肠杆菌的鉴定t

1、主讲人：主讲人：小组成员：小组成员： 目录目录实验目的及背景实验方法实验结果实验结论实验目的及意义实验目的及意义实验背景 肠杆科细菌是一大群生肠杆科细菌是一大群生物学性状非常相似的革兰氏物学性状非常相似的革兰氏阴性杆菌，它们的酶十分活阴性杆菌，它们的酶十分活跃，能分解多种糖和醇类。跃，能分解多种糖和醇类。因此肠杆菌科细菌鉴定主要因此肠杆菌科细菌鉴定主要依靠生化反应和血清学反应。依靠生化反应和血清学反应。 而本实验中已得知所给而本实验中已得知所给的混合菌种中含有大肠杆菌、的混合菌种中含有大肠杆菌、志贺菌和沙门菌三种。可依志贺菌和沙门菌三种。可依靠生化反应鉴定大肠杆菌，靠生化反应鉴定大肠杆菌，血清

2、学鉴定区分志贺菌和沙血清学鉴定区分志贺菌和沙门菌。门菌。实验目的通过对三种肠杆菌科细通过对三种肠杆菌科细菌的鉴定实验，全面的菌的鉴定实验，全面的熟悉细菌常规鉴定程序熟悉细菌常规鉴定程序和方法，初步掌握细菌和方法，初步掌握细菌鉴定实验操作技能，学鉴定实验操作技能，学会正确观察记录实验结会正确观察记录实验结果以及分析归纳实验资果以及分析归纳实验资料，得出正确的鉴定结料，得出正确的鉴定结论并撰写合格的细菌鉴论并撰写合格的细菌鉴定实验报告。定实验报告。肠杆菌混合液（老师提供）实验方法实验方法实验材料伊红亚甲蓝琼脂平板培养基双糖含铁培养基单糖发酵管硫酸亚铁半固体培养基普通肉汤培养基西蒙枸櫞酸盐培养基生化

3、反应鉴别配置培养基分离菌株纯化培养血清学鉴定实验方法实验方法平板分离法分离菌株平板分离法分离菌株：v取肠杆菌混合溶液涂布于EMB平板培养基上，37恒温箱倒置培养24h 后。v挑选菌落形态、颜色不一致的菌落保存待用。v紫黑色的单个菌落，可初步定为可疑大肠埃希菌菌落，编号；光滑无色透明的单个菌落可初步定为不发酵乳糖的，可疑志贺菌属或沙门菌属菌落，编号。v取双糖铁高层琼脂斜面培养基，无菌操作接种已编号的可疑菌落，送37恒温箱培养24-48小时。v观察可疑细菌在双糖铁琼脂斜面的生长现象并记录。（用酸碱指示剂检测双糖铁琼脂斜面和琼脂高层的颜色变化）v取洁净载玻片，以灭菌接种环取12环志贺菌属多价诊断血清

4、放在玻片上，然后烧环。v待环冷却后用环在菌种斜面菌苔上蘸取少量细菌与血清混合，先在血清边缘处将细菌研磨开，然后再混匀。v轻轻摇动载玻片，一边摇动，一边将载玻片稍微倾斜对光观察凝集现象。v每株可疑菌落接种以下培养基：糖发酵管（葡，乳，麦，甘，蔗）各1支，蛋白胨水一支，葡萄糖蛋白胨水2支，西蒙枸櫞酸盐琼脂斜面1支，硫酸亚铁琼脂半固体培养基1支，普通肉汤琼脂半固体培养基1支。v接种完毕后，试管置于试管架上，送37恒温箱培养24-48小时候观察记录于表格中。vEMB培养基肠杆菌分离培养实验结果实验结果可疑的志贺菌和沙门菌(光滑无色透明） 可疑大肠杆菌（紫黑色且在亮光下可有绿色金属光泽）v双糖铁琼脂斜面

5、培养实验结果实验结果疑沙门菌1疑志贺菌疑大肠菌疑沙门菌2B3 B4 B5 B6v对疑志贺菌（B4）的血清鉴定结果实验结果实验结果有白色凝集有白色凝集无凝集现象无凝集现象实验结果实验结果v对疑沙门菌（B3）的血清鉴定结果有白色凝集有白色凝集无凝集现象无凝集现象v动力测试（普通肉汤半固体培养）u大肠杆菌和可疑沙门菌均有运动趋势，琼脂显浑浊。u可疑志贺菌则紧沿穿刺路线生长。实验结果实验结果从左至右依次为：可疑大肠杆菌（可疑大肠杆菌（+）、可疑沙门（）、可疑沙门（+）、可疑志贺（）、可疑志贺（-）实验结果实验结果v生化反应鉴定蛋白胨水（I吲哚）v生化反应鉴定葡萄糖蛋白胨水（M甲基红）依次为：可疑大肠杆

6、菌（可疑大肠杆菌（+）、可疑沙门菌（）、可疑沙门菌（+）、可疑志贺菌（）、可疑志贺菌（-）实验结果实验结果v生化反应鉴定葡萄糖蛋白胨水（Vp）从左至右依次为：可疑大肠杆菌（可疑大肠杆菌（- -）、可疑沙）、可疑沙门菌（门菌（- -）、可疑志贺菌（）、可疑志贺菌（- -）实验结果实验结果v生化反应鉴定西蒙枸橼酸盐琼脂斜面（C）可疑大肠杆菌（可疑大肠杆菌（-）、可疑沙门菌（）、可疑沙门菌（-）、可疑志贺菌（）、可疑志贺菌（-）实验结果实验结果v萄发酵管葡萄糖试管均从原来蓝色变为黄色，试管均从原来蓝色变为黄色，并且小试管均有小气泡，并且小试管均有小气泡，所以三种可疑菌均有产气产酸所以三种可疑菌均有产

7、气产酸实验结果实验结果 三支葡萄糖发酵管依次分别接种培养了可疑大肠杆菌、可疑志贺杆菌、沙门杆菌。试管均呈原来的蓝色，并且小试管均有无小气泡，所以三种可疑菌的蔗糖发酵为阴性。实验结果实验结果v萄发酵管蔗糖 三支葡萄糖发酵管依次分别接种培养了可疑大肠杆菌、可疑志贺杆菌、可疑沙门杆菌。从左至右：大肠杆菌、沙门菌均产气产酸，志贺菌大肠杆菌、沙门菌均产气产酸，志贺菌为阴性为阴性实验结果实验结果v萄发酵管麦芽糖 三支葡萄糖发酵管依次分别接种培养了可疑大肠杆菌、可疑沙门杆菌、可疑志贺杆菌。v萄发酵管甘露醇实验结果实验结果 三支葡萄糖发酵管依次分别接种培养了可疑大肠杆菌、可疑沙门杆菌、可疑志贺杆菌。试管均从原

8、来蓝色变为黄色，试管均从原来蓝色变为黄色，并且小试管均有小气泡，并且小试管均有小气泡，所以三种可疑菌均有产气产酸所以三种可疑菌均有产气产酸其中沙门菌颜色较浅，产酸较少。其中沙门菌颜色较浅，产酸较少。实验结果实验结果v萄发酵管乳糖 三支葡萄糖发酵管依次分别接种培养了可疑大肠杆菌、可疑沙门杆菌、可疑志贺杆菌。只有可疑志贺菌试管变为黄色，只有可疑志贺菌试管变为黄色，并且只有可疑志贺菌试管的小试管无并且只有可疑志贺菌试管的小试管无小气泡，小气泡，所以可疑大肠杆菌、沙门菌均产气产所以可疑大肠杆菌、沙门菌均产气产酸菌，志贺菌的乳糖发酵为阴性。酸菌，志贺菌的乳糖发酵为阴性。可疑菌落EMB双糖铁生长现象B3略

9、K/A,H2S -/+B4略K/A,H2S-B5略A/A,H2S-B6略K/A,H2S -/+肠杆菌科细菌初步鉴定结果记录肠杆菌科细菌初步鉴定结果记录表表实验结果实验结果表表 肠杆菌科部分细菌重要生物学特征肠杆菌科部分细菌重要生物学特征（ 产酸产气，产酸产气，+产酸不产气，产酸不产气，-不产酸也不产气）不产酸也不产气） 细菌编号糖发酵试验吲哚甲基红VP枸橼酸盐利用动力志贺菌属多价判断血清沙门菌属多价判断血清葡萄糖乳糖麦芽糖甘露醇蔗糖B3 -+-+ -+B4-+ -B5-+-+-实验结果实验结果实验结论实验结论根据B3和B4、B6的EMB菌落特点可初步判断这三个菌落为致病菌落。经过双糖铁纯化培养后，B3和B6为H2S阳性，可初步诊断B3和B6为沙门菌属。B4的双糖铁纯化后为K/A及H2S阴性，可初步诊断为志贺菌属。分别对B3和B4进行血清学鉴定，结果与初步诊断的预测一致，即B3在沙门菌属血清中发生凝集反应，B4在志贺菌属血清中发生凝集反应，由此可以肯定B3为沙门菌属。根据实验结