动物生长与代谢实验指导（补充）

1、动物生长与代谢实验指导（补充）动物营养实验室2006年2月实验项目实验指导实验一 尿液肌酐含量的测定参见本实验指导实验二 动物血浆血糖测定（酶试剂盒法）实验三 饲料中干物质的测定参见胡坚主编动物营养学实验指导及北京农业大学主编家畜饲养实验指导实验四 饲料中粗灰份的测定实验五 饲料中钙的测定实验六 饲料中磷的测定实验七 饲料中粗蛋白质（N×6.25）的测定 实验八 能量的测定 实验一 尿液肌酐含量的测定1 原理尿液中的肌酐与碱性苦味酸盐作用，生成黄红色的苦味酸肌酐复合物。2 试剂2.1 0.04mol/L苦味酸溶液：苦味酸（A.R）9.3g 溶于80蒸馏水500ml中，冷却至室温，加蒸

2、馏水至1升。用0.1mol/L滴定，以酚酞作指示剂。根据滴定结果用蒸馏水稀释至0.04mol/L，贮存棕色瓶。2.2 0.75mol/L氢氧化钠：（A.R）30g加蒸馏水使其溶解冷却后，用蒸馏水稀释至1L。2.3 肌酐贮存标准液（1mg/ml）：肌酐（A.R）0.1g以少量0.1mol/L盐酸溶解，并移入100ml容量瓶中，再以0.1mol/L盐酸稀释至刻度。保存于冰箱内。2.4 肌酐应用标准液（0.02mg/ml）：准确吸取肌酐贮存标准液2.0ml，加入100ml容量瓶内，以蒸馏水稀释至刻度，加氯仿数滴防腐。3 操作步骤3.1 取羊尿5ml 3000转/分，15分钟离心，取上清液备用。3.2

3、 上清液取1ml，稀释100倍。3.3 标准曲线的制作标准管操作管号0123456肌酐应用标准液0.02mg/ml00.751.52.253.03.754.5蒸馏水54.253.52.752.01.250.50.04mol/L苦味酸溶液11.001.01.01.01.01.00.75mol/L氢氧化钠11.001.01.01.01.01.0混匀后，放置15分钟，用分光光度计比色OD520nm3.4 样品的测定 测定管操作管号789101112尿液稀释液223355蒸馏水3322000.04mol/L苦味酸溶液1.001.01.01.01.01.00.75mol/L氢氧化钠1.001.01.01

4、.01.01.0混匀后，放置15分钟，用分光光度计比色OD520nm4 计算标准方程的计算样品肌酐含量（g/ml）的计算尿液原液中的肌酐含量（g/ml）的计算实验二 血糖测定（酶试剂盒法）1 原理葡萄糖+H2O+O2 葡萄糖氧化酶 葡萄糖酸+H2O22H2O2+氨基安替比林+酚 过氧化物酶 红色醌类化合物+H2O 用波长505nm比色测定红色醌类化合物的吸光值，与测定葡萄糖标准液吸光值比较，计算标本中葡萄糖含量。2 试剂主要成分及包装包装 主要成分酶制剂： 葡萄糖氧化酶 （10ml，浓缩型） 过氧化物酶 磷酸盐缓冲液pH 7.0 4-氨基安替比林酚试剂（5ml，浓缩型）：酚葡萄糖标准液1支：5

5、.55mmol/ L（应用型酶制剂100ml，酚试剂100ml，成分与浓缩型相同。）3 储存及稳定性3.1 原装浓缩型试剂4-80C保存，有效期一年。3.2 应用型试剂4-80C保存，有效期一年。3.3 配制成酶酚混合试剂在4-80C冰箱内可存放一个月。 4 操作步骤4.1 采血 事先准备好以0.15%氟化钠生理盐水稀释的肝素抗凝液，并准备好接血用的小烧杯，使血液流入用稀释肝素浸湿的小烧杯中，轻轻摇动烧杯，防止血凝将每支采血试管于天平上称重，并记录。4.2 血样的处理及保存4.2.1 轻轻混匀采血管（每支管的混匀次数一致），于天平平衡后3000转/分下离心15分钟。4.2.2 以100l的加样

6、器吸取各100l，按标号加于备好的测糖管中（双样）， 4.3 血糖浓度测定4.3.1 按每管1.5ml的量混合酶酚试剂（约配60ml，各取30ml混匀），并备好加水烧杯和葡萄糖标准管（注意混匀）。4.3.2 各样品管（待测样100l，双样）加蒸馏水0.4ml，再加入酶酚试剂1.5ml，充分混匀。4.3.3 按下表配制标准曲线管及测定管试管号标准管测定管12345678910葡萄糖标准液（l）020406080100待测样30305050标准液浓度（nmol/管）0111222333444555H2O（ml）0.50.480.460.440.420.40202000酶酚试剂（ml）1.51.51.51.51.51.51.51.51.51.