沙门氏菌检测 生物检测(自己写的)-Riche

1、培养特性：1、需氧及兼性厌氧菌。2、在普通琼脂培养基上生长良好，培养24h后，形成中等大小、圆形、表面光滑、无色半透明、边缘整齐的菌落。3、鉴别培养基（麦康凯、SS、伊红美蓝）：一般无色菌落。4、三糖铁琼脂斜面：斜面为红色，底部变黑并产气。生化特性：1、发酵葡萄糖，麦芽糖，甘露醇和山梨醇产气2、不发酵乳糖、蔗糖和侧金盏花醇3、不产吲哚、V-P反应阴性4、不水解尿素和对苯丙氨酸不脱氨。1、前增菌：食品样品在含有营养的非选择性培养基中增菌，使受损伤的沙门氏菌细胞恢复到稳定的生理状态。加工食品均应经过前增菌。2、（选择性）增菌：此培养基允许沙门氏菌持续增菌，同时阻止大多数其他细菌的增殖。未经加工的食

2、品不必经过前增菌而直接增菌。3、选择性平板分离：采用固体选择培养基，抑制非沙门氏菌的生长，提供肉眼可见的疑似沙门氏菌纯菌落的识别。4、生物化学筛选：排除大多数非沙门氏菌，也提供了沙门氏菌培养物菌属的初步鉴定。5、血清学技术鉴定培养物菌种。缓冲蛋白胨水（BPW）四硫磺酸钠煌绿（TTB）增菌液亚硒酸盐胱氨酸（SC）增菌液亚硫酸铋（BS）琼脂木糖赖氨酸脱氧胆盐（XLD）琼脂沙门氏菌属显色培养基三糖铁（TSI）琼脂HE琼脂蛋白胨水、靛基质试剂尿素琼脂（pH 7.2）氰化钾 （KCN） 培养基赖氨酸脱羧酶试验培养基糖发酵管邻硝基酚-D 半乳糖苷（ONPG）培养基半固体琼脂丙二酸钠培养基沙门氏菌O 和H

3、诊断血清生化鉴定试剂盒冻肉、蛋品、乳品及其他加工食品鲜肉、鲜蛋、鲜乳或其他未经加工的食品前增菌法25gBPW225mL36 1 一般4h，干蛋品18h24h10mLMM（或TTB）100mL10mLSC100mL直接增菌法25g灭菌生理盐水25mL检样匀液25mL MM（或TTB）100mL检样匀液25mL SC100mLBSDHL（或（或HE、WS、SS）TSI（排除A/A H2S结果 ），靛基质，尿素，KCN，赖氨酸H2S 靛 尿KCN 赖（或一项不符）沙门氏菌血清学试验沙门氏菌血清学试验甘露醇+ 山梨醇+H2S 靛 尿KCN 赖H2S 靛 尿KCN 赖/非如左述的各种反应结果沙门氏菌血清

4、学试验 ONPG 沙门氏菌非沙门氏菌42 18h24h36 1 18h24h42 18h24h36 1 18h24h36 1 40h48h36 1 18h24h8 称取25 g（mL）样品放入盛有225 mL BPW的无菌均质杯中，以8 000 r/min10 000 r/min均质1 min2 min，或置于盛有225 mL BPW的无菌均质袋中，用拍击式均质器拍打1 min2 min。若样品为液态，不需要均质，振荡混匀。如需测定pH值，用1 mol/mL无菌NaOH或HCl调pH 至6.80.2。无菌操作将样品转至500 mL锥形瓶中，如使用均质袋，可直接进行培养，于36 1 培养8 h1

5、8h。 轻轻摇动培养过的样品混合物，移取1 mL，转种于10 mL TTB 内，于42 1 培养18 h24 h。同时，另取1 mL，转种于10 mL SC内，于36 1 培养18 h24 。 分别用接种环取增菌液1环，划线接种于一个BS琼脂平板和一个XLD琼脂平板（或HE琼脂平板或沙门氏菌属显色培养基平板）。于36 1 分别培养18 h24 h （XLD琼脂平板、HE琼脂平板、沙门氏菌属显色培养基平板） 或40 h48 h （BS琼脂平板），观察各个平板上生长的菌落,各个平板上的菌落特征。BS琼脂 菌落为黑色有金属光泽、棕褐色或灰色，菌落周围培养基可呈黑色或棕色；有些菌株形成灰绿色的菌落，周

6、围培养基不变。 HE琼脂 蓝绿色或蓝色，多数菌落中心黑色或几乎全黑色；有些菌株为黄色，中心黑色或几乎全黑色。 XLD琼脂 菌落呈粉红色，带或不带黑色中心，有些菌株可呈现大的带光泽的黑色中心，或呈现全部黑色的菌落；有些菌株为黄色菌落，带或不带黑色中心。 沙门氏菌属显色培养基按照显色培养基的说明进行判定。自选择性琼脂平板上分别挑取2个以上典型或可疑菌落，接种三糖铁琼脂，先在斜面划线，再于底层穿刺；接种针不要灭菌,直接接种赖氨酸脱羧酶试验培养基和营养琼脂平板，于36 1 培养18 h24 h，必要时可延长至48 h。在三糖铁琼脂和赖氨酸脱羧酶试验培养基内，沙门氏菌属的反应结果如下：下表为表一接种三糖铁琼脂和赖氨酸脱羧酶试验培养基的同时,可直接接种蛋白胨水 （供做靛基质试验）、尿素琼脂 （pH7.2）、氰化钾 （KCN） 培养基，也可在初步判断结果后从营养琼脂平板上挑取可疑菌落接种。于36 1 培养18 h24 h，必要时可延长至4