乳腺癌VEGFC mRNA的表达与淋巴结转移的关系

1、乳腺癌VEGFC mRNA的表达与淋巴结转移的关系         11-01-07 13:29:00     编辑：studa20              作者：王虎霞，盛薇，王光辉，樊林，单涛，赵伟，李萌【摘要】  目的 探讨乳腺癌血管内皮生长因子C(VEGFC)的表达与乳腺癌淋巴结转移等临床病理指标之间的关系。方法 用逆转录聚合酶

2、链反应(RTPCR)法检测60例乳腺浸润性导管癌VEGFC mRNA的表达情况，取15例乳腺纤维腺瘤标本作为对照。结果 乳腺癌组VEGFC mRNA的阳性表达率及表达程度明显高于对照组(P均<0.01);乳腺癌淋巴结转移组VEGFC mRNA的表达率及表达程度高于淋巴结非转移组(P均<0.05);VEGFC mRNA的表达与乳腺癌淋巴结转移呈正相关(r=0.638，P<0.01)。结论 乳腺癌中VEGFC mRNA的表达水平增高;VEGFC mRNA的表达促进乳腺癌淋巴结转移。 【关键词】  乳腺癌;血管内皮生长因子C mRNA;淋巴结转移ABSTRACT: Obj

3、ective To study the expression of vascular endothelial growth factor C (VEGFC) in breast cancer and its correlation with clinicopathological indexes of lymph node metastasis. Methods Reverse transcription polymerase chain reaction (RTPCR) method was adopted in detecting VEGFCmRNA expression in 60 ca

4、ses of breast infiltrative tubular cancer. We took 15 cases of breast fibroadenoma as controls. Results The positive rate and degree of VEGFCmRNA expression were higher in the breast cancer group than in the control group (P<0.01). VEGFCmRNA expression was significantly higher in the lymph node m

5、etastasispositive group than in lymph node metastasisnegative group (P<0.05). VEGFCmRNA expression was positively correlated with lymph node metastasis (r=0.638, P<0.01). Conclusion VEGFCmRNA expression was higher in breast cancer and it promoted lymph node metastasis in breast cancer.KEY WORD

6、S: breast cancer; vascular endothelial growth factor C mRNA; lymph node metastasis研究表明，血管内皮细胞生长因子C(vascular endothelial growth factor C, VEGFC)是较特异的促淋巴管内皮生长因子，在乳腺癌淋巴管的生成及淋巴结转移中发挥着不可忽视的作用1。目前关于VEGFC基因水平的研究，国内报道较少。本研究通过逆转录聚合酶链反应(reverse transcription polymerase chainreaction, RTPCR)法检测乳腺癌组织中VEGFC mRNA

7、的表达，以三磷酸甘油醛脱氢酶(GAPDH)为内对照对目的基因进行半定量分析，探讨VEGFC基因表达与乳腺癌淋巴结转移之间的关系。1 材料与方法1.1 标本来源 收集西安交通大学医学院第一附属医院2006年3月2007年5月间乳腺浸润性导管癌新鲜标本60例为研究对象，其中淋巴结转移29例，无转移31例。肿块长径2cm 23例，>2cm且5cm 30例，>5cm 7例。按WHO乳腺浸润性导管癌病理学分级标准：级19例，级18例，级23例。所有患者均为女性，平均年龄(45.21±8.23)岁，术前均未接受放、化疗等，均行乳腺癌改良根治术，清除淋巴结数目均大于15枚。取门诊乳腺纤

8、维腺瘤新鲜标本15例作为对照。1.2 主要试剂 焦炭酸二乙酯(DEPC)购自Sigma公司;Trizol试剂购自Invitrogen公司;RevertAidTMcDNA第1链合成试剂盒购自MBI公司;2×Taq PCR MasterMix(KT201，含染料)及DNA Markers购自天根生物技术有限公司。引物由北京奥科生物技术有限责任公司合成。VEGFC引物1：ACCAAACAAGGAGCTGGATG，引物2：AAGAGGCCTTTTGCAGATGA，产物长度600bp，退火温度58;GAPDH引物1：ATCATCCCTGCCTCTACTGG，引物2：CCCTCCGACGCCTG

9、CTTCAC，产物长度188bp，退火温度58。1.3 方法 每例标本术后留取新鲜组织，用处理过的剪刀把组织剪成小块，立即放入1mL/L的DEPC水溶液处理过的冻存管，迅速投入液氮，随后转送实验室，-80冰箱保存。取100mg组织，Trizol法提取的总RNA，并进行RNA纯度及完整性测定。按照RevertAidTMcDNA第1链合成试剂盒说明反转录，合成cDNA。取cDNA<1g(1L)进行PCR反应，GAPDH为内参照，采取分管扩增，反应体系25L，退火温度58，34个循环。产物经琼脂糖凝胶电泳检测，并送北京奥科生物技术有限责任公司测序。每批实验均设有内参GAPDH作为对照，避免RN

10、A定量误差、加样误差以及各PCR反应体系中扩增效率不均一、各孔间的温度差等所造成的误差。计算目的基因与内参基因吸光度的比值，即目的基因相对表达量，进行半定量比较。同时设有阴性对照，防止非特异性扩增，即PCR体系不加模板;PCR体系中只加内参引物而不加目的基因引物。1.4 结果判定 RNA纯度及浓度测定：分光光度计读取RNA溶液在260nm、280nm波长的吸光度比值A260/A280即RNA浓度。比值判定：A260/A280在1.82.0视为抽取的RNA纯度较高，蛋白质和酚去除较干净，该样品可用于下一步实验。RNA完整性鉴定：经10g/L琼脂糖凝胶电泳，检测28S和18S条带的完整性和他们的比

11、值。28S和18S条带明亮、边缘清晰、条带锐利，并且28S的亮度在18S条带的两倍以上，认为RNA质量是好的。1.5 统计学分析 实验数值均以±s表示，由SPSS13.0统计分析软件处理。计数资料比较采用2检验及Fisher确切概率法，计量资料采用t检验，相关分析用Spearman法。显著性检验水平=0.05。2 结 果2.1 RNA检测及VEGFC产物测序 本实验经反复提取RNA，每例样品RNA纯度均符合要求。本实验经RNA电泳显示，每例样品RNA质量均符合要求(图1)。产物经纯化和双向测序，VEGFC目的片段符合预期扩增目标，无碱基错配、突变等(图2)。2.2 两组VEGFC m

12、RNA表达率的比较 乳腺癌组VEGFC mRNA的阳性表达率为73.3%(44/60)，明显高于对照组的13.3%(2/15)，差异有统计学意义(P<0.01)。2.3 VEGFC mRNA表达与乳腺癌临床、病理相关参数的关系 乳腺癌淋巴结转移组VEGFC mRNA的阳性表达率(86.2%)高于淋巴结无转移组(61.3%)，差异有统计学意义(P<0.05)。在不同月经状态、肿块大小、病理分级、雌激素、孕激素受体及HER2表达分组中VEGFC mRNA表达均无显著性差异(表1)。表1 VEGFC mRNA表达与乳腺癌临床、病理相关参数的关系2.4 两组VEGFC mRNA表达程度的比较 乳腺癌组VEGFC mRNA的相对表达量(0.561±0.3