针刺百会、大椎对老年性痴呆大鼠认知行为及脑内乙酰胆碱酯酶的影响

1、    针刺百会、大椎对老年性痴呆大鼠认知行为及脑内乙酰胆碱酯酶的影响作者：赵立刚 马莉 程为平 吴茜 郑祖艳 梅晨健 作者单位：黑龙江中医药大学附属第一医院神经内科，黑龙江 哈尔滨 150040【摘要】 目的 探讨针刺百会、大椎对AD大鼠认知行为及脑内乙酰胆碱酯酶(AChE)含量的影响。方法 选用纯系健康雄性Wistar大鼠52只，随机分为假手术组、模型组、针刺组和西药组。采用-淀粉样蛋白向海马CA1区定向注射制作AD模型。针刺组选用“百会”、“大椎”穴进行治疗。治疗前后检测各组大鼠的穿梭箱实验成绩和脑组织内AChE的含量。结果 针刺模型大鼠的“百会”

2、、“大椎”穴可以明显减少AD大鼠在穿梭箱实验中的电击次数和电击时间(P<0.05)，非常显著降低脑组织内AChE含量(P<0.01)。结论 采用针刺的方法可明显改善AD大鼠的学习记忆能力，并能减少脑内AChE的含量。【关键词】 针刺疗法;痴呆/老年性;认知行为;乙酰胆碱酯酶老年性痴呆，即阿尔茨海默病(AD)是一种以老年斑、神经元纤维缠结为主要病理改变的进行性神经变性疾病1，其病因及发病机制尚不清楚。迄今尚缺乏疗效肯定的药物治疗方法，目前试用的药物中尚不能改变疾病的进展。同时为了减少各种治疗药物的毒副作用，临床中我们采用针刺的方法治疗本病，取得了较好的疗效。为了进一步探讨针刺治疗AD

3、的机制，本课题采用颅内注射法制作AD模型进行动物实验研究，针刺百会、大椎穴，治疗前后进行多项指标检测，以验证针刺方法的有效性和可行性。1 材料与方法1.1 材料和设备 选用纯系健康Wistar雄性大鼠52只，1820月龄，体重(500±20) g，由黑龙江中医药大学实验动物中心提供，室内常温下配料喂养，自由饮食水。乙酰胆碱酯酶(AChE)测定试剂盒由南京建成生物工程研究所提供。大鼠程控穿梭箱(中国医学科学院药物研究所DCS-2型);脑立体定位仪(NARISHIGE SN-2型);电动离心机(北京医用离心机厂 LD5-2型);电热恒温水浴箱(江苏省金坛市医疗仪器厂RF-540型);电热

4、恒温培养箱(中国厦门医疗电子仪器HWB-2型);电动玻璃匀浆机(宁波新芝科学仪器研究所DY89-1型);分析振荡器(江苏泰县医疗器械厂FZQ-2型);托盘式扭力天平(上海第二天平仪器厂TN-100B型);722光栅分光光度计(上海第二分析仪器厂)。1.2 方法2 结果2.1 穿梭箱实验结果 见表1。各组术前(治疗前)电击次数，电击时间比较无显著差异(P>0.05)，提示术前各组行为学测试结果大致相等。治疗前后模型组数据比较有非常显著差异(P<0.001)，提示造模成功。治疗后，两治疗组与假手术组比较有显著差异(P<0.05)。治疗后，针刺组与西药组比较无显著性差异(P>

5、0.05)。两治疗组与模型组比较有非常显著差异(P<0.01)，说明针刺和西药对AD大鼠均有改善作用。表1 各组大鼠行为学结果比较(略)与治疗前比较：1)P<0.001;与治疗后假手术组比较：2)P<0.01;与模型组比较：3)P<0.012.2 生化指标检测 治疗后假手术组的AChE含量为(0.157 8±0.004 3) mol/ml，模型组的含量为(0.465 3±0.057 1) mol/ml，针刺组为(0.235 6±0.041 5) mol/ml，西药组为(0.298 4±0.040 5) mol/ml。模型组与其他各

6、组比较，AChE含量升高(P<0.001)，提示造模成功。针刺组和西药组与模型组比较，AChE含量降低(P<0.01)。提示两种治疗方法均有效，但两组之间比较无显著性差异(P>0.05)。3 讨论A在脑内的纤维状沉积是AD患者大脑中主要的病理变化4。近年来许多学者致力于寻找和研究AD动物模型，取得了很大的进展5。Giovannelli等给大鼠基底核注射A-(140)和A-(2535)淀粉样多肽，结果在注射部位有刚果红染色阳性的物质积聚，基底核胆碱能神经元减少，胆碱酰化转移酶ChAT免疫活性下降与乙酰胆碱(ACh)释放减少相平行，大鼠的认知功能也发生障碍6。林煜等7选择海马CA

7、1区进行A微量注射，病理学观察显示注射区中心为刚果红染色阳性的A核，其外是受损的神经元伴大量小胶质细胞浸润，最外层为反应性星形胶质细胞包绕。这与典型SP的构成基本一致。Y型迷宫检测显示模型大鼠的学习、记忆能力明显减退。本实验正是采用此种方法，较好地模拟了AD的行为学和病理学等方面的特征及对生化酶学产生的影响。经临床验证，针灸疗法对AD的智能及社会活动功能康复有积极作用，其疗效肯定。针灸单穴及复方治疗本病在古代文献已有记载。难经·二十八难云：“督脉者上致风府，入属于脑。”百会和大椎均属督脉穴位，百会为“三阳五会”，大椎为“诸阳之会”，为手足诸阳之会。督脉与脑密切相关，督脉通于脑。中医学

8、认为脑为髓海，其气血上冲于盖(百会)，下在风府。AD的病机为气血两亏，肝肾不足或气滞血瘀、痰阻脉络而导致气血不能上养脑窍，进而髓海失聪所致。针刺百会、大椎可以激发经气，疏通经络，使脑髓的气血之荣养而复聪8。周莉等9观察到针刺百会、大椎可提高人的即时记忆能力及小鼠的学习成绩和记忆再现能力，故针刺百会可通督醒脑。胆碱酯酶是胆碱能神经递质乙酰胆碱的水解酶，直接参与自主神经功能调节、肌肉运动、大脑思维、记忆等重要功能。目前已公认，学习记忆与中枢胆碱能神经系统关系极为密切。资料表明，慢性酒精中毒大鼠记忆功能的降低与ACh缺乏有关10。在中枢胆碱能神经系统中，ACh起着非常重要的作用。中枢胆碱能通路是构成

9、学习记忆的重要通路，而ACh是其中重要的神经递质。它是由胆碱乙酰化酶合成，胆碱酯酶分解，通过ACh受体发挥生物学效应。学习记忆的生理过程极其复杂，而且需高级整合，而ACh作为进行及维持高级神经功能的一种重要介质，在记忆、思维和智能中起着不可替代的作用。另有一项研究证实，慢性应激大鼠空间学习记忆障碍的同时，海马ChAT活性降低，ACh含量下降11。近年来研究表明，AD病人脑组织中胆碱乙酰化酶活性明显降低，胆碱酯酶活性显著升高，造成ACh含量不足，导致中枢神经系统功能障碍，出现学习记忆及认知功能下降甚至智力丧失12。且已有实验证实，在AD发病过程中，大脑组织中的神经递质明显减少，尤其是大脑皮层的A

10、Ch及单胺类递质与血管性痴呆的智力下降密切相关13。因此通过检测治疗前后脑组织中AChE含量，即可推测出ACh的含量，从而判断AD大鼠的智能及记忆损害程度。在本实验结果表明，针刺AD大鼠的“百会”、“大椎”穴，可能有清除自由基，促进细胞代谢作用，从而降低AChE含量，改善大脑的学习记忆功能。【参考文献】1 王维治.神经病学M.北京：人民卫生出版社,2001：249-54.2 刘 建,刘春丽.老年期痴呆的辨证论治初探J.安徽中医学院学报,1996;15(6):2-4.3 林文注.实验针灸学M.上海：上海中医学院出版社,1989:87.4 姜招峰.-淀粉样蛋白、氧自由基和腺苷及其受体的相互作用J.

11、国外医学·老年医学分册,2002;23(2):57-9.5 罗焕敏.阿尔茨海默病动物模型研究与应用进展J.国外医学·老年医学分册,1998;19(6):241-5.6 吴 浩,袁伯俊.Alzheimer病动物模型研究进展J.国外医学·老年医学分册,1998;19(1):11-4.7 林 煜.大鼠海马注射-淀粉样蛋白建立记忆障碍模型的研究J.中华精神科杂志，2000;33(4):222-4.8 莫飞智，赖新生，陈振虎，等.电针与氢化麦角碱对血管性痴呆大鼠脑内乙酰胆碱酯酶的作用J.中国老年学杂志，2001;21(3)：119-21.9 周 莉.针刺百会穴对记忆影响的实验观察J.黑龙江中医药，1992;14(3)：41-7.10 Melis F,Stancampiano R,Imperato A，et al.Chronic ethanol consumption in rats:correlation between memory performance and hippocampal acetylcholine release in vivoJ.Neuroscience,1996;74:155.11 胡旺平，李雪梅，化长林，等.慢性应激对大