分子生物学常用缓冲液试剂和贮存液的配制

1、分子生物学常用缓冲液、试剂和贮存液的配制1、 6*Loading Buffer（DNA电泳用，50ml配方） 组分浓度：100mM EDTA, 40%(V/V) 蔗糖, 0.05%（W/V）xylene cyanol FF, 0.05%（W/V）溴酚蓝 配制方法：称取25mg溴酚蓝，25mg xylene cyanol FF，5ml 0.5MEDTA，加入约20ml去离子水，加热搅拌，充分溶解，加入20g蔗糖，去离子水定容至50ml。2、10*PBS（pH7.27.4，分子克隆推荐配方）组分浓度： NaCl 137 mmol/L，KCl 27 mmol/L，Na2HPO4 100 mmol/L

2、， KH2PO4 20 mmol/L配置方法：用800ml去离子水溶解80 g NaCl, 2 g KCl，14.4 g Na2HPO4和2.4 g KH2PO4。用盐酸调节pH至7.4，加水定容至1 L，高温高压灭菌，室温保存。3、20*SSC （pH约7.0）组分浓度：300 mmol/L 柠檬酸三钠，3 mol/L 氯化钠 配制方法：称取柠檬酸三钠·2H2O 88.23 g，氯化钠175.3 g，加入800 ml去离子水充分溶解，用14 N HCl调pH为7.0，去离子水定容至1 L，高温高压灭菌后室温保存。4、10*Tris-甘氨酸 转膜液（pH约8.3） 1 L 组分浓度：

3、0.25 M Tris，1.92 M 甘氨酸配制方法：甘氨酸144.13 g，Tris 30.29 g，去离子水溶解定容至1 L。 使用前，100 ml 10*转膜液，加入200 ml甲醇，700 ml去离子水成为1*转膜液5、10*Tris-甘氨酸-SDS 电泳缓冲液（SDS-PAGE电泳缓冲液，pH约8.6） 组分浓度：0.25 M Tris，1.92 M 甘氨酸，1%（W/V）SDS 配制方法：称取30.29 g Tris，,144.13 g甘氨酸，5 g SDS，加入800 ml去离子水搅拌溶解，定容至1 L，常温保存。6、10*TBS组分浓度：200 mM Tris（pH约为7.4）

4、,9% NaCl，HCl调pH至7.4配制方法：800 ml去离子水溶解24.23 g Tris，90 g氯化钠，盐酸调pH至7.4，定容至1 L，高温高压灭菌，常温保存。7、100*Tris EDTA Buffer (100*TE，pH 7.4，7.6, 8.0) 组分浓度： 1 M Tris-cl，100 mM EDTA（pH8.0）配制方法： 称取121.1 g Tris，用500 ml去离子水充分溶解，加入200 ml 0.5 M EDTA（pH 8.0），盐酸调节至所需pH，加水定容至1 L，高温高压灭菌，室温保存。8、10*TAE组分浓度：0.4 M Tris 乙酸盐，pH 约为

5、8.3，含有 0.01 M EDTA。用 18 兆欧水制备的溶液 .采用经生物技术性能认证的 Trizma 碱 (T6066) 和分子生物学试剂 EDTA (E5134) 制备。溶液还含有乙酸 (A6283)；粉末状混合物含有 Trizma 醋酸盐 (T1258)。配制方法：（43）20*SSPE组分浓度：3 M氯化钠，0.2 M NaH2PO4，0.02 M EDTA配制方法：在800 ml水中溶解175.3 g NaCl、27.6 g NaH2PO4H2O和7.4 g EDTA，用NaOH调节pH值至7.4,（约需6.5 ml 10 ml/L NaOH），加去离子水定容至1 L，分装后高压

6、灭菌，室温保存。（19） 常用核酸电泳缓冲液缓冲液组分浓度1L配制方法备注50*TAE (pH 8.5)2 M Tris-醋酸 0.1 M EDTA称取242 g Tris, 37.2 g Na2EDTA·2H2O，加入约800 ml去离子水充分搅拌溶解，加入57.1 ml的醋酸，充分搅拌，定容至1 L，室温保存。10*TBE (pH8.3)890 mM Tris-硼酸20 mM EDTA称取108 g Tris, 7.44 g Na2EDTA·2H2O，硼酸55 g，加入约800 ml去离子水充分搅拌溶解，定容至1 L，室温保存。TBE 溶液长时间存放后会形成沉淀物，出现

7、沉淀后则予以废弃。一般都以 1×TBE 作为使用液进行琼脂糖凝胶电泳。但 0.5×的使用液已具备足够的缓冲容量。进行聚丙烯酰胺凝胶垂直槽的缓冲液槽较小，故通过缓冲液的电流量通常较大，需要使用 1×TBE 以提供足够的缓冲容量。10*MOPS200 mM MOPS20 mM醋酸钠10 mM EDTA称取41.8 g MOPS，加入约700 ml DEPC处理水充分搅拌溶解，用2 N NaOH调节pH至7.0，再加入20 ml DEPC处理的1M醋酸钠，20 ml DEPC处理的0.5 M EDTA， DEPC水定容至1 L。用0.45 m滤膜过滤除去杂质，室温避光保

8、存。溶液见光或高温灭菌后会变黄，变黄时可使用，但变黑时坚决不能使用。（22） 10*Loading Buffer（RNA电泳用，10ml配方） 组分浓度：10 mM EDTA, 50% (V/V) Glycerol, 0.25% (W/V)xylene cyanol FF, 0.25% (W/V)溴酚蓝 配制方法：称取25 mg溴酚蓝，25 mg xylene cyanol FF，加入200 l 0.5 M EDTA (pH 8.0)，加入约4 ml DEPC处理水，充分搅拌溶解，加入5 ml甘油，DEPC去离子水定容至10 ml，室温保存。（50） 凝胶加样缓冲液缓冲液类型6×缓冲

9、液贮存温度0.25%溴酚蓝40.25%二甲苯青 FF40%（W/V）蔗糖水溶液0.25 溴酚蓝室温0.25%二甲苯青 FF15%聚蔗糖(Ficoll400)0.25%溴酚蓝40.25%二甲苯青 FF30%甘油水溶液0.25%溴酚蓝440%(W/V)蔗糖水溶液碱性加样缓冲液:300mmol/L NaOH6mmol/L EDTA18%聚蔗糖(Ficoll400)40.15%溴甲酚绿0.25%二甲苯青 FF使用凝胶加样缓冲液的目的有三：增大样品密度；以确保 DNA 均匀进入样品孔内；使样品呈现颜色，从而使加样操作更为便利，含有在电块中能以可预知速率向阳极泳动的染料。溴酚蓝在琼脂糖中移动的速率约为二甲苯青 FF 的 2.2 倍，而与琼脂糖浓度无关。以 0.5×TBF 作电泳液时，溴酚蓝在琼脂糖中的泳动速率约与长 300bp 的双链线状 DNA 相同，而二甲苯青 FF 的泳动则与长 4kb 的双链线状 DNA 相同。在琼脂糖浓度为 0.5%1.4%的范围内，这些对应关系受凝胶浓度变化的影响并不显著。选用哪一种加样染料纯属个人喜恶。但是，对于碱性凝胶应当使用溴甲酚绿作为示踪染料，因为在碱性 pH条件下其显色较溴酚更蓝为鲜明。（52）LB培养基组分浓度：1% (W/V) Trypto