植物基因工程概论2

1、化学法诱导DNA直接转化v以原生质体为受体，借助特定的化学物诱导DNA直接导入植物细胞的方法。v化学诱导DNA直接转化的主要方法有PEG介导基因转化和脂质体介导基因转化。物理法诱导DNA直接转化v物理转化法是基于物理因素对细胞膜的影响，通过机械损伤直接将DNA直接导入植物细胞的方法。v物理转化法主要有电激法介导基因转化、超声波介导基因转化、显微注射介导基因转化、激光微束介导基因转化、基因枪法介导基因转化等。种质转化系统v还有一类转化系统不同于以上两种转化系统，而是借助生物自身的种质细胞为媒体，特别是植物生殖系统的细胞及其结构来实现转化的目的，将之称为种质转化系统。 种质转化系统主要有： 花粉管

2、通道法介导基因转化、生殖细胞浸泡法介导基因转化、花粉管通道法介导基因转化、生殖细胞浸泡法介导基因转化、胚囊、子房注射法介导基因转化。胚囊、子房注射法介导基因转化。种质转化系统的特点v转化的DNA可以是裸露的，也可以重组在质粒DNA上。v转化过程不依赖于物理化学过程，而依靠生物自身的种质系统或细胞功能来实现。v不需要植物组织、细胞、原生质体等的离体培养。v植物整体水平上的转化。v方法简便易行，并预常规育种紧密结合。植物基因转化系统的选择策略v一个好的基因转化系统应该具备的特点： 转化率高；工作效率高； 宿主范围广；重复性高； 简单方便，易于操作； 快速第四章 转基因植物的检测与鉴定v进行基因转化

3、后，要回答以下问题： 外源基因是否进入植物细胞？ 进入植物细胞的外源基因是否整合到植物染色体上？ 整合到植物染色体上的外源基因是否表达？转基因植物的证据v要有严格的对照：包括阳性和阴性对照v转基因当代要提供外源基因整合与表达的分子生物学证据、物理证据、表型证据v提供外源基因控制的表型性状证据（如抗病、抗虫等）v根据该植物的繁殖方式提供遗传证据基因转化后要进行的工作v筛选转化细胞v对转基因候选植株进行分子生物学鉴定 PCR、Southern杂交、Northern杂交、Western杂交v进行性状鉴定和外源基因的表达调控研究转基因植株的PCR检测v外源基因是否整合可先用PCR进行检测。但因为PCR

4、有时会出现假阳性扩增，最后的确定仍然需要用Southern杂交进行验证。v外源基因的表达可先用RT-PCR进行检测。但最后的确定仍然需要用Northern杂交进行验证。报告基因的表达检测v报告基因：指其编码产物可被快速测定的基因。可用来追踪特定DNA结构是否已导入寄主细胞或是器官、组织。v报告基因要具备的两大特点：其表达产物或产物的类似功能在未转化的细胞内并不存在；便于检测。v报告基因的检测：生化方法或免疫方法目前常用的报告基因v-葡萄糖苷酸酶基因（gus基因）v抗卡那霉素基因（npt-基因）v绿色荧光蛋白基因（gfp)等目的基因的的整合及表达检测v证明目的基因在植物染色体上整合最可靠的方法是

5、分子杂交。v转基因植物分子杂交鉴定包括两部分： 核酸分子杂交： Southern杂交、Northern杂交 蛋白质分子杂交：Western杂交核酸分子杂交的原理v非同一来源但具有互补序列的两条核苷酸链，其中一条链被人为标记，该标记可通过某种方法捡出，即成为所谓的探针。探针与互补的核苷酸链杂交后，杂交体也被带上同样的标记，可被检测出来。v这种方法灵敏度高（可捡出1pg的DNA样品），特异性强（可鉴别出20个碱基对的同源序列）。外源基因整合的Southern杂交鉴定基本步骤v植物总DNA提取v杂交探针的制备v杂交v分析结果Southern杂交的种类vSouthern斑点杂交 可较快大略检测一下植物

6、基因组是否含有外源基因。这种方法的主要问题是假阳性率较高。vSouthern印迹杂交 可清晰而准确的显示特异杂交体的数量及位置。 Southern印迹杂交的实验程序v植物DNA的限制性酶切v凝胶电泳分离各酶切片断v各酶切片断于凝胶中变性v将变性的各DNA酶切片断转移到固相膜上v预杂交，掩盖非特异位点v探针与膜上同源DNA片断杂交v漂洗去除未结合的非特异结合的探针v杂交体选出外源基因转录的Northern杂交鉴定v可检测转基因植物中外源基因的转录水平，是研究外源基因表达调控的重要手段。Northern杂交的基本程序v植物细胞总RNA的提取v探针的制备v印迹及杂交Northern杂交的种类 Nor

7、thern斑点杂交 是检测植物基转录本稳定表达量的有效方法，可用于外源基因表达及表达调控的研究。 Northern印迹杂交 Northern斑点杂交的步骤：材料的预处理；材料总RNA提取；将实验样品稀释，点在固相膜上，设立阴阳性对照；膜与不含探针的杂交液温育，以封闭非特异性位点；加入经变性处理的探针，进行杂交；根据标记物质进行捡出；分析杂交结果，通过与阳性对照比较来估计外源基因表达量。外源基因表达蛋白的检测v外源基因编码的蛋白在转基因植物中能正常表达并表现出应有的功能是植物基因转化的最终目的。v表达的蛋白应具有一定的稳定性，不被细胞内的蛋白酶降解，同时应对植物细胞无毒性。外源基因表达蛋白检测的

8、主要方法v利用免疫学原理，ELISA和Western杂交是经典方法。ELISA检测vELISA是酶联免疫吸附法（enzyme-linked immuno sorbent assay）的简称。v是一种利用免疫学原理检测抗原、抗体的技术。v这种方法建立了固-液抗原-抗体反应体系，并采用酶来标记。v抗体抗原的结合通过酶反应来检测。v由于酶反应的放大作用，使测定的灵敏度极高，可捡出1 pg的目的物。v同时酶反应具有很强的特异性，因此，ELISA是基因表达研究中不可缺少的方法。v抗体的制备v抗原或抗体的包被v免疫反应及检出ELISA检测的基本程序ELISA检测应注意的问题v用于定量分析时，微孔板上同时设

9、有标准样品及待测样品。检测结果的准确性与样品的重复数及样品在板上的配制有关。vELISA的灵敏度与实验操作程序有关。v容易出现本底过高的问题v缺乏标准化Western杂交vWestern杂交是将蛋白质电泳、印迹、免疫测定融为一体的蛋白质检测方法。v灵敏度很高（15ng）v据检测结果，可知植物细胞内目的蛋白表达与否，浓度大小及大致的分子量。Western杂交程序v转基因植株蛋白质的提取vSDS-PAGE电泳分离蛋白质v蛋白质条带印迹v探针制备v杂交第五章 转基因植物的遗传特性及表达调控v转基因植物中外源基因的整合特性v转基因植物中外源基因整合的遗传效应v转基因植物中外源基因的遗传特性v转化外源基

10、因的瞬时表达和稳定表达v转化外源基因的表达调控转基因植物中外源基因的整合特性v外源DNA的整合位点 转基因导入植物细胞以后，通过细胞分裂时遗传物质的复制整合到核基因组中，整合后的转基因遵循该细胞遗传物质的复制和表达规律。 转基因在受体染色体上的整合位点和拷贝数与转基因本身的存在、遗传表达以及传递稳定性都有必然的联系。 v转基因导入植物细胞后，通过细胞分裂时遗传物质的复制过程整合到核基因组中。v现在普遍认为，转基因在寄主染色体内的整合位点是随机的，外源DNA可插入植物基因组的任何一条染色体，可插入染色体上的任何位点或者说没有固定的插入位点，但对转录活跃区域具有优先插入特性。v关于共转化多个基因的

11、研究表明，多个外源基因在植物基因组中的整合特点同单基因相似。v整合拷贝数 外源DNA的插入拷贝数有以下几种： 单拷贝单位点插入； 串联多拷贝单位点插入； 多拷贝多位点插入。 多数情况下外源基因以单拷贝在单位点整合；但在同一位点，也存在较多的多拷贝串联整合现象，形式主要有头对尾式串联和头对头式串联。v目前，两类转化方法农杆菌介导的遗传转化和DNA直接转化方法影响着转基因整合时的拷贝数和整合位点。v前者的拷贝数较少，为13个拷贝，整合位点特异性较强；直接导入法拷贝数相差较大，且表现出较大的随机性。有研究者发现启动子对转基因的拷贝数大有影响。v外源DNA结构对整合的影响v外源DNA结构一般分为四种类

12、型：单链线形DNA,单链环形DNA，双链线形DNA及双链环形DNA。其中，单链线形DNA被研究的较多。v一般认为单链DNA可以有效的通过不正常的整合参与同源染体序列的重组。v有实验表明，外源DNA的结构同整合拷贝数无直接相关。v转化后整合位点的DNA结构变化v保持整合外源基因的完整性是实现转基因功能表达的基本条件，外源基因整合后的完整性与其结构变化有关。v对于植物基因组来讲，外源DNA作为侵入者的整合，会引起不同程度的基因重排，涉及到缺失、易位、倒位及重复等一系列现象，这主要与细胞本身的重复和修复功能有关。v关于整合外源基因的大小，目前研究认为，插入植物染色体的外源DNA的大小是有限制的。v近

13、年来新发现了T-DNA边界外的转移。v以前认为只有T-DNA边界之间的DNA序列转移进入植物的基因组。Martineau等（1994）检测了不同作物的几百株转基因植株整合的外源DNA时发现T-DNA左右边界以外的DNA序列同样能够整合进植物基因组中，而且这种转移在转基因植株中的比例很高，约占2030。v转化方法对整合外源基因结构的影响v通常情况下,外源DNA以两种分子结构形式进行转化：一种是外源DNA插入T-DNA质粒载体中导入，另一种是裸露的DNA分子直接进入。v由于其转化原理明显不同，因此与整合后的外源DNA结构必然有着直接的联系。T-DNA转化的外源DNA的结构变化v应用于植物基因转化的

14、农杆菌介导转化方法主要是通过Ti质粒转化系统。v在农杆菌介导转化细胞中T-DNA结构完整，转化机制清楚，整合位点较为稳定，多数情况下在25bp处与植物DNA连接，整合后的外源基因结构变异较少。v农杆菌介导的外源DNA也会出现结构的变化，主要表现在T-DNA的串连和截短现象。裸露DNA直接转化的外源DNA结构变化v用裸露的DNA直接转化时，整合的外源DNA往往出现复杂的杂交图谱，在转化当代及子代中常出现DNA环化甲基化片断分离和丢失等现象。vCzernilofsky等1986观察到导入的DNA片断发生重排。转基因植物中外源基因整合的遗传效应v位置效应 转基因在寄主染色体内的整合位点是随机的，显然

15、，不同插入位点的遗传背景不同，对其表达会有很大影响，产生的遗传效应也必然不同。 在同一实验中，得到的不同转化植株，外源基因的表达水平有很大差异，这主要是由于外源基因在染色体上的插入位点不同造成，该现象成为位置效应。v位置效应可引起转基因的失活，其原因可能是插入位点周围的DNA序列组成起重要作用。v位置效应的明显表现是外源基因的整合位置对其表达频率的影响，可以说位置效应是转基因表达不一致的主要原因之一。v重组效应 转基因易被植物基因组存在的重组和修复系统所识别，致使转基因不同程度的重排，这必然引起DNA的缺失、易位及重复等一系列的结构变化。转基因沉默v分子杂交证明转基因已整合到寄主植物基因组中，

16、并且仍保留着完整的拷贝，但是转基因不能稳定表达或表达水平低下，有时甚至完全不表达，这种外源基因在转基因植物中表达受到抑制的现象称为转基因沉默（transgene silencing）。v近年来，转基因沉默已成为研究的焦点。 转基因沉默主要发生在两个阶段： 转录水平的基因沉默（transcriptional gene silencing，TGS） 转录后水平的基因沉默 （post-transcriptional gene silencing，PTGS）v转录水平的基因沉默（TGS）是指对转基因专一的细胞核RNA合成的失活。它的发生主要是由于转基因无法被顺利转录成相应的RNA而导致沉默。 TGS的

17、特点： 转录活性的阻塞；启动子序列发生严重的甲基化；沉默和甲基化可以遗传。 TGS发生后，信使RNA的合成锐减或根本不合成。引起TGS的主要机制：v转基因及其启动子甲基化v多拷贝重复转基因序列引起的TGSv同源基因间的反式失活v转基因位置效应引起的TGSv染色体包装对转基因沉默的影响v转录后水平的基因沉默（PTGS）是指转基因在细胞核里能稳定转录，但在细胞质里却无相应的稳定的mRNA存在的现象。vPTGS的特点： 核内的转录速率正常，但mRNA不在细胞溶胶中积累；在转录区有偶然的甲基化；沉默的减数分裂的不可遗传性。克服转基因沉默的策略v转基因的选择v启动子的选择v利用具有组织和发育特异性作用的

18、增强子v利用MAR序列（基质附着区，指染色质被限制酶消化后仍与核骨架结合的DNA序列，位于染色质的端粒附近）v利用位置特异性重组系统v选择单拷贝转化体转基因植物中外源基因的遗传特性v外源基因在转化植物中的遗传传递规律 孟德尔式分离：在大多数的转化植株中，转基因呈单基因显性的孟德尔式分离。 多个转基因在转化植物后代的分离规律与其整合特性密切相关。如多基因以连锁形式整合到一个位点上，那么就符合单基因的孟德尔式分离；如整合到不同位点上，那么每个基因的分离符合孟德尔式分离，各个基因间不影响。 非孟德尔式分离： 转基因丢失 转基因沉默 转基因逃 花粉致死（雄配子致死） 诱发隐性致死突变或转基因纯合致死转

19、基因的遗传稳定性 转基因在转化细胞培养中的稳定性 转化的外源基因与体细胞内的其他基因一样在细胞培养和再生过程中是基本稳定的，能够从转化的细胞获得转基因植株。 转基因在遗传传递中的稳定性 常规杂交育种的大量实验已确证整合到受体细胞染色体的基因能够稳定遗传。 转基因植株的倍性变化 在组织培养中体细胞无性系变异的一个常见现象是再生植株的染色体倍性变化，即多倍体变异。 目前的研究认为，多拷贝、复合整合方式的转化DNA不易稳定，单拷贝或低拷贝的插入具有较高的稳定性。 沉默转基因的遗传稳定性 沉默的转基因可以通过无性繁殖或器官再生，以及嫁接传递下来，但是无法预测其通过减数分裂在世代间的传递，而多位点的插入

20、使情况变得更复杂。植物基因工程的研究进展 1983年，第一株转基因植物问世。 迄今为止，全世界已分离了几百个目的基因，获得转基因植物近200种，其中农杆菌转化成功的植物已达116种。第六章 植物基因工程的研究进展及存在问题全球转基因植物种植面积全球转基因植物种植面积 1996年年 170 万公顷万公顷 1999 3990 万公顷万公顷 2000 4420万公顷万公顷 2001 5260万公顷万公顷 2002 5870万公顷万公顷 2003 6770万公顷万公顷2003年与年与1996年比较：增长了年比较：增长了40倍倍 不同国家种植不同国家种植GMC 面积面积（百万公顷）（百万公顷）2000

21、2001 2002 2003 美国美国 33.3 35.7 39.0（66） 42.8（63%）阿根廷阿根廷 10.0 11.8 13.5（23%） 13.9（21）加拿大加拿大 3.0 3.2 3.5 （6%） 4.4（6）中国中国 0.5 1.5 2.1（4%） 2.8（4）巴西巴西 3.0（4）南非南非 0.2 0.2 0.3 0.4（1）澳大利亚澳大利亚 0.2 0.2其它其它（16） 0.1 0.1 99%52.6 58.7 67.7转基因农产品和食品转基因农产品和食品2001 年，全球获准上市年，全球获准上市GMC产品达产品达120个个2002年，年， 140个个作物种类：作物种类

22、： 大豆大豆 3650万公顷，万公顷，51 （占全球该作物面积）（占全球该作物面积） 玉米玉米 1140万公顷，万公顷， 21 棉花棉花 980万公顷，万公顷， 20% 油菜油菜 30万公顷万公顷 5转基因食品和食品成分达转基因食品和食品成分达4000多种多种v迄今美国1/4的耕地种植转基因植物，其中抗除草剂基因的大豆占大豆种植面积的55%；抗虫棉占棉田总面积的60%以上；转基因玉米占总种植面积的30%以上。v我国仅1999年就有73项转基因申请，批准环境释放18项中间试验24项，商品生产6项。v转基因棉已种植100多万亩，使我国成为世界上转基因植物推广面积最大的国家之一。近年来植物基因工程研

23、究的有关进展v高等植物质体基因转化v农杆菌介导大片断DNA转化v目的基因定位重组转化 高等植物质体基因转化v高等植物的细胞中，细胞核质体（叶绿体）和线粒体都含有DNA，他们构成了既相对独立又相互联系的三个遗传系统。v自从基因工程技术诞生以来，核基因转化一直是植物基因工程的主要研究方向。v随着研究的深入进展，人们逐渐认识到质体基因转化的独特优越性，开始成为植物基因工程新的研究热点。质体基因转化系统的优点v高效表达：质体基因组的拷贝数很大v原核基因无需修饰改造：质体大多数基因的结构转录与翻译系统均与原核生物类似v安全性好：只进行母系遗传v便于遗传操作：多种植物的质体基因组序列已被测定v可以实现定点

24、整合v容易保持纯系后代不分离质体基因转化存在的问题v转化植物的同质化困难v外源基因转化频率低质体基因转化的应用前景v提高作物的光合效率，实现高产、稳产v叶绿体生物反应器的应用v提高农作物抗逆性v提高蔬菜营养价值农杆菌介导大片断DNA转化v以前的转基因植物，其中绝大多数是通过单个目的基因的遗传转化获得的。v自然界中的很多性状是由多个基因控制的，一般的生化代谢过程需多种酶的催化作用才能完成。v长期以来，培育高产、优质、抗病虫害、抗逆境等具有多个优良性状的作物品种是每一个植物遗传改良科学家的共同愿望。v研究者对发展多基因转化系统，将多个目的基因转入到植物基因组中进行了探索，并成功的实现了多个目的基因

25、在植物中的表达。多基因转化系统的建立v构建多基因表达载体v构建多个表达载体v人工染色体转化载体构建目的基因定位重组转化v目前已经发展了四种定位重组系统： Cre/loxP、FLP/FRT、R/Rs、Gin/gir 通过同源重组向植物基因组特定位点引入目的基因的研究刚起步，效率较低。目前，植物基因工程存在的问题v技术问题v提高基因转化率重要的禾本科粮食作物的转化率较低，成为植物基因工程 发展的主要限制因子。v建立高频再生的基因转化受体系统v植物组织培养的水平要随着基因工程的需要进一步提高。 提高对转化外源基因表达的调控能力目前转基因植株的表达调控存在着表达水平低，可操作性差等问题，基本处于一种失

26、控随机状态。v潜在的应用问题 植物基因工程与常规育种的关系 植物基因工程与农业资源遗传多样性保护 植物基因工程与病原体抗药性 植物基因工程与环境生态平衡 转基因食品的安全性提高转化外源基因的遗传稳定性 外源基因在植物核基因组中的整合远比常规育种复杂。环境及生态安全性环境及生态安全性食品及饲料安全性食品及饲料安全性转基因食品的安全性评价1 生存竞争性生存竞争性2 演变杂草的可能性演变杂草的可能性2 生殖隔离距离生殖隔离距离3 与近缘野生种的可交配性与近缘野生种的可交配性4 对非靶生物的影响对非靶生物的影响 生长势生长势差别不大，一般差别不大，一般 转基因植株稍差转基因植株稍差 种子活力及越冬能力

27、种子活力及越冬能力 转基因棉花、油菜、烟草、转基因棉花、油菜、烟草、水稻、番茄、马铃薯等均未提高水稻、番茄、马铃薯等均未提高 抗病及抗逆能力抗病及抗逆能力 除抗虫、抗病、抗除草剂及抗除抗虫、抗病、抗除草剂及抗逆的转基因植物外，无提高逆的转基因植物外，无提高演变成杂草的可能性：演变成杂草的可能性：1、现有的转基因作物本身失去了杂草的一系列遗传特性，、现有的转基因作物本身失去了杂草的一系列遗传特性， 离开了人类栽培就无法生存，不可能变为杂草。离开了人类栽培就无法生存，不可能变为杂草。2、转基因作物发生基因漂流，使得一种杂草能抗两种或多、转基因作物发生基因漂流，使得一种杂草能抗两种或多种除草剂，人们

28、还可研制出新的除草剂将其杀死。种除草剂，人们还可研制出新的除草剂将其杀死。视物种和地理环境而定，在自然条视物种和地理环境而定，在自然条件下件下一般很小（但有可能）一般很小（但有可能）。主要看近缘野生种主要看近缘野生种 + 转化的基因转化的基因 无（安全）无（安全） 如抗除草剂（危险）如抗除草剂（危险）基因漂流基因漂流土壤微生物区系：土壤微生物区系： 一般无一般无益虫和有害昆虫：益虫和有害昆虫： 可能（如可能（如Bt基因）基因）残渣对后季作物：残渣对后季作物： 无无两个基本观点：两个基本观点：1、安全性是一个相对和动态的概念，不同时期其认识、安全性是一个相对和动态的概念，不同时期其认识可能会发生

29、变化。可能会发生变化。2、任何时候的食品供应都不可能、任何时候的食品供应都不可能100安全。如麦角中安全。如麦角中毒、黄曲霉素等污染食物时有发生，因而毒、黄曲霉素等污染食物时有发生，因而100安全是安全是不可能做到的。不可能做到的。经合组织经合组织1993年提出了实质等同性原则：年提出了实质等同性原则：转基因生产的产品与传统产品具有实质等同性，则认转基因生产的产品与传统产品具有实质等同性，则认为安全，如来源于植物病毒的基因。为安全，如来源于植物病毒的基因。若不存在实质等同性，则严格评价。若不存在实质等同性，则严格评价。有无抗营养因子有无抗营养因子有无毒性物质有无毒性物质有无过敏性蛋白有无过敏性

30、蛋白标记基因的安全性标记基因的安全性 科学家在转基因植物育种时，一般科学家在转基因植物育种时，一般会避免使用对人类有毒或过敏的蛋白基会避免使用对人类有毒或过敏的蛋白基因。如果是一种新蛋白，则：因。如果是一种新蛋白，则：1、分析基因来源、分析基因来源2、可查过敏性蛋白序列库、可查过敏性蛋白序列库无抗营养因子无抗营养因子无毒性物质无毒性物质无过敏蛋白无过敏蛋白1 对动植物未发现危害性对动植物未发现危害性2 转入肠道微生物的可能性：转入肠道微生物的可能性： 小小 Dr.Arpad Pusztai in Rowett institute in Scotland 1998（电视节目，未经发表）（电视节目

31、，未经发表） 雪花莲凝集素基因雪花莲凝集素基因 马铃薯马铃薯 老鼠老鼠 体重和重量减轻体重和重量减轻 对内脏和免疫有损对内脏和免疫有损 引起国际轰动引起国际轰动1、Pusztai 事件：事件：英国皇家学会组织同行评审英国皇家学会组织同行评审1999年年5月得出结果，月得出结果， 认为试验有认为试验有6条缺陷：条缺陷：1、不能确定转基因和非转基因马铃薯的化学成分差异；、不能确定转基因和非转基因马铃薯的化学成分差异；2、喂养转基因土豆的老鼠未补充蛋白质以防止饥饿；、喂养转基因土豆的老鼠未补充蛋白质以防止饥饿；3、共试动物数量少，喂几种不同的食物，且都不是老鼠的、共试动物数量少，喂几种不同的食物，且

32、都不是老鼠的 标准食物，很少统计意义；标准食物，很少统计意义；4、试验设计差，未作双盲测定；、试验设计差，未作双盲测定；5、统计方法不当；、统计方法不当；6、试验结果无一致性、试验结果无一致性结论：否定结果结论：否定结果处理：辞退工作处理：辞退工作Bt 转基因玉米转基因玉米 斑蝶取食花粉斑蝶取食花粉 死亡死亡1999年年5月，月，Conell大学一个研究组报道，在实大学一个研究组报道，在实验室内结果表明：验室内结果表明：后来许多科学家研究证实：后来许多科学家研究证实：1、该研究缺乏花粉量数据。、该研究缺乏花粉量数据。2、2000年在美国年在美国3个州和加拿大田间试验证明，个州和加拿大田间试验证

33、明，Bt玉米玉米花粉对斑蝶成虫和幼虫的死亡和生长发育没有影响。花粉对斑蝶成虫和幼虫的死亡和生长发育没有影响。3、实验室生物测定表明，、实验室生物测定表明，10倍于田间的花粉量，对斑蝶倍于田间的花粉量，对斑蝶成长和发育也无影响。成长和发育也无影响。墨西哥玉米事件墨西哥玉米事件 加州大学加州大学Berkeley分校的分校的David Chapela和和David Quist 2001年年11月在月在Nature上发表文章，声称：上发表文章，声称： 在墨西哥南部在墨西哥南部Oaxaca地区采集了地区采集了6个玉米地方品种，在样个玉米地方品种，在样本中发现有本中发现有CaMV35S启动子及启动子及No

34、vartis BtII抗虫玉米中地抗虫玉米中地adhl基因相似序列。基因相似序列。对该文的核实：对该文的核实：1、Transgene Research的编委的编委Paul Christou批评该文批评该文在方法学上有许多错误，测出的在方法学上有许多错误，测出的35S启动子被证启动子被证 明是假明是假阳性；阳性；2、BtII的首席科学家的首席科学家Dr.Mettler Irvin指出，指出，BtII中插中插入的是玉米入的是玉米adhl-IS基因，而非作者报道的基因，而非作者报道的adhl-F基因；基因；3、Nature编辑部在编辑部在2002年初正式声明，该文证据不充年初正式声明，该文证据不充分，原不应该发表。分，原不应该发表。我国首次进行转基因植物大田试验我国首次进行转基因植物大田试验烟草：烟草： 在河南生产，出口美国，被拒，全部在河南生产，出口美国，被拒，全部 销毁，销毁， 损失损失7亿多元亿多元中国中国Bt抗虫棉破坏环境事件抗虫棉破坏环境事件 2002年年6月月3日，日，China Daily发表南京环保所作者发表南京环保所作者的文章，提出在的文章，提出在Bt抗虫棉田中：抗虫棉田中