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文档简介

1、石蜡切片免疫组化步骤1.石蜡切片放置在60恒温箱中烘烤120分钟。2. 脱蜡和水化：二甲苯(20min)二甲苯(20min)无水乙醇(5min2次)95%乙醇(5min2)90%(5min)80%乙醇(5min)3.3%H2O2室温孵育510分钟，以消除内源性过氧化物酶的活性。4. 蒸馏水冲洗5min35. 抗原修复：将切片放入盛有PBS缓冲液（工作液）的容器中，置微波炉内加热使容器内液体温度保持在9298之间并持续1015分钟。6. 取出容器，室温冷却1020分钟（注意：不可将切片从缓冲液中取出冷却，以便使蛋白能够恢复原有的空间构型）。7. 常规血清封闭：正常山羊血清（PBS稀释）封闭，室温

2、孵育15分钟（按试剂和规定的浓度配制）8. 滴加一抗：用滤纸吸去血清，不洗，直接滴加一抗工作液，37孵育23h，或4过夜（抗体稀释液组成：牛血清白蛋白1.00g0.01M PBS 100ml叠氮钠0.08g）9. PBS冲洗5min3洗去抗体10. 加入PBS稀释的二抗，室温孵育2h11. PBS洗5min312. 加入ABC复合物之类的抗体，室温孵育2h13. PBS洗3次各5min， 蒸馏水迅速冲洗三次14. DAB显色：520min，待自来水充分冲洗15. 苏木素复染：室温23min，自来水充分冲洗16. 盐酸酒精分化2s，自来水充分冲洗17. 脱水、透明：80%乙醇(5min)95%乙醇(5min)95%乙醇(5min)100%乙醇(5min)二甲苯(10min)二甲苯(10min)18. 封片：中性树脂，加盖玻片(组织部位切勿残留小气泡)，自然晾干:abrOPl=VklGALxDM0syV23WHHGn_?WnJqtsU5NlG1BP_CMoC8vEX:VBbWs_wAcbG0OuqFNMPW5KKrdmbBEsfNt=fqYZsldTCG4Vm6r1s=uCMIZvlUp:4pQbkL9jEGl_V6QUr;?Yq1ETo2kmrUWAq6jULzYZd

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