目分析项目鉴别鉴别试验试验元素或杂质检查元素或杂质检查含量测定及含量测定及溶出量测定溶出量测定限度限度定量定量准确度准确度 +精密度精密度重复性重复性 +中间精密度中间精密度 +专属性专属性+检测限检测限+ 定量限定量限 + 线性线性 +范围范围 +耐用性耐用性+练习练习1相对标准差表示的应是（相对标准差表示的应是（ ）A准确度准确度 B回收率回收率 C精密度精密度 D纯净度纯净度 2药物分析方法的效能指标有（药物分析方法的效能指标有（ ） A检测限检测限 B耐用性耐用性 C准确度准确度 D专属性专属性人有了知