第七章临床输血治疗技术二

1、第七章第七章 P113临床输血治疗技术临床输血治疗技术阮阮 杰杰医学检验学院临床检验学教研室医学检验学院临床检验学教研室2022-3-18广东医学院临床检验学教研室广东医学院临床检验学教研室3广东医学院临床检验学教研室广东医学院临床检验学教研室4现代成分输血的主要趋势现代成分输血的主要趋势n输注添加液红细胞为主流输注添加液红细胞为主流n血小板输注的增加血小板输注的增加n去白细胞血液成分广泛应用去白细胞血液成分广泛应用n病毒灭活血液成分临床应用病毒灭活血液成分临床应用n特殊成分的输注特殊成分的输注 外周血干细胞移植外周血干细胞移植 DC抗肿瘤疫苗抗肿瘤疫苗 n促进血细胞生长的药物的应用，减少了促

2、进血细胞生长的药物的应用，减少了血液成分的使用量血液成分的使用量广东医学院临床检验学教研室广东医学院临床检验学教研室5 白细胞去除技术白细胞去除技术 血液辐照技术血液辐照技术血液病毒灭活技术血液病毒灭活技术 治疗性血液成分去除术治疗性血液成分去除术治疗性血液成分置换术治疗性血液成分置换术临床输血治疗技术临床输血治疗技术细胞治疗细胞治疗广东医学院临床检验学教研室广东医学院临床检验学教研室6临床临床应用应用 临床临床意义意义 注意注意事项事项 概念概念 技术技术原理原理 临床输血治疗技术临床输血治疗技术1 Leukocyte removal *加拿大多伦多三所医院综合报告加拿大多伦多三所医院综合报

3、告各种血液成分的输血反应率各种血液成分的输血反应率* *反应类型反应类型反应率（反应率（%）全全 血血1.06 白细胞白细胞6.49浓缩红细胞浓缩红细胞 0.88 洗涤或冰冻红细胞洗涤或冰冻红细胞0.47血小板血小板0.40血浆血浆0.44广东医学院临床检验学教研室广东医学院临床检验学教研室8血液及血液成分中白细胞含量血液及血液成分中白细胞含量血液成分血液成分白细胞含量（个白细胞含量（个/U*）新鲜全血新鲜全血109浓缩红细胞浓缩红细胞108-109去白膜红细胞去白膜红细胞 108洗涤红细胞洗涤红细胞107冰冻去甘油红细胞冰冻去甘油红细胞106-107手工采血小板手工采血小板107-108机采

4、血小板机采血小板106-108新鲜冰冻血浆新鲜冰冻血浆99 9096去除红细胞中白细胞方法比较去除红细胞中白细胞方法比较 广东医学院临床检验学教研室广东医学院临床检验学教研室15种类标准种类标准白细胞残留量白细胞残留量（个（个/单位）单位）红细胞回收率红细胞回收率欧共体标准欧共体标准110685% AABB标准标准110685% 卫生部标准卫生部标准（NHFTR）2.5108（CMV、HLA）2.5106国家药品监督管理局国家药品监督管理局2.510685% GB18469-2001YY0329-2002广东医学院临床检验学教研室广东医学院临床检验学教研室161预防非溶血性发热输血反应预防非溶

5、血性发热输血反应（FNHTR）4预防预防TA-GVHD等等2阻止或延缓阻止或延缓HLA同种免疫同种免疫3预防亲白细胞的病毒传播预防亲白细胞的病毒传播3. 白细胞去除输血的临床意义白细胞去除输血的临床意义广东医学院临床检验学教研室广东医学院临床检验学教研室174. 白细胞去除技术的临床应用白细胞去除技术的临床应用 经济条件许可的初次输血患者经济条件许可的初次输血患者 需多次输血治疗的患者需多次输血治疗的患者 将来可能要长期依赖输血治疗的患者将来可能要长期依赖输血治疗的患者 将来可能要接受同种异体器官移植、将来可能要接受同种异体器官移植、 造血干细胞移植的患者造血干细胞移植的患者广东医学院临床检验

6、学教研室广东医学院临床检验学教研室185. 白细胞去除术应用的注意事项白细胞去除术应用的注意事项 不能取代血液辐照处理预防不能取代血液辐照处理预防TA-GVHD 贮存后去除白细胞不能预防亲白细胞贮存后去除白细胞不能预防亲白细胞 病毒的传播病毒的传播广东医学院临床检验学教研室广东医学院临床检验学教研室19 2 血液辐照技术血液辐照技术Transfusion-associated graft versus host disease, TA-GVHD广东医学院临床检验学教研室广东医学院临床检验学教研室20 1. 输血相关性移植物抗宿主病输血相关性移植物抗宿主病 发病率发病率0.010.1 病死率高达

7、病死率高达8090血液辐照处理，是预防血液辐照处理，是预防TA-GVHD发生的唯一发生的唯一有效的措施有效的措施广东医学院临床检验学教研室广东医学院临床检验学教研室21 2. 血液辐照处理技术原理血液辐照处理技术原理利用放射性同位素（利用放射性同位素（137Cs和和60Co）衰变）衰变中产生射线，以电子粒子或次级电子的中产生射线，以电子粒子或次级电子的形式所致电离辐射作用，具有敏捷、快形式所致电离辐射作用，具有敏捷、快速地穿透有核细胞，直接损伤细胞核的速地穿透有核细胞，直接损伤细胞核的DNA或间接依靠产生离子或自由基的生或间接依靠产生离子或自由基的生物损伤作用。物损伤作用。广东医学院临床检验学

8、教研室广东医学院临床检验学教研室222550Gy广东医学院临床检验学教研室广东医学院临床检验学教研室23粒细胞输血前必需辐照粒细胞输血前必需辐照;HLA相合的机采血小板，对非高危相合的机采血小板，对非高危人群输注也应辐照。人群输注也应辐照。去甘油的冻融红细胞、冷沉淀、去甘油的冻融红细胞、冷沉淀、白蛋白、凝血因子、静脉注射免白蛋白、凝血因子、静脉注射免疫球蛋白不需要辐照。疫球蛋白不需要辐照。广东医学院临床检验学教研室广东医学院临床检验学教研室24u 石蜡基质剂量计检测，随照射剂量的增加石蜡基质剂量计检测，随照射剂量的增加而改变颜色，灵敏度高。而改变颜色，灵敏度高。 当接受射线辐射时当接受射线辐射

9、时(15-25Gy)由于离子化作由于离子化作用标签发生颜色改变，字样由用标签发生颜色改变，字样由“未辐照未辐照”变变为为“已辐照已辐照” ，可作为血液制品被辐照的标，可作为血液制品被辐照的标记并标示大概剂量范围以控制被辐照血液的记并标示大概剂量范围以控制被辐照血液的质量。质量。 粘贴于被辐照血液制品的表面粘贴于被辐照血液制品的表面 广东医学院临床检验学教研室广东医学院临床检验学教研室25 3. 血液辐照处理的临床意义血液辐照处理的临床意义（1）儿科输血包括先天性免疫缺陷和早产儿。）儿科输血包括先天性免疫缺陷和早产儿。 （2）获得性免疫抑制的人群（自体、异体骨）获得性免疫抑制的人群（自体、异体骨

10、髓或外周血干细胞移植患者，从放、化疗开始髓或外周血干细胞移植患者，从放、化疗开始应接受辐照的血液，直到移植后应接受辐照的血液，直到移植后3-6个月后）。个月后）。（3）接受）接受I、II级亲属血液的患者，所使用的级亲属血液的患者，所使用的各种血液制品输前必须辐照。各种血液制品输前必须辐照。广东医学院临床检验学教研室广东医学院临床检验学教研室261）对胎儿进行子宫内输血）对胎儿进行子宫内输血2）选择性的免疫功能不全或免疫损害的受血者）选择性的免疫功能不全或免疫损害的受血者3）献血者与受血者有血缘关系）献血者与受血者有血缘关系4）受血者曾接受过骨髓移植或外周血干细胞移植）受血者曾接受过骨髓移植或外

11、周血干细胞移植5）HLA选择性血小板或已知选择性血小板或已知HLA纯合子血小板的纯合子血小板的 受血者受血者美国血库联合会标准委员会确定了必须美国血库联合会标准委员会确定了必须接受辐照血的标准（接受辐照血的标准（1996年制定）年制定）广东医学院临床检验学教研室广东医学院临床检验学教研室27 4. 血液辐照处理的临床应用血液辐照处理的临床应用AABB规定辐照后红细胞保存期不能超过规定辐照后红细胞保存期不能超过28天天经辐照处理的各种血液制剂，均应尽快输注使用经辐照处理的各种血液制剂，均应尽快输注使用对易发对易发TA-GVHD高危患者所输注的同种异体血液高危患者所输注的同种异体血液制剂应全部进行

12、辐照处理制剂应全部进行辐照处理对确有必要输注对确有必要输注I、II级血缘关系亲友捐献血液血级血缘关系亲友捐献血液血液制剂进行辐照处理液制剂进行辐照处理广东医学院临床检验学教研室广东医学院临床检验学教研室28 5. 注意事项注意事项经辐照处理的血液制剂运输、保存、配血及输注经辐照处理的血液制剂运输、保存、配血及输注等操作规程，均参照同类血液制剂的要求等操作规程，均参照同类血液制剂的要求经辐照处理的各种血液制剂，均应尽快输注使用经辐照处理的各种血液制剂，均应尽快输注使用广东医学院临床检验学教研室广东医学院临床检验学教研室293 血液病毒灭活技术血液病毒灭活技术Virus inactivation

13、in blood products保持血液制剂有效性的前提下，采用保持血液制剂有效性的前提下，采用物理、化学、生物学等方法，对可能物理、化学、生物学等方法，对可能存在于血液制剂中的所有病毒进行灭存在于血液制剂中的所有病毒进行灭活处理，以避免经输血传播病毒活处理，以避免经输血传播病毒30病原体灭活真的是件很重要的事么？广东医学院临床检验学教研室广东医学院临床检验学教研室31n 输血感染的危险输血感染的危险n 检测方法和试剂的灵敏度检测方法和试剂的灵敏度n 病毒感染的病毒感染的“窗口期窗口期” 病毒病毒 窗口期窗口期(天天) HIV 22（11） HCV 70（23） HBV 56 (41) n

14、新病毒和未检测病毒新病毒和未检测病毒n 检验员的水平和责任心检验员的水平和责任心1. 血液病毒灭活的必要性血液病毒灭活的必要性广东医学院临床检验学教研室广东医学院临床检验学教研室3232West NileYellow feverDengueAvian influenzaLassaMeningitisJapanese encephalitisEbola/MarburgRift valleyPolioNipahSARSCrimean-Congo HFVenez. Eq. encephalitisVHFHantaMonkeypoxEnterovirus新兴病毒新兴病毒1996-2003 (WHO)广

15、东医学院临床检验学教研室广东医学院临床检验学教研室33救命药让他们感染了艾滋病？救命药让他们感染了艾滋病？1995720，卫生部紧急卫生部紧急下发下发55号文号文关于禁止关于禁止生产和临床生产和临床使用未经病使用未经病毒去除或灭毒去除或灭活的凝血因活的凝血因子类血液制子类血液制品的通知品的通知。广东医学院临床检验学教研室广东医学院临床检验学教研室34血小板血小板1Amotosalen2辐照辐照3CAD4终产品保存袋终产品保存袋血浆血浆1Amotosalen2辐照辐照3CAD 4终产品保存袋终产品保存袋INTERCEPT 血浆病原体灭活血浆病原体灭活INTERCEPT 血小板病原体灭活血小板病原

16、体灭活血小板血小板- InterSol（血（血小板保存液）溶液小板保存液）溶液一体管路一体管路一体管路一体管路辐照仪辐照仪无菌接驳无菌接驳无菌接驳无菌接驳过程过程 广东医学院临床检验学教研室广东医学院临床检验学教研室352 血液病毒灭活技术原理血液病毒灭活技术原理u 病毒的灭活和去除病毒的灭活和去除u 有效成分活性和存活力的保持有效成分活性和存活力的保持杀灭病毒杀灭病毒保存细胞保存细胞 两个基本要求两个基本要求广东医学院临床检验学教研室广东医学院临床检验学教研室36血浆蛋白制品的病毒去除血浆蛋白制品的病毒去除/灭活灭活n 加热加热n 烷化剂烷化剂 n 射线法射线法 n 除病毒过滤（除病毒过滤（

17、nm过滤）过滤） 巴斯德消毒法（保护剂巴斯德消毒法（保护剂60 10 h） ）人血白蛋白制品）人血白蛋白制品n 有机溶剂有机溶剂/清洁剂法清洁剂法 n 氧化剂氧化剂 广东医学院临床检验学教研室广东医学院临床检验学教研室37 巴斯德消毒法巴斯德消毒法 融化混合融化混合 保护剂保护剂 边搅拌边加热，边搅拌边加热，60，10小时小时 超滤等方法除去保护剂超滤等方法除去保护剂 新鲜冰冻血浆新鲜冰冻血浆 返返 回回 下一页下一页 广东医学院临床检验学教研室广东医学院临床检验学教研室38有机溶剂清洁剂法有机溶剂清洁剂法 n 机制机制 n有机溶剂有机溶剂能破坏能破坏病毒包膜脂质病毒包膜脂质使病毒使病毒失去传

18、染性和繁殖复制能力。失去传染性和繁殖复制能力。n清洁剂清洁剂可进一步提高有机溶剂破坏可进一步提高有机溶剂破坏病病毒脂质包膜毒脂质包膜的能力，从而提高病毒灭的能力，从而提高病毒灭活效力。活效力。 广东医学院临床检验学教研室广东医学院临床检验学教研室40原原理理亚甲蓝（亚甲蓝（MB）/光照法光照法 是一种最安全、有效的适合于临床用单袋血浆病毒灭活的方法是一种最安全、有效的适合于临床用单袋血浆病毒灭活的方法 以核酸为靶点的光化学技术 用核酸特异性的加合物形成联合 光照来介导病毒灭活广东医学院临床检验学教研室广东医学院临床检验学教研室41一、亚甲蓝一、亚甲蓝（MB）/光照法光照法 一种光敏剂一种光敏剂

19、 最大吸收波长为最大吸收波长为600700nm 与病毒核酸的鸟嘌呤结合，在可见光的与病毒核酸的鸟嘌呤结合，在可见光的作用下，作用下， 引起脱嘌呤和核酸链的断裂阻引起脱嘌呤和核酸链的断裂阻止其逆转录及止其逆转录及DNA复制复制广东医学院临床检验学教研室广东医学院临床检验学教研室42MB-P病毒灭活机理病毒灭活机理422022-3-18广东医学院临床检验学教研室广东医学院临床检验学教研室43亚甲蓝光照灭活血浆病毒的发展亚甲蓝光照灭活血浆病毒的发展n1966年年Pohl和和Mohl发表了使用亚甲蓝和光照灭活病毒发表了使用亚甲蓝和光照灭活病毒血浆的临床经验血浆的临床经验n1991年使用吩噻嗪类染料结合

20、可见光对袋装血浆病毒年使用吩噻嗪类染料结合可见光对袋装血浆病毒灭活的方法被报导灭活的方法被报导n自自1993年起用亚甲蓝灭活病毒的方法已在德国、瑞士年起用亚甲蓝灭活病毒的方法已在德国、瑞士等国的许多红十字会输血中心使用，收到良好的临床等国的许多红十字会输血中心使用，收到良好的临床效果，尚未发现明显的负面反应效果，尚未发现明显的负面反应n2001亚甲蓝灭活病毒的方法在上海血液中心研制成功，亚甲蓝灭活病毒的方法在上海血液中心研制成功，获得国家专利，并应用于临床获得国家专利，并应用于临床n目前，国内大部分血液中心和中心血站已开展此项目目前，国内大部分血液中心和中心血站已开展此项目广东医学院临床检验学

21、教研室广东医学院临床检验学教研室44安全性安全性 n每每100ml血浆的亚甲蓝用量为血浆的亚甲蓝用量为40ug，经过滤去除，经过滤去除85后，后，残留残留6ug。国内产品的残留量已达到。国内产品的残留量已达到4ugn亚甲蓝注射液临床用量：亚甲蓝注射液临床用量：n亚硝酸盐中毒，一次按体重亚硝酸盐中毒，一次按体重1-2mg/kg(120mg)；n氰化物中毒，一次按体重氰化物中毒，一次按体重5-10mg/kg, 最大剂量为最大剂量为20mg/kg。n患者输注患者输注1000毫升血浆所接受的亚甲蓝剂量约为毫升血浆所接受的亚甲蓝剂量约为40ug，仅相当于一次甲状腺造影的四千分之一仅相当于一次甲状腺造影的

22、四千分之一,一次亚硝酸盐中一次亚硝酸盐中毒用药量的三千分之一。毒用药量的三千分之一。广东医学院临床检验学教研室广东医学院临床检验学教研室45质量指标质量指标 经经MB法灭活病毒后血浆的主要质量指标法灭活病毒后血浆的主要质量指标1. 处理前后血浆性质不变，色泽无明显变化处理前后血浆性质不变，色泽无明显变化2. 血浆主要凝血因子回收率血浆主要凝血因子回收率803. 白细胞去除率白细胞去除率99.9%4. 总蛋白回收率总蛋白回收率80.0%5. 光敏剂残留率光敏剂残留率15.0%（国内已做到（国内已做到6）6. 病毒灭活系数病毒灭活系数6Log10广东医学院临床检验学教研室广东医学院临床检验学教研室

23、46广东医学院临床检验学教研室广东医学院临床检验学教研室47能灭活病毒外，还能灭活白细胞，能灭活病毒外，还能灭活白细胞，有利于清除亲白细胞病毒及减少白细胞有利于清除亲白细胞病毒及减少白细胞输注后所导致的输血副反应输注后所导致的输血副反应。是一种有效的病毒灭活光敏物质。它无需氧激活，是一种有效的病毒灭活光敏物质。它无需氧激活，在在UVA光照下，能与嘧啶反应形成环状复合物，光照下，能与嘧啶反应形成环状复合物，从而能有效的抑制病毒复制，转录和翻译从而能有效的抑制病毒复制，转录和翻译。氧化补骨脂素（氧化补骨脂素（8-MOP）甲基补骨脂素（甲基补骨脂素（AMT）氨甲基氨甲基-三甲基补骨脂素（三甲基补骨脂

24、素（S-59） 血小板病毒灭活血小板病毒灭活广东医学院临床检验学教研室广东医学院临床检验学教研室48补骨脂素光化学法补骨脂素光化学法 鼠巨噬细胞鼠巨噬细胞病毒病毒(MCMV)人的血小板人的血小板成分成分病毒滴度为病毒滴度为 106pfu/ml300 mg/ml的的8MOP病毒滴度为病毒滴度为 106pfu/ml30min紫外线强度紫外线强度为为 315418uWcm2血小板成分中血小板成分中未检出未检出MCMV广东医学院临床检验学教研室广东医学院临床检验学教研室49 标准血小板悬液经标准血小板悬液经300 mg/ml的氧化补骨的氧化补骨脂素（脂素（8-MOP）和）和340380nm紫外线紫外线

25、 (强度为强度为 315418uWcm2 )处理处理6h PLT数量数量,形态形态,PH值值无明显变化无明显变化细胞外乳酸细胞外乳酸脱氢酶含量脱氢酶含量,凝聚反应和凝聚反应和前列腺素的前列腺素的产生等产生等与对与对照组相似照组相似广东医学院临床检验学教研室广东医学院临床检验学教研室503 血液病毒灭活的临床意义血液病毒灭活的临床意义输注人血白蛋白、免疫球蛋白及各种输注人血白蛋白、免疫球蛋白及各种凝血因子制品进行替代治疗，比输注凝血因子制品进行替代治疗，比输注未经病毒灭活的新鲜冰冻血浆、冷沉未经病毒灭活的新鲜冰冻血浆、冷沉淀等血浆制剂更安全有效淀等血浆制剂更安全有效广东医学院临床检验学教研室广东医学院临床检验学教研室514 血液病毒灭活