诃子提取物含药血清对乳鼠心肌细胞损伤的保护作用

1、诃子提取物含药血清对乳鼠心肌细胞损伤的保护作用         11-01-14 15:06:00     编辑：studa20                    作者：张东 邬国栋 张述禹 王玉华 杨玉梅【摘要】  目的：研究诃子提取物含药血清对H2O2所致心肌细胞损伤的保

2、护作用。方法：采用H2O2处理培养心肌细胞，造成氧化应激模型，通过检测细胞培养液中LDH、CK漏出量、MDA含量和SOD活性反映诃子提取物含药血清对H2O2氧化模型的影响。结果：与模型组比较，诃子提取物含药血清能显著减少LDH、CK漏出量（P0.05,P0.01）；降低培养液中MDA含量（P0.05,P0.01），升高SOD活性（P0.01）。结论:诃子提取物含药血清可减轻H2O2对心肌细胞的损伤程度，对心肌细胞具有保护作用，其机制可能与稳定细胞膜和抗氧化有关。 【关键词】  诃子;过氧化氢;心肌细胞培养；血清药理学    Abstract 

3、Objective: To investigate the protective effects of the Terminalia chebula extract serum on myocardial cells injury in cultured rats induced by H2O2. Methods: Oxidative damage model were induced by H2O2, the leakage level of lactidehydrogenase (LDH), creatine kinase (CK), the content level of methyl

4、enedioxyamphetamine (MDA),the activity of superoxide dismutase (SOD) were measured in medium to observe the effects of the Terminalia chebula extract serum on myocardial cells injury in cultured  rats induced by Hydrogen peroxide(H2O2). Results: Compared with the model control, the content of L

5、DH, CK, MDA decreased significantly（P0.05,P0.01） and the activity of SOD increased significantly（P0.01）. Conclusion: the Terminalia chebula extract serum can mitigate injury of Hydrogen peroxide(H2O2) on myocardium ,it has protecting effect on damaged myocardium. It is suggested that the protecting&

6、#160; mechanism may be related to stabilizing  membrane and its antioxidant properties.    Key words  Terminalia chebula; Hydrogen peroxide; Cardiac myocyte culture; Serum pharmacology1  材料与方法1.1  实验动物Wistar大鼠乳鼠（14 d）,Wistar大鼠（体重200±20 g）,均购自内蒙古大学实验动物中心，合格证号：S

7、CXK（蒙）2002-0001。1.2  主要药品与试剂 诃子购自呼和浩特市凯蒙大药房，经内蒙古医学院药学院植化教研室庞秀生教授鉴定为使君子科植物诃子（Terminalia chebula Retz.）或绒毛诃子（Terminalia chebula Retz.Var. tomentella Kurt.）的干燥成熟果实。RPMI-1640、胎牛血清购自Gibco公司，过氧化氢（22）购自Sigma公司，乳酸脱氢酶试剂盒、肌酸激酶试剂盒购自北京北化康泰临床试剂有限公司，丙二醛试剂盒、超氧化物歧化酶试剂盒购自南京建成生物工程研究所。1.3  主要仪器 MCO

8、-15AC型CO2培养箱(日本三洋)，CJ-2F型医用净化工作台(苏州市金燕净化设备有限公司)，SCOUT-型半自动生化分析仪（意大利MENARINI公司）。1.4  方法诃子果实粉碎后用70 %丙酮提取3次，滤液合并后减压回收丙酮，用乙醚和乙酸乙酯分别萃取，挥干2。无菌迅速取出出生14 d的Wistar乳鼠的心脏，用PBS液充分洗净血液并去除多余组织，将心脏剪成约1 mm3的小块，加入5 mL 37 孵育的0.08 %胰蛋白酶，在恒温磁力搅拌器上、37 水浴消化8 min；首次消化所得的消化液弃之不用，再加入8 mL胰蛋白酶，依上述条件消化；将消化液转移入50 mL离心管中，并加入

9、等量培养基以终止消化，余下的组织块中再加入8 mL新的胰酶继续消化，重复多次，直至心肌组织全部消化；消化液以1 000 r/min离心10 min，弃上清液，再加入3 mL培养基混悬细胞沉淀，离心后弃上清液，再加培养基混悬；将此细胞悬液转移入培养瓶中，于37 、5 % CO2孵箱中静置120 min，差速贴壁以减少成纤维细胞的污染；收集培养瓶中的上清液，计数后稀释，接种入96孔培养板，继续培养3。将体重200±20 g Wistar大鼠按体重分层随机分成5组，每组5只。第1组为对照组，灌胃蒸馏水1 mL/100 g体重;第25组为诃子提取物、组，灌胃剂量分别为90.0 mg/100 g体重、60.0 mg/100 g体重、30.0 mg/100 g体重、6.0 mg/100 g体重；以上各组每日灌胃2次，连续3天。末次给药前12 h禁食、不禁水。末次给药后1 h无菌腹主动脉取血，静置过夜后，于次日3 000 r/min离心15 min，分离含药血清，-20 冰箱保存备用4。细胞培养实验中，每隔48 h换液一次，待有大部分心肌细胞搏动时开始实验。按随机原则分为6组：对照组：在培养基中加入对照血清，使对照血清的体积百分比含量为15 %，用溶有对照血清的培养基培养细胞30 h；模型组：方法同对照组，用含15 %对照血清的培养基培养24 h,然后加入H2O2，使其终浓度为