围产期毒性试验介绍

1、围产围产期毒性期毒性试验介绍试验介绍叶向锋叶向锋2012-03-09在药物开发的过程中，生殖毒性研究的目的是通过动物试验反映受试物对哺乳动物生殖功能和发育过程的影响预测其可能产生的对生殖细胞、受孕、妊娠、分娩、哺乳等亲代生殖机能的不良影响对子代胚胎-胎儿发育、出生后发育的不良影响生殖毒性研究在限定临床研究受试者范围、降低临床研究受试者和药品上市后使用人群的用药风险方面发挥重要作用 为方便试验，可将一个完整生命周期过程分成以下为方便试验，可将一个完整生命周期过程分成以下几个几个阶段：阶段：A. 从交配前到受孕（成年雄性和雌性生殖功能、配从交配前到受孕（成年雄性和雌性生殖功能、配子的发育和成熟、交

2、配行为、受精）。子的发育和成熟、交配行为、受精）。 B. 从受孕到着床（成年雌性生殖功能、着床前发育、从受孕到着床（成年雌性生殖功能、着床前发育、着床）。着床）。 C. 从着床到硬腭闭合（成年雌性生殖功能、胚胎发从着床到硬腭闭合（成年雌性生殖功能、胚胎发育、主要器官形成）。育、主要器官形成）。 D. 从硬腭闭合到妊娠终止（成年雌性生殖功能、胎从硬腭闭合到妊娠终止（成年雌性生殖功能、胎仔发育和生长、器官发育和生长）。仔发育和生长、器官发育和生长）。 E. 从出生到离乳（成年雌性生殖功能、幼仔对宫外生活从出生到离乳（成年雌性生殖功能、幼仔对宫外生活的适应性、离乳前发育和生长）。的适应性、离乳前发育

3、和生长）。 F. 从离乳到性成熟（离乳后发育和生长、独立生活的适从离乳到性成熟（离乳后发育和生长、独立生活的适应能力、达到性成熟的情况）。应能力、达到性成熟的情况）。 常用的试验方案相当于对下述各阶段影响的联合研究：生育力与早期胚胎发育毒性试验(AB阶段)胚胎-胎仔发育毒性试验(CD阶段)围产期毒性试验 (CF阶段)围产期毒性试验（围产期毒性试验（III段）段） 包括上述生命周期中的C阶段至阶段至F阶段阶段检测从胚胎着床到幼仔离乳，给药对妊娠/哺乳的雌性动物以及胚胎和子代发育的不良影响由于对此段所造成的影响可能延迟，试验应持续观察至子代性成熟阶段。 评价内容评价内容妊娠动物较非妊娠雌性动物增强

4、的毒性出生前和出生后子代死亡情况子代生长发育情况子代的功能缺陷，包括行为、性成熟和生殖功能 给药期给药期 雌性动物给药期应从胚胎硬腭闭合至哺乳结束胚胎硬腭闭合至哺乳结束(即上述生命周期中的C阶段至阶段至E阶段阶段)，通常，大鼠为妊娠第15天至离乳（出生后第21天）。 该段试验并不完全包括由离乳期至青春期阶段给药，也不研究育龄期缩短的可能性。为了检测可能用于婴幼儿和儿童期药物的不良影响，应考虑具体情况，选择特定年龄段子代直接给药，进行相关试验研究。 动物处理动物处理 雌性动物分娩并饲养其子代至离乳，每窝选择雌、雄子代各1只，饲养至成年，然后进行交配检测其生殖能力。 观察指标观察指标 试验期间(母

5、体动物)：- 体征和死亡情况，至少1次/天 - 体重及体重变化，分娩前至少2次/周- 摄食量，分娩前至少1次/周 - 其他毒理研究中已证明有意义的指标 - 妊娠期 - 分娩 终末检查（用于母体，可行时也用于子代)：剖检所有成年动物 保存肉眼观察出现异常的器官，必要时进行组织学检查，同时保留足够的对照组动物相应器官以便比较 着床 畸形 出生时存活的子代 出生时死亡的子代 子代出生时体重 离乳前后的存活率和生长/体重性成熟程度和生育力，应说明是否进行了窝仔动物剔除 体格发育 感觉功能和反射 行为 SD大鼠灌胃速效救心丸围产大鼠灌胃速效救心丸围产期毒性试验期毒性试验速效救心丸说明书速效救心丸说明书【

6、药品名称】通用名称：速效救心丸 汉语拼音：Suxiao Jiuxin Wan【成 份】川芎、冰片。【性 状】本品为棕黄色的滴丸；气凉，味微苦。【功能主治】行气活血，祛瘀止痛，增加冠脉血流量，缓解心绞痛。用于气滞血瘀型冠心病、心绞痛。【规 格】每粒重40 mg。【用法用量】含服，一次4-6粒，一日3次；急性发作时，一次10-15粒。试验设试验设5组组溶剂对照组（0.5% CMC-Na）空白滴丸组（1000 mg/kg）速效救心丸（100 mg/kg）速效救心丸（300 mg/kg）速效救心丸（1000 mg/kg）给药方给药方法法雌鼠的给药时间为妊娠第15天至出生后第21天给药途径为灌胃每天给药

7、1次给药容积为1 ml/100g体重及摄食量测定体重及摄食量测定摄食量：每周称1次；体重：分娩前每3天体重一次，分娩后每周称体重一次。临床症状观察临床症状观察每天1次孕鼠观察项目孕鼠观察项目一般状态的观察：对给药后母鼠的一般状况、授乳、哺育等进行观察。妊娠期的变化：根据各组孕鼠自然分娩开始的时间，统计各组动物妊娠期有无改变，观察受试药物对孕鼠妊娠期有无影响。产仔数：记录每只孕鼠的产仔数。孕鼠出产率，按下式计算出各组妊娠母鼠的出产率。 出产率（分娩孕鼠数/妊娠孕鼠数）100孕鼠死亡率：统计各组孕鼠的死亡数，计算死亡率。解剖检查：哺乳结束后，应在适当的时间处死母鼠作解剖检查，对主要器官和组织作肉眼

8、观察，必要时可进行病理学检查。仔鼠观察项目仔鼠观察项目仔鼠的一般生长发育指标自然分娩的仔鼠应检查有无外观畸形、鉴别性别、称体重仔鼠的头部检查：有无露脑（无头盖骨），脑膜膨出，头部大小，眼睛的有无，眼所在部位，大小，突眼或开眼等。两耳、鼻和嘴外表是否正常和对称，有无唇裂。四肢的检查：四肢有无多趾、并趾、少趾、无趾、足内外翻、短肢等。 躯干的检查：有无脐疝、腹裂（内脏膨出），脊髓膨出、脊柱裂、脊柱侧突等。尾部检查：有无短尾、卷尾、无尾和尾分叉等，有无肛门闭锁等。出生存活数：计数出生后24小时内活仔数。 四日存活数：计数出生后4天内活仔数。离乳率：在分娩后21天计算出各组仔鼠的离乳率。仔鼠剔除：出生

9、后4天，剔除多余仔鼠，使每窝仔鼠保留8只，最好雌雄各半。不足8只者，可用同组同日龄幼仔补齐。上述仔鼠哺乳至断乳。离乳率=（离乳时仔鼠数/4日时仔鼠数或剔除后的仔鼠数）100定期测定仔鼠重量：仔鼠出生记为第0天，分别在第0、4、7、14、21天称仔鼠窝重，计算仔鼠平均体重。断乳后处死部分仔鼠，检查内脏。仔鼠的生理发育检查仔鼠的生理发育检查耳廓分离时间：仔鼠出生后第3天开始每天观察，记录耳廓分离时间，同窝所有仔鼠耳廓分离为观察指标同窝所有仔鼠耳廓分离为观察指标。被毛发生时间：记录仔鼠出毛时间，从出生第6天开始每天观察，指标确定同上。齿牙萌出：观察记录上、下门齿萌出时间，从出生第6天开始每天观察，指

10、标确定同上。张耳时间：从出生第8天开始每天观察，指标确定同上。睁眼时间：在生后第10天开始每天观察，以同窝内所有仔鼠睁眼的时间作为观察指标。睾丸下降：检查雄性仔鼠阴囊内睾丸，在生后第20天开始每天观察，观察指标确定同上。阴道开口：检查雌鼠阴道张开时间，在生后第23天开始每天观察，观察指标确定同上。仔鼠的功能与行为检查仔鼠的功能与行为检查反射反射发育检测发育检测指标指标1平面翻正反射：将仔鼠仰卧于实验台上，观察其翻转身体的能力。通常在生后第4天开始每天观察，以全窝仔鼠在连续测试三次均为阳性反应之日定为达标日。负向趋地反射：将仔鼠头向下放在一倾斜度为45的斜板上，如仔鼠在30秒内回转180，使头向

11、上者为阳性反应。在生后第5天开始每天观察，全窝仔鼠均呈阳性反应之日定为达标日。反射发育检测反射发育检测指标指标2听觉惊愕反射：将仔鼠置于距一金属平板垂直距离15 cm的平面上，待动物平静后，在距金属板15 cm高度坠下一金属块，撞击金属板，发出声响，以此作为对小鼠的“惊愕刺激”，阳性反应表现为身体突然蜷缩、提起或急剧一跳。在生后第16天开始每天观察，以全窝动物出现阳性反应之日定为达标日。视觉定向反射：一般在生后16天开始测试。试验时手提仔鼠尾部，使仔鼠呈倒挂状，使仔鼠头部移近一可抓物（如木棍），如仔鼠抬头并用前肢抓住物体则为阳性反应。全窝仔鼠均呈阳性反应时定为达标日。仔鼠运动与协调能力仔鼠运动

12、与协调能力测试测试断乳后，每组随机取相同日龄仔鼠20只（雌雄各半），进行转棒试验。使用大小鼠转棒仪记录仔鼠从转棒上掉下的时间。仔鼠自主活动仔鼠自主活动测定测定断乳后，每组随机取相同日龄仔鼠20只（雌雄各半）进行测定。使用小鼠自主活动程序自动控制仪记录5 min（300s）动物活动次数。仔鼠学习和记忆能力的检测仔鼠学习和记忆能力的检测: 断乳后，每组随机取日铃相同的仔鼠20只（雌雄各半）进行水迷宫试验。使用水迷宫自动实验记录仪记录仔鼠每组动物平均错误次数和平均潜伏期。仔鼠大体检查及脏器系数统计仔鼠大体检查及脏器系数统计仔鼠出生后40天，每组剖杀20只仔鼠，雌雄各半，检查心、肝、脾、肺、肾、睾丸、子宫、脑，并称重计算脏器系数。子代生殖功能子代生殖功能子代每组随机抽取70日龄性成熟仔鼠20只，雌雄各半，1：1同笼交配，发现阴栓之日定为妊娠期第零天(D0)， 妊娠第15天时处死母鼠。切开腹部，将左右两侧子宫从母体切下，计数黄体数，纵向切开子宫，分离出胎仔、记录死死胎、活胎和吸收胎胎、活胎和吸收胎，计数总着床数总着床数，并记录活活胎的重量胎的重量，计算交配率、交配天数交配率、交配天数及受孕率受孕率。生理发育指标生理发育指标出生后时间出生后时间（天）（天）反射发育时间反射发育时间（天）（天）出生后时间（天）出生后时间（天）耳廓分离时间耳廓分离时间3正面翻正时间正面翻正时间4