佛甲草对小鼠实验性肝损伤的保护作用

1、佛甲草对小鼠实验性肝损伤的保护作用                作者：周青 刘建新 周俐 熊小琴 赵海燕【关键词】  ,佛甲草；实验性肝损伤；保护作用；脂质过氧化摘要：目的:观察佛甲草对小鼠实验性肝损伤的保护作用。方法:分别采用四氯化碳（CCl4）、萘异硫氰酸酯（ANIT）一次性灌胃中毒致小鼠急性肝损伤及黄疸模型，测定血清谷丙转氨酶（ALT）、总胆红素（TBiL）含量及血清、肝组织中丙二醛（MDA）、超氧化物歧化酶（SOD）、一氧化氮（NO）水

2、平和观察肝组织病理变化，分析佛甲草对上述指标的影响。结果:佛甲草能明显降低CCl4中毒性小鼠血清ALT、血清及肝组织中MDA含量（P0.01）,使SOD，NO水平显着增高（P0.01，P0.001）; 能明显降低ANIT中毒性小鼠血清TBil含量(P0.001); 肝脏病理组织学检查表明佛甲草能明显减轻肝细胞的变性和坏死。结论: 佛甲草对CCl4和ANIT所致的急性肝损伤有保护作用, 其机理可能与抗脂质过氧化及改善肝脏微循环, 恢复肝脏功能的作用有关。关键词：  佛甲草；  实验性肝损伤；  保护作用；  脂质过氧化Protective Effects&

3、#160; of  Sedum  Lineare  Thunb  on Experimental Acute   Hepatic  Injury in  Mice Abstract：Objective:To observe the protective effects of solution  isolated from sedum lineare  thunb on  experimental   acute  hepatic liver  i

4、njury in  mice. Methods:To observe the contents of total bilirubin and alanine aminotransferase (ALT)in serum ,the  contents of malondialdehyde(MDA) , activity of superoxide dismutase (SOD) , level of nitrogen monoxide in serum and  liver tissue ,hepato-pathohistologic  changes C

5、Cl4,naphthalin fluorescein isothiocyanate(ANIT) inducing  acute liver  injury and icterus  respectively in  mice  po, the effects of sedum  lineare  thunb on  the biochemical  changes  were analysed. Results:The results showed the extract of sedum li

6、neare thunb could significantly decrease the contents of ALT in serum  and  the contents of  MDA in serum and liver tissue respectively  in CCl4 toxicomice（P0.01）, increase  the activity of  SOD and  the level of NO  in serum and liver tissue respectively（P0.0

7、1，P0.001）;the extract could markedly reduce the contents of TBil in serum in ANIT toxicomice(P0.001). The result of hepatopathohistologic examination  showed   the extract effectively decreased degeneration and necrosis of liver cells. Conclusion:The  extract of sedum lineare thu

8、nb has the protective effects on acute liver injury in mice induced by  CCl4   and ANIT.The  mechanism is likely related to its ameliorating microcirculation and  anti-lipid  peroxidation.Key words：Sedum  lineare  thunb;  Experimental hepatic injury; 

9、; Protective effect;  Lipid  peroxidation   佛甲草（sedum  lineare Thunb）为景天科植物佛甲草的全草，性味甘寒，具有清热、解毒、消肿等功效，民间用于治疗黄疸、迁延性肝炎、咽喉肿痛、痢疾等症1。有关佛甲草对小鼠实验性肝损伤的保护作用目前尚未见报道，故而进行了初步研究并探讨其机理。1  材料与方法1  材料1.1  佛甲草提取液的制备  佛甲草采自赣州,夏天采集，晒干后粉碎成粗粉，取适量蒸馏水加热提取2次,30  min/次,过滤,合并2

10、次滤液并浓缩至适量,加入相当浓缩液3倍量的95%乙醇,放置冰箱48 h后减压过滤,滤液回收乙醇至无醇味,用蒸馏水调整至含4 g/ml的生药液。1.2  试剂  四氯化碳,分析纯，上海长江化工厂； 萘异硫氰酸酯；化学纯；北京通县育才精细化工厂；谷丙转氨酶试剂盒,卫生部上海生物制品研究所；总胆红素试剂盒，四川迈克科技有限公司；丙二醛、超氧化物歧化酶、一氧化氮试剂盒，南京建成生物工程研究所提供。1.3  动物  昆明种小鼠，体重(20±2)g，雌雄兼用，赣南医学院实验动物中心提供。1.4  仪器   400型全自动生化仪

11、，日本奥林巴斯公司；721型分光光度计,上海精密科学仪器有限公司。2  实验方法2.1  急性毒性实验健康昆明种小鼠50只，均衡随机分为5组，每组10只。按急性毒性实验方法2设计药物剂量的组间距为10.9。一次性ip0.2 ml/10g佛甲草提取液后,观察小鼠运动、呼吸、皮毛反应、进食等情况并记录3 d内死亡数。2.2  CCl4造模与检测48只昆明种小鼠，每组12只，随机分成4组，分别为对照组，CCl4模型组，治疗组，治疗组。对照组和模型组分别灌胃生理盐水10 ml/kg；治疗组小鼠灌胃佛甲草提取液4 g/kg；治疗组灌胃佛甲草提取液5 g/kg。1次/d，连续

12、15 d。末次给药后2 h，正常组腹腔注射等容量花生油，其余各组均腹腔注射0.1%CCl4花生油溶液10 ml/kg一次。禁食，自由饮水。16 h后各组小鼠断头取血。以12 000 r/min离心5min，取血清，采用400型全自动生化分析仪测定ALT活性；采用分光光度法测定MDA，SOD，NO稳定终产物硝酸盐/亚硝酸盐水平（NO3/NO2）。MDA 含量测定采用硫代巴比妥酸法，SOD活力测定采用黄嘌呤氧化酶法， NO测定采用硝酸还原酶法。取适量肝组织用冰冷生理盐水冲洗，置冰浴中匀化制得10%肝匀浆，以3 500 r/min离心10min，取上清液测定MDA，SOD，NO3/NO2水平，蛋白定

13、量采用考马斯亮兰法,以牛血清白蛋白为标准。具体步骤均按各试剂盒说明书操作。另取各鼠相同部位的肝脏用10%福尔马林溶液固定，采用常规石蜡切片，HE染色，光镜下观察肝细胞变性坏死程度。分级标准：在1个肝小叶中，（+）表示只有几个细胞发生相应的病理改变，分布散在；（+）表示50%左右细胞发生相应的病理改变，分布较广；（+）表示绝大多数细胞发生相应的病理改变，分布弥散；（）表示未发生相应的病理改变。2.3  ANIT造模与检测昆明种小鼠60只，每组15只，分组及用药处理同前。除正常组外，其余各组分别于第13天给药后2 h 灌胃ANIT花生油溶液60 mg/kg一次。所有小鼠在ANIT中毒前和

14、处死前分别禁食18 h，自由饮水。ANIT中毒48h后断头取血。离心，取血清，采用400型全自动生化分析仪测定TBil含量，具体步骤按试剂盒说明书操作。2.4  统计方法 数据以 ±s表示，采用双侧t检验进行统计处理。         1  江苏新医学院. 中药大辞典,上册M.上海：上海科学技术出版社，1990：11421142.2  李仪奎. 中药药理实验方法学M.上海：上海科学技术出社，1990：529529.3  严奉祥，朱炳阳，郑  兴，等.金粉蕨

15、素对小鼠实验性肝损伤脂质过氧化的保护作用J.南华大学学报，2002，30(1)：44.4  刘春宇，顾振纶，韩  蓉，等.沙苑子提取物对小鼠四氯化碳肝损伤的保护作用J.中草药，2002，33(12)：11041104.5  李  锋，李宣海，谢良民.维生素E和硒对CC1、大鼠急性肝损伤和抗氧化功能的影响J.胃肠病学， 2002，7（6）：338338.6  Marcelo NM, et al . Nitric oxide V Therapeutic potential of nitric oxide donors and  inhibitorsJ. Am J