微生物学检测方法在牛奶中青霉素残留的应用�

1、微生物学检测方法在牛奶中青霉素残留的应用?    【中图分类号】S859.84 【文献标识码】A【文章编号】1005-0019(2009)6-0375-01 牛奶中抗生素残留是个全球性问题,日益受到世界各国政府的重视。世界粮农组织( FAO)、世界卫生组织(WHO)的食品法对食品中抗生素最高残留限量都有明确的规定,明文禁止抗生素残留超出最高残留限量(MRL)的牛奶上市,牛奶中青霉素G的最高残留限量已从1976年的0. 05u/mL提高到目前的0. 004u/mL。? 随着消费者和国家主管部门对动物源性食品安全的重视, 1999年我国农业部公布了中国动物源

2、性食品中残留物质监控计划(农牧发19998号文),开始对动物源性食品中兽药残留,包括牛奶中青霉素G等抗生素残留进行监测,以保证动物源性产品的卫生安全;2001年和2002年,农业部又先后公布了无公害食品生鲜牛乳(NY/T5045-2001)业标准,规定了“抗生素不得检出”。? 1 国际上微生物学检测方法在牛奶中青霉素残留的应用现状? 1.1 微生物生长抑制法:初期的方法是根据不同敏感菌株的生抑制来检测食品中的抗菌药物残留。这些方法最早用于临床医学的,主要是微生物琼脂扩散试验或使用接种菌株的产酸或凝固抑制试验。? 1.2 微生物受体法:微生物受体分析法CHARM I和CHARM II比生长抑制分

3、析法用途更广,可适用于检测不同基质样品中各种抗生素残留。CHARM I是专用于牛奶中-内酰胺抗生素残留检测方法,也是美国AOAC承认的第一个快速测定法,这个方法非常快速和灵敏, 一个奶牛样品分析只需15min时间,可以使奶牛场的生鲜牛奶在没有进入牛奶加工厂前就能对-内酰胺类抗生素残留进行检测。? 检测牛奶中抗生素残留的步骤相对简单、快速,如对于-内酰胺类抗生素残留的检测, 5mL的牛奶样品和14 C标记-内酰胺类抗生素、微生物受体混合,在85培养4min,离心,弃去上层液,沉淀物用水混悬加闪烁液,对筛选样品计数1min。牛奶中的-内酰胺类和磺胺类抗生素残留的检测限低于5ng/mL, 四环素的检

4、测限为500ng/mL。这个方法灵敏度高,可作为传统微生物法的补充,进行复合筛选。? 2 微生物学检测方法的影响因素? 对于牛奶样品,除了加热破坏自然的抑菌物质外,不需要进一步处理,但是,有些抗生素存在热不稳定性。当生鲜牛乳直接被检测时,一般需要临界状态的评价,因为自然的抑菌物质,如未分化的体细胞、免疫球蛋白和代谢产物可能引起抑菌圈,此外, pH的偏差,使用的纸片上含有抑菌物质,工作用镊子太热或没有清洗干净等,也容易引起假阳性的结果。有许多因素影响到微生物分析法的检测结果。主要的影响因素是检测的抗生素种类和测试用菌种,尤其是菌种问题。而琼脂培养基的配方和pH值、测试菌种的类型、培养温度,培养基

5、厚度和培养方法等也是很重要的影响参数,因此在检测中采用标准化操作规程是必要的。? 3 我国对牛奶中青霉素残留检验方法应用现状? 我国关于牛奶及奶制品中抗生素检测的国家标准方法最早出现在牛乳检验方法GB5409-85中,采用TTC法。1994年制订的食品卫生微生物学检验鲜乳中抗生素残留量检验GB /T 4789. 27-1994,也采用TTC法。2001年9月,农业部发布的无公害食品生鲜牛乳行业标准中,检测方法同GB5409-85,并不得检出。绿色食品消毒牛乳标准也做了类似规定。? 微生物学检测方法非常适合于基层单位使用,用于对所检分析物进行分离和定量,并提供一些定性的信息,常用的高效液相色谱法

6、和气相色谱法就是此类方法,但这些方法需要精密仪器,且操作复杂,不利于大面积推广。微生物抑制法中的嗜热脂肪芽胞杆菌纸片法和微生物受体法CHARM II的检测限完全能达到我国对牛奶中青霉素最高残留限量MRL 的要求,比TTC法的精确性和时效性都好,虽然只能检测某一类的抗生素残留,不能对某一抗菌药物作出定性的确认,但作为牛奶中的青霉素残留的筛选检测方法,仍为一种简单、快速、效果明显的方法。? CHARM II法比嗜热脂肪芽胞杆菌纸片法检测时间更短,检测限更低,但检测成本较高,而后者虽然检测时间较长,但检测成本低廉,不需要昂贵的检测设备,更适合于基层单位的常规检测。为了保障人民食品安全,适应WTO的要

7、求,增强国内牛奶及乳制品业的国际竞争力,必须将牛乳中抗生素残留的检测纳入常规检测中去。首先要制定相应的法规和检测程序,将牛奶和乳制品中抗生素的检测、报告、处罚和管理等纳入法制化轨道,适应市场经济就是法制经济的要求;其次要修订、制订乳制品标准,将抗生素的检测纳入国标体系。加大采用国际标准的比例,同国际标准接轨;再次是要进行抗生素检测方法筛选工作,提高国产试剂盒的研制能力,努力研发一些简单、快速、经济和便携的能检测多种抗生素残留的分析技术; 发展高效、高灵敏的联用技术和多残留组分确证技术。相信以上措施的实施将提高我国牛奶及乳制品中抗生素残留检测水平,为消费者的饮食健康提供有力的保障。? 参考文献? 1 刘平, 李玉光,冯梦友,等. 用生物电化学传感器检测牛奶中残留的青霉素J. 光散射学报, 2005, 17 (1) : 61-63? 2 叶兴乾, 刘东红, 陈健