RNA抑制沉默和过氧化氢酶是CMV病毒2B蛋白与蛋白相互作用引起坏死的原因

1、浙江理工大学本科毕业论文外文翻译 RNA抑制沉默和过氧化氢酶是CMV病毒2B蛋白与蛋白相互作用引起坏死的原因原文出处：Jun-ichi I, Bo MK, Hanako S, and Chikara M. Virus-Induced Necrosis Is a Consequence of Direct Protein-Protein Interaction between a Viral RNA-Silencing Suppressor and a Host CatalaseJ.Plant Physiology Ò, August 2011, Vol. 156, pp.202620

2、36.Virus-Induced Necrosis Is a Consequence of Direct Protein-Protein Interaction between a Viral RNA-Silencing Suppressor and a Host Catalase许多植物宿主发病是因为病毒蛋白相互作用，但植物病毒如何诱发某种疾病的症状还需要进一步的研究。黄瓜花叶病毒（CMV-HL）可诱导在感染百合品系拟南芥（拟南芥）植物得离散坏死斑;其他的CMV株可诱导类似的斑点，但并不是所有都由CMV-HL诱导。众所周知RNA沉默抑制CMV的原理是启动2b蛋白（2b），参与病毒的诱导。在采

3、用原位接近连接测定免疫染色和原生质的测定中，报告显示，CMV2b的直接交互Catalase3（CAT3）在受感染的组织，在分解中有一个关键酶的作用是有毒性的过氧化氢分解的。有趣的是，CAT3，通常在细胞质（乙醛酸循环体）的局部，由2b和CAT3之间的相互作用到细胞核。虽然CAT3在转基因植物中的过表达降低的CMV积累和延迟的病毒症状发展到一定程度，2b中似乎以中和过氧化氢酶的细胞有助于主机防御反应，从而有利于病毒感染。我们的结果提供的证据表明，除改变的类型症状通过干扰微RNA途径和2b可以直接绑定到一个宿主因子是在清除蜂窝重要过氧化氢，从而与该主机因子干扰具体地说，导致一个特定坏死的诱导。 黄

4、瓜花叶病毒（CMV）属的病毒粒子包含单分子RNA1到RNA3递减顺序分子质量的三方单链RNA。基因组RNA1和RNA2编码复制酶蛋白1a和2a分别与RNA3编码运动蛋白3a上，亚基因组RNA，RNA4，编码外壳蛋白。2b蛋白（2b）中被编码在一个亚基因组RNA，RNA4A，其具有在RNA2 3端开放阅读框（ORF）（Ding等，1994）。该CMV2B蛋白参与局部和全身CMV运动通过RNA沉默抑制宿主防御，（Ding等，1995;纪，丁，2001年; Soards等人，2002年; Shi等人，2003年）并且还充当一种症状的决定因子，这显然与其RNA沉默抑制器（RSS）活动是相关联的（Bri

5、gneti等人，1998;露等人，2000）。该2B蛋白在其N末端包含两个核定位信号（核定位信号）（露等人，2000; Goto等人，2007），在受感染的组织被证实实际定位于细胞核中;2b蛋白的核定位信号是所需的病毒症状，诱导RSS活动（露等人，2000; Lewsey等人，2009）。近日，2B发现能结合Argonaute1（AGO1），必要时也作为植物抗病毒机械，与AGO4作用，也通过DNA甲基化过程，控制异形成和转录（Zhang等人，2006年; Gonza配音'lez等人，2010）。此外，据报道2b也直接绑定到小干扰RNA（Goto等，2007; Kanazawa等，201

6、1）。活性氧物种之一过氧化氢（H2O2），在许多生理现象如衰老，光呼吸和光合作用，生长和发育，以及对病原体的抵抗反应都有一定作用（Noctor和门厅，1998年中起重要作用;福尔曼和唐，2003; Peng等人，2005）。此外，宿主植物生成过氧化氢，作为主要信使以诱导过敏性细胞死亡。Catalase是一种酶存在于几乎所有的活的生物体，能分解H2O2，阻断其功能。在拟南芥（拟南芥）中，过氧化氢酶基因家族由三名成员组成，分别是CAT1，CAT2和CAT3（Frugoli等人，1996）。 CAT2和CAT3主要用于控制活性氧清除剂过氧化氢是稳态植物过氧化物酶体（Du等人，2008年a）。突变体C

7、AT2与CAT3通常显示萎黄的补丁和坏死性病变（孔滕托和Bassham，2010）。虽然CMV（CMV-HL）的百合菌株能诱发许多拟南芥生态型植物坏死。Columbia（COL-0）和兰茨贝格万寿菊，我们选择Col-0中实验，因为许多突变系可用于进一步研究。在拟南芥Col-0中，CMV诱导的植物鲜明坏死，这是与H2O2相关联的，被H2O2感染后产生的。在本文中，我们调查的CMV，和2b CAT3相互作用直接引起相关坏死，并发现细胞死亡确实诱导CAT3在2b中结合。在2b和CAT3之间蛋白质 - 蛋白质相互作用这一简单的和特定的基础上，我们可以开始解释CMV引起拟南芥坏死潜在的分子机制。结果CM

8、V-HL感染拟南芥引起叶坏死CMV可系统侵染拟南芥的各种症状，原因取决于特定结合病毒株和拟南芥的生态型。Col-0植物上接种CMVY株（CMV-Y），他们开发的系统花叶接种后10天，并在3周后症状接种，坏死性病变观察在上叶片。当Col-0中的植物接种CMV-HL后，病毒最初局部接种叶内传播速度与CMV-Y相比非常缓慢，但相比CMV-Y它引起的在上叶比更严重坏死（图1A）。图1.坏死的诱导和H2O2代由Y1H2Y3，一CMV-Y和CMV-HL之间pseudorecombinant拟南芥植物Col-0中。在感染CMV-的植物，坏死症状HL和Y1H2Y3在18 dpi的。 B，以10 CMV感染的植

9、物症状dpi的。 C，检测H2O2在Col-0中的植物感染Y1H2Y3使用过氧化氢敏感荧光探针H2DCFDA。叶子收获10 dpi的拍照使用任何明亮的场光显微镜（BF）或荧光显微镜（H 2 O）。需要注意的是坏死在与发荧光的部位有关。研发，症状COL-0叶（顶部小图）进行组织印刷（底板），以本地化CMV。图2.HL2b和过氧化氢酶之间的相互作用。在酵母twohybrid检测。每个质粒（pGADT7中，pGADT7中，CAT1，pGADT7中，CAT2，或pGADT7中-CAT3）的cotransferred用的pGBKT7-HL2b到酵母株AH109。转化AH109细胞铺在生长中无亮氨酸和色氨

10、酸（2LW;左图）或无亮氨酸，色氨酸，他的，和腺嘌呤（2LWHA;右图）。只有当表达的蛋白质彼此结合可以在细胞生长的合成培养基上。 看到网上文章，这个数字彩色版2B-CAT3相互作用诱导坏死植物生理学。卷 156，20112027。为了确定用于坏死诱导的病毒因子（S），我们创建pseudorecombinants、CMV-Y和CMV-HL。这三个基因组在CMV-Y和CMV-HL中的RNA分别被指定Y1到Y3和H1到H3。Pseudorecombinants在CMV-Y、CMV-HL和Y1H2Y3之间引起接种植物明显坏死的不同，这表明RNA2为重要症状原因之一。相反，对于原来的CMV-HL，我们

11、选择Y1H2Y3进一步分析坏死，因为不像CMV-HL可以系统地移动COL-0和CMV-Y一样快，并且在叶部诱导相差很大的坏死（图1）。Y1H2Y3在10天postinoculation（DPI）诱导坏死不同的上层叶，而CMV-Y诱导坏死的叶不在这个阶段（图1B）。通过Y1H2Y3感染被发现，如通过氧化测H2DCFDA; 2，7二氯荧光素二乙酸酯（图1C），坏死斑的引起与过氧化氢的产生关联增加。因为H2O2充当诱导防御基因，比如发病机理相关的蛋白（PR）的基因，我们分析了一些公关的表达基因。结果是，PR1和PR5水平有所提高，这意味着坏死可能是一种防御应答（参考图S1）。在组织印刷实验中，CMV

12、-Y和Y1H2Y3分布在整个上部叶片，但病毒聚结坏死的中心没有检测到斑点（图1D）。因为我们发现CMV-RNA2 HL（H2）对坏死是重要的，我们接着考虑是否RNA2编码的蛋白质（2a和/或2b）都参与了坏死。我们专注于2B，因为它已被提出，2b与 CMV症状有牵连，包括坏死（杜等人，2008年b）。HL2b与 CAT3在酵母双杂交实验中交互作用分析CMV2b如何参与坏死感应，我们开始将CMV2b的互动与宿主因子隔离。我们用酵母双杂交实验在拟南芥cDNA文库GAL4激活结构域矢量pGADT7中筛选基因，表达GAL4结合结构域诱饵载体所述HL2b框内融合同结合结构域（质粒pGBKT7-HL2b）

13、。已报告，虽然CMV2BS作为酵母中的转录激活剂（火腿等，1999年; Sueda等，2010），幸运的是，HL2b没有此功能。我们筛选了约5.0×106独立的酵母转化，并最终获得八个候选克隆。其中一个克隆即有很强的-半乳糖苷酶活性在双杂交测定选择用于测序，发现为所述CAT3基因（AT1G20620）。因为从pGADT7文库中分离CAT3基因不完全，验证HL2b和CAT3之间的相互作用然后克隆CAT3基因的全长ORF并复查它通过酵母双杂交测定法；包括两个拟南芥的过氧化氢酶基因（CAT1和CAT2）。过氧化氢酶基因（CAT1，CAT2，和CAT3）克隆到载体pGADT7分别创建pGAD

14、T7-CAT1，pGADT7，CAT2，和pGADT7-CAT3。每个构建体cotransferred与pGBKT7-HL2b到酿酒酵母菌株AH109。结果表明，HL2b确实与CAT3相互作用，但不与其他两个过氧化氢酶（CAT1和CAT2;图2）作用。要确定哪些领域2b与CAT3互动很重要，我们通过缺乏创造了几个HL2b缺失突变体C-末端氨基酸。C末端氨基酸用40个氨基酸残基缺失，创造了HL2bD40，在双杂交实验中突变2b失去与CAT3结合的能力，而病毒（C 2 H 1） - HL2bD40（C2-H1-HL2bD40）也失去了诱导坏死的能力，指示2b结合CAT3和坏死诱导之间的一个过程（图

15、3）。C 2 H 1是在CMV-Y型病毒载体的多克隆位点，代替了图2b基因（松尾等人，2007）。 HL2b的 C-末端区域2b和CAT3之间的相互作用很重要。过氧化氢酶活坏死的CMV感染的植物和转基因植物表达2B因为我们想，2b和CAT3之间的相互作用可诱导坏死，我们再测得的过氧化氢酶的活性在病毒感染的组织。CAT2和CAT3在叶里高度表达从而占据了大部分的过氧化氢酶的活性。这两个CAT2和CAT3敲除植物显示坏死的斑块病变，这表明不论CAT2还原还是CAT3都能导致坏死叶（孔滕托和Bassham，2010）。实际上，过氧化氢酶活显著减少了10 dpi的Y1H2Y3感染当与mock或CMV-

16、Yinoculated叶相比。对照植物（图4A）。图3. CMV-HL2b与拟南芥相互作用CAT3。 C端的，示意图HL2b为酵母twohybrid缺失突变体检测。该HL2b基因删除形式被融合到结合结构域在pGBKT7中载体（Clontech），并且CAT3 ORF插入在pGADT7中激活域载体（Clontech）。B-半乳糖苷酶的转录活性检测。加号（+）表示转录激活，而减去（2）表示阴性结果。氨基酸，氨基酸。 B，在Col-0中的植物的症状感染了C 2 H 1-HL2b或C2-H1-HL2bD40。重组HL2bs（HL2b，HL2bD12，HL2bD33，和HL2bD40）分别插在CMV载体

17、，C2-H1，为病毒接种实验。无坏死症状观察到Col-0中的植物感染的C2-H1-HL2bD40。 C，CMV积累水平。 ELISA进行分析CMV积累在Col-0中的植物。误差棒代表的装置SE。 OD405，光密度在405nm处。 图4.过氧化氢酶的活性，转录物和蛋白质的CMV感染的COL-0植物。在CMV-Y，mock-和Y1H2Y3- A，过氧化氢酶活接种的植物是通过测量在降低来测定A240在10 dpi的。过氧化氢酶的活性表示为毫摩尔min21 MG21蛋白。重复三次被完成。误差棒representSEof的手段。 C2-H1缺乏整个2B。 B，CAT（CAT1，CAT2和CAT3）的表

18、达水平在Col-0中的植物接种Y1H2Y3被确定模拟和CMV接种后定量RT-PCR2周。 错误酒吧representSE三次重复。 C，免疫印迹分析是使用特异性抗CAT3抗体进行。总蛋白提取在CMV接种叶在4 dpi与从上叶在4和7 dpi的。需要注意的是几乎没有差别，在CAT3的mock-和CMV接种植物之间的表达水平，表明CMV不影响CAT3积累。为了弄清楚拟南芥过氧化氢酶的mRNA基因水平（CAT1-CAT3）CMV感染明显下降，我们测量实时逆转录（RT）-PCR，并发现，没有影响对于任何过氧化氢酶的基因的mRNA水平（图4B）。Western blots使用CAT3特异性抗体印迹表明C

19、AT3也未在蛋白质水平（图改变。4C）。为了检查2B是否是通过Y1H2Y3坏死诱导COL-0叶子的决定因素，我们用转基因拟南芥植物表达HL2b基因（COL-HL2b;图5）。在这些转基因系，我们通过免疫印迹分析使用抗2B抗体，证实2b了的积累（图5B）。三转基因株系开发坏死的叶苗期联同H2O2，就像观察到的CMV感染的叶子（图5C）。这些结果表明，在COL-0叶上表达2B单独通过产生H2O2导致坏死，类似于在CMV观察到的感染拟南芥过程。我们还在Col-HL2b植物中测量过氧化氢酶的活动，发现过氧化氢酶在所有活动确实比非转基因植物低，过氧化氢酶的活性减少50（图5D）。图5.坏死的诱导和H2O

20、2代转基因Col-0中植物表达HL2b。在转基因的叶子，坏死症状植物表达HL2b（COL-HL2b）。 WT，野生型Col-0中。 B，在转基因植物第2b蛋白质的西方印迹分析。总蛋白（30毫克），这是从Col-0中（WT）萃取，巨细胞病毒感染叶（Y1H2Y3），和Col-HL2b（线路1，6和7），通过分离SDS-PAGE和印迹到聚偏二氟乙烯膜。然后将印迹用抗2b中进行免疫检测抗体。 C，检测H2O2在使用了COL-HL2b线过氧化氢敏感荧光探针H2DCFDA。需要注意的是坏死从转基因植物收获的叶片边缘是与荧光点有关。叶收获并拍照无论采用明视场光学显微镜（BF）或荧光显微镜（H 2 O 2）。

21、研发，在COL-HL2b线过氧化氢酶的活动。过氧化氢酶的活性如对于图4来确定。因此，我们认为，2B在转基因细胞的表达引起在过氧化氢酶的活性的降低，这可能引起过氧化氢的产生，从而导致坏死。HL2b与CAT3在COL-0细胞中相互作用与改变CAT3细胞定位确认双杂交的进一步的结果测定，并确定是否HL2b同伙与CAT3在COL-0细胞，我们在现场进行的Duolink邻近连接测定（PLA），一个方法来检测采用可视化两个主要的抗体蛋白和量化特定的蛋白质 - 蛋白质相互作用的在原处（因此¨derberg等人，2008）。根据该试验的原则，只有当两个靶蛋白是带荧光信号彼此接近来检测。Col-0中的

22、原生质体转染用质粒构建表达HL2b，CAT3与FLAG标签（CAT3-FLAG）和GFP（控制）。在带HL2b+ CAT3-FLAG转染的细胞，强荧光信号中的核分别定位（图6A），而在转染的细胞中没有检测到任何一个单独信号的质粒，表明2B-CAT相互作用是在细胞核。同比较HL2b-CAT3的互动，我们比较得到Y2B和CAT3之间较弱的信号，表明Y2B结合比HL2b到CAT3更弱（参考图。S2）。观察发现这是一致的，CMV-Y没有引起坏死的拟南芥一样强烈称为CMV-HL那样（图1）。2b和CAT3的亚细胞定位进行分析通过使用一个在PLA中的单个识别方法初级抗体。我们调查2b和CAT3之间是否相互

23、作用改变了原来的2b或CAT3定位。在转染的原生质抗-FLAG抗体与单纯CAT3，FLAG，CAT3信号通过可视化胞浆扩散（图6B）。原生质体转染HL2b+ CAT3-FLAG，在细胞质和细胞核均未检出CAT3信号，图2b最初被定位（图6，B和C），提示该CAT3被易位到与2b核上。我们还使用Y2B代替获类似结果的HL2b，这表明2b的蛋白质通常在体内与CAT3相互作用，尽管它们相互作用的强度不同（参考图。S2）。图6.在HL2b和原位之间的关联CAT3在拟南芥细胞。原生质体转HL2b，CAT3，FLAG，或HL2b +CAT3-FLAG。 BF表示与观察到的图像明视场光学显微镜。原生质体细胞

24、核利用赫斯特33342染色显现和UV光（紫外线）。为了检测原位分子互动，Duolink原位解放军套件被使用。 HL2b和之间，互动CAT3。抗FLAG初级抗体和CMV 2b中分别检测CAT3和2b分别。通过荧光显微镜，解放军来自德克萨斯州红（TX2）红色信号，理论上将被检测到时，才会有一个在体内相互作用间2b和CAT3。紫外线的图像和TX2被合并（合并列），以确定信号的精确定位。 B，亚细胞CAT3-标志的原生质体的定位。使用抗FLAG抗体CAT3检测作为TX2的红色信号。需要注意的是CAT3是在核检测到HL2b表达与CAT3基因，而该蛋白质分散在细胞无HL2b。 C，亚细胞HL2b的原生质体

25、的定位。 HL2b是使用抗2b的抗体检测，这产生了从TX2解放军红色的信号。正如预期的那样，HL2b是定位于细胞核。图7.CAT转基因表征（行4，6，和7）植物接种Y1H2Y3。 A，坏死延迟COL-CAT转基因植物与野生型Col-0中（WT）10 dpi的比较。 B，检测过氧化氢在控制和Col-CAT植物接种Y1H2Y3运用H2DCFDA。叶收获在10 dpi的拍照无论是明视光学显微镜（BF），或通过荧光显微镜（H 2 O）。C，在控制坏死的症状发展和Col-CAT转基因（行4，6，和7）的植物。症状的植物的百分数用10株为每个转基因系进行了计算。CAT3过表达增强耐CMV感染抗性我们发现，

26、病毒蛋白（2b）与体内宿主蛋白（CAT3）的相互作用，我们研究CAT3的表达是否不仅影响CMV2B（如症状外观）在转基因植物中表达。为了获得过表达CAT3基因的拟南芥植物，我们使用Ti质粒载体转化Col-0植物，其中CAT3基因的控制之下插入35S启动子。最终选择了三个正常生长的转基因（4，6和7），做接种实验（参考图。S3）。 通过Western印迹分析，我们证实了CAT3在这些转基因植物里有所增强。相同水平的三个CAT3下，过氧化氢酶的活性也有所增加（参考图S3）。当这些转基因株系接种Y1H2Y3后，在10 DPI，转基因植物并没有发现坏死，相反非转基因植物与H2O2相关联的有明显坏死图8

27、.CAT3和HL2b对细胞之间的相互作用的效应死亡的拟南芥Col-0中原生质体。对于A，比例细胞死亡转染COL-0原生质体在20小时转染GFP后（对照，10毫克），HL2b（5毫克）+ GFP（5毫克），绿色荧光蛋白（5毫克）+ CAT3（5毫克），或HL2b（5毫克）+ CAT3（5毫克）。由Evans蓝染色的细胞记为死亡。数据是细胞死亡后的百分比控制百分数减去背景。误差棒representSE的三次重复的装置。在装置的不同进行了评价用t检验; *在1的水平上显著。 B，过氧化氢酶在Col-0中原生质体的活动转GFP（对照组），HL2b+绿色荧光蛋白，绿色荧光蛋白+ CAT3，或HL2b+

28、CAT3在转染后20小时。 活动用分光光度法测定。误差线representSE的装置的三个重复。组间差异手段是采用t检验评估; *在5的水平上显著。症状（图7中的A和B）。另外，相比统计分析的非转基因植物坏死显著延迟，但所有植物最终都出现坏死，结果显示CAT3水平升高只延迟坏死的发作（图7C）。在原生质体里CAT3表达折中2B所诱导的细胞死亡为了确定HL2b细胞表达水平是否会导致细胞死亡，我们使用了拟南芥原生质体系统验证，这是我们以前开发分析诱导芜菁花叶病毒过敏反应样细胞死亡（Kim等人，2010）。当原生质体转染的Ti质粒表达HL2b，细胞死亡的百分比显著增加。然而，加入Ti质粒表达CAT3

29、否定细胞死亡由HL2b（图8A）诱导引起。 HL2b的共表达和CAT3导致过氧化氢酶的活性降低（图8B）。因此，这些结果表明，通过清除CAT3，HL2b可以诱导结合CAT3和损害的过氧化氢酶使细胞死亡，而且该HL2b-CAT3相互作用部分损害了H2O2。CAT3对2b的沉默抑制活性和CMV在原生质体的积累水平图9A示出了增强CAT3水平至少要等到7 dpi使转基因株系抑制CMV增殖。然而，在14 dpi，非转基因控制植物达到CMV水平。这些结果表明CAT3在病毒感染的初始阶段过度表达可能会赋予部分耐受。我们假设CAT3可通过灭活2b的RSS活性与2B结合，从而抑制CMV增殖。研究2b中CAT3

30、对RSS活性的影响，我们使用了我们先前原生质体法以衡量在细胞病毒RSS活动（志村等人，2008）。如图9B所示，CAT3表达RSS活动实际减少由30至40，但它并不影响另一病毒RSS，P19。与此相反，CMV感染没有下调CAT3;当非转基因植物上接种CMV，病毒感染无论是在mRNA或蛋白质水平都没有影响CAT3（图4）。2B与CAT3的结合是非常重要的对于细胞死亡，但是CAT3核易位并不如此最后，为了回答这个问题，其中重要的是2b诱导的细胞死亡，所述2b与CAT3的结合或CAT3随后易位到核，我们创建了一个突变HL2b（HL2bDNLS）的缺乏其核定位信号（NLS1和NLS2;图10A）。然后

31、，我们进行原生质体实验，观察细胞死亡和CAT3和HL2bDNLS的定位。原位PLA揭示了，无论是HL2bDNLS或者CAT3是定位于细胞核，两种蛋白质相互结合（图10，B-D）。如图10E，HL2bDNLS仍然可以诱导细胞死亡作为有效作为地道的HL2b。因此，这些结果表明，2b与CAT3结合是很重要的，可以抑制过氧化氢酶的活性。讨论病毒因子和主机之间的直接互动因子症状感应许多试图寻找必要的病毒复制和移动的宿主因素，这实际行为病毒蛋白，已经作出澄清的分子机制用于病毒致病性。 例如，石桥等人的审查。 （2010），更超过10宿主因子的烟草花叶病毒的增殖已经确定了。图9.增强抗CMV由CAT3表达原

32、生质体和Col-CAT转基因植物。 CAT3表达的，效果上Y1H2Y3在COL-CAT植物的积累。定量RT-PCR方法检测CMV的COL-CAT的积累转基因植物接种Y1H2Y3。值进行归使用将b微管蛋白基因的mRNA水平。对于价值非转Col-0中的植物在4 dpi的设定为1.0。的值代表装置withSE三次重复获得。在手段的差异组间采用t检验进行了评价; *在5的水平上显著。 B，CAT3过表达对HL2b的RSS活性。 N.本塞姆氏的原生质体共转染的pBI-Fluc（0.3毫克），PE-与Rluc（0.03毫克），dsFluc（0.03毫克），和病毒抑制（HL2b或P19;质粒的3毫克）与CA

33、T3（0,1一起，和3mg质粒）。 GFP（3毫克）用作对照。在转染后20小时，Fluc活动处理过的原生质体进行测定。 Fluc活性则分通过与Rluc活性，以及用于模拟处理的值设定为1.0。该值表示的手段withSDfrom三次重复。需要注意的是此外CAT3下降HL2b的RSS活动，但并没有影响该P19的。这些因素在病毒的致病性作用以及病毒乘法，用作宿主范围或症状决定因素是确定的。也有许多报道描述在细胞生理学的扰动期间症状间接变型的植物，如相互作用宿主因素的病毒RSS对主机RNA沉默机械，不仅用于防御病毒也用于植物发育。例如，CMV2B蛋白可以干扰AGO1蛋白沉默RNA结合到宿主，从而导致干扰

34、微RNA定向生理CMV组感染植物（Zhang等人，2006）。但是，也有少数报告病毒与宿主之间蛋白质 - 蛋白质相互作用机制，病毒蛋白的直接作用和特定宿主的内部函数干扰因子都由症状表型不同来表现。Zhu等人 （2005）研究中，证明P2蛋白质之间的水稻矮缩病毒（RDV）和水稻（Oryza sativa）entkaurene氧化酶有直接互动，它在生物合成中通过GAs发挥作用;这种相互作用导致激素降低，被感染的植物发育迟缓。更有趣的是，他们还提出一种可能性，即互动实际上可能会降低植物抗毒素的生物合成并使植物更加合适病毒复制，这表明相互作用显然对病毒有利。我们提供更图10.CAT3和细胞的细胞定位在

35、原生质体转染死亡诱导HL2bDNLS。的，示意图HL2bDNLS。该突变体的缺失2核定位信号（NLS1和NLS2）。氨基酸，氨基酸。 B，在HL2bDNLS和CAT3之间原位协会在拟南芥细胞。从原生质体中分离Col-0中的植物转染HL2bDNLS+ CAT3和20小时后收获。在TX2信号只有理论上检测到2b和CAT3在体内相互作用。 C，亚细胞定位对CAT3-标志原生质体。 CAT3检测使用抗FLAG抗体作为TX2的红色信号。研发，在原生质体HL2bDNLS的亚细胞定位。使用抗HL2bDNLS检测CMV 2b的抗体作为TX2的红色信号。 E，细胞对COL-0原生质体转染死亡HL2bDNLS。将原生质体转染用绿色荧光蛋白（对照组），HL2b，或HL2bDNLS。在20h后，细胞死亡进球了，染色Evans蓝原