血清尿素氮谷氨酸脱氢酶测定法

1、血清尿素氮（BUN谷氨酸脱氢酶测定法1 .实验原理月尿酶-谷氨酸脱氢酶（Urease-GLDH ）连续监测法。尿素被月尿酶水解产氨。 在NADH的存在下，氨和a -酮戊二酸反应生成谷氨酸，NADH同时被氧化成NAD +。NADH的减少和样品中尿素浓度成正比。本法是连续监测法。月尿酶尿素 + 2H 2。*2 NH 4+ + 2 HCO 3谷氨酸脱氢酶NH + a-酮戊二酸 +NADH* L-谷氨酸 +NAD+ +H2O2标本：1.1 病人准备：血清无特殊要求。要留取24小时尿样。1.2 类型：血清、血浆（不可使用肝素钱）、新鲜尿液。无溶血和凝块的血清， 如果必须使用血浆，建议使用无钱离子的抗凝血

2、剂，如EDTA和肝素钠。用新 鲜尿液作样品时，用蒸储水作1:100稀释。3 .标本存放：血清或血浆稳定性：425 c保存可稳定7天；-20 C保存可稳 定1年。尿液稳定性：2025 c保存可稳定2天；48 c保存可稳定7天； -20 C保存可稳定1个月。4 .标本运输：常温条件下保存运输。5 .标本拒收标准：细菌污染的标本。6 .实验材料6.1 试剂：申能尿素测定试剂盒（142 3107170 1试剂1 :6X 64ml +试剂2:6X 16ml ）6.1.1 试剂组成试剂1 :Tris 缓冲液pH7.8120mmol/La -酮戊二酸7mmol/LADP0.6mmol/L谷氨酸脱氢酶>

3、 1000U/L月尿酶> 6000U/L试剂2:NADH0.25mmol/L6.1.2 试剂准备：试剂为即用式。6.1.3 试剂稳定性与贮存试剂保存于225 C ,若无污染，可稳定至失效期。试剂不可冰冻。6.1.4 变质指示：当试剂有看得见的微生物生长，有浊度，或者未开盖的液 体有沉淀时，表明试剂已变质，不能继续使用。6.1.5 注意事项：此试剂为体外诊断用。不要入口，吞下有害。保护剂为叠 氮钠，避免接触皮肤及粘膜，与下水管中的铅反应形成爆炸性化合物，即使 只含有少量的叠氮钠，如果排向下水道请用大量的水冲洗。应采取必要的预 防措施使用试剂。6.2 校准品：使用DiaSys 公司提供的Tr

4、uCal U 校准品对自动分析仪进行校 准，具体参见生化检验校准品和质控品.SOP文件。6.3 质控品：具体参见生化检验校准品和质控品.SOP文件。7 .仪器：贝克曼AU680生化分析仪8 .操作步骤8.1 项目基本参数：参见生化检验贝克曼AU680生化分析仪项目测定参 数.SOP文件8.2 仪器操作步骤：参见生化检验贝克曼AU680生化分析仪操作规程.SOP文 件9 .检验结果的判断与分析10 .质量控制：在每一批标本中都应把非定值血清水平I与II质控做为未知 标本进行分析，以2s为质控警告限，3s为失控限，绘制质控图，判断是否 在控。质控规则参见生化室室内质控操作规程.SOP文件。11 .

5、计算方法：以TruCal U复合校准品尿素氮校准值校准仪器后，在病人结 果可报告范围内，仪器直接报告可靠的检测结果，以mmol/L报告。将尿素量 乘以系数2.8可以换算成尿素氮量；将尿素氮量乘以系数0.357 可以换算成 尿素量。手工测定计算方法为：Au尿素氮浓度（mmol/L ） = x校准液浓度As12 . 参考值范围血清/血浆1成人（mmol/L ）全球2.87.2女性50岁2.6 -6.7女性50岁3.5 -7.5男 性 <50 岁3.27.3男 性 >50 岁3.09.2儿童13岁1.86.0413 岁2.56.01419 岁2.97.5尿 素 /肌 酐 比 率 125，

6、40(mmol/L)/(mmol/L)尿 液 20.430.72mol/d（ 注 ：各 实 验 室 应 有 自 己 的 参 考 范 围 。 ）参 考 值 因 性 别 、年 龄 、饮 食 和 地 域的不同而有所差别。根据好的实验室经验，每个实验室应建立自己的参考 值。13 . 临 床 意 义 ： 尿 素 是 蛋 白 质 分 解 代 谢 的 含 氮 终 产 物 。 高 尿 素 血 症 或 氮 血 症 表现为血液中尿素水平升高。鉴别肾前和肾后氮血症时可以同时检测尿素和 肌酐。因脱水、蛋白质代谢增加、皮质醇治疗或肾脏灌注减少等引起的肾前 氮血症，表现为尿素水平升高而肌酐水平正常。由泌尿管道阻塞引起的肾

7、后 氮 血 症 ，表 现 为 尿 素 和 肌 酐 水 平 都 升 高 ，但 肌 酐 升 高 程 度 较 小 。发 生 肾 病 时 ， 肾 小 球 滤 过 作 用 明 显 下 降 或 蛋 白 质 摄 入 量 大 于 200 g/ 天 都 会 导 致 尿 素 浓 度 升 高。尿素氮的检测用于诊断和治疗某些肾脏疾病和代谢紊乱。尿 素 氮 大 约 占 血 液 中 非 蛋 白 氮 的 75%。 它 通 过 肝 脏 中 的 氨 进 行 合 成 ， 是 蛋白质脱氨作用的产物。通过肾小球从血液中过滤尿素到尿中，是消除体内 多余氮的主要方法。血液尿素氮（ BUN）水 平 是 肾 功 能 以 及 肾 前 状 态

8、和 肾 后 状 态 的 度 量 标 准 ，肾 前 因素引起的BUN 的升 高 包 括 心 脏 代 偿 失 调 ， 缺 水 或 增 加 的 蛋 白 质 分 解 代谢。水平增加的肾脏因素有急性肾小球肾炎，慢性肾炎，多囊肾，肾纤维化 和肾小管坏死。任何类型的泌尿道的梗塞受阻是BUN水平升高的肾后因素1。 肾小球清除尿素和肌酸酐，但是，尿素随后部分地被肾小管重吸收，然而肌 酸酐却不会。因此，血清尿素氮和血清肌酸酐测定经常同时用于肾功能的不 同诊断中。14 . 操 作 性 能14.1 线性范围：0.3 50mmol/L14.2 精 密 度 ：精 密 度 的 评 估 是 根 据 NCCLS 推 荐 的 标

9、 准 方 法 ， AU680 批 内 不 精 密 度 小 于 3%，总 不 精 密 度 小 于 5%。用 于 分 析 的 质 控 血 清 和 数 据 处 理 符 合 以 上 的 NCCLS 的 规 则 。批内精密度n=20x(mmol/L)s(mmol/L)CV(%)天间精密度n=20x(mmol/L)s(mmol/L)CV(%)样品14.960.275.41样品15.230.305.79样品28.770.273.13样品28.770.343.87样品319.480.251.27样品319.480.552.8614.3 方法学比较：本公司的试剂（y）与某商品化试剂（x）,同时对68个样品 进行

10、 Urea 检测，将检测结果作方法学比较，其统计结果如下： y=0.99x+0.176mmol/L; r=0.999 。14.4 灵敏度：本试剂的检测限为0.3mmol/L 。14.5 病人结果可报告范围：0.350mmol/L15 . 超出范围结果处理：本法线性上限血清/血浆为 50mmol/L、尿液为 5mol/L 。如样品测定值超过上限时，应将样品用0.9%的氯化钠溶液作1:2稀释，重新 测定，结果乘以3。16 .病危报警值的处理：当尿素氮测定值36mmol/L 时，在经过复查等确认 手段处理后应及时向临床主管医生汇报。17 .方法局限性17.1 本法线性上限血清/血浆为50mmol/L

11、、尿 液为5mol/L 。如 样品测定值超 过上限时，应将样品用0.9%的氯化钠溶液作1:2稀释，重新测定，结果乘以 3。17.2 干扰物质：当样品中抗坏血酸浓度1704 Nmol/L ,胆红素浓度 684 Nmol/L ,血红蛋 白浓度5.00g/L,甘油三 酯浓度22.6mmol/L时 没有观察到干扰。俊离子会影响检测结果，因此收集血浆时勿用肝素钱抗凝！ 18.补救措施：当仪器发生故障时，迅速联系仪器厂家进行维修。19. 参考文献1. Thomas L, editor. Clinical laboratory diagnostics. 1st ed. Frankfurt: TH-Books Verlagsgesellschaft; 1998.p.374-7.2. Burtis CA, Ashwood ER. editors. Tietz textbook of clinical chemistry. 3rd ed. Philadelphia: W. B. Saunders Company; 1999.p.1838.3. Talk H, Schubert GE. Enzymatische Harstoff bestimmung in Blut undSerum im optis