15 岛津LC2030高效液相色谱仪使用维修保养操作规程

1、1目的：建立岛津LC-2030高效液相色谱仪使用、维修、保养操作规程，确保仪器的正确操作。2范围：本规程适用于岛津LC-2030高效液相色谱仪使用、维修、保养。3责任：化验室负责人，化验员。4内容：4.1概述本系统由四元低压梯度系统输送泵、自动进样器、UV检测器、柱温箱、LabSolutions色谱数据工作站和电脑等组成。4.2原理储液器中的流动相被高压泵打入系统,样品溶液经进样器进入流动相,被流动相载入色谱柱固定相内,由于样品溶液中的各组分在两相中具有不同的分配系数,在两相中作相对运动时,经过反复多次的吸附-解吸的分配过程,各组分在移动速度上产生较大的差别,被分离成单个组分依次从柱内流出,通

2、过检测器时,样品浓度被转换成电信号传送到记录仪,数据以图谱形式打印出来。4.3技术参数流量设定范围0.000110 mL/min流速精度±1% 或 ±2µL/min最大操作压力44MPa进样数216个样品外形尺寸mm410×500×605mm波长重现性±0.1nm温控精度±0.1波长范围190700nm噪声±2.5×10-6AU漂移100×10-6AU/h4.4设备安装位置设备名称放置房间LC-2030型高效液相色谱仪精密仪器室4.5操作方法准备.1准备所需的流动相，用合适的0.45µ

3、m滤膜过滤，超声脱气2030min。.2根据待检样品的需要更换合适的洗脱柱（注意方向）。.3配制样品和标准溶液（也可在平衡系统时配制），用合适的0.45µm滤膜过滤。.4检查仪器各部件的电源线、数据线和输液管道是否连接正常。开机接通电源，依次开启高效液相色谱仪开关，电脑主机、显示器，待高效液相色谱仪自检结束后，打开色谱工作站。等度洗脱.1排气打开Purge，点击程序中的“自动排气”，系统自动进行排气，若使用多通道，根据实际需要选择通道进行排气；如果不出液，用针头接上“p”的管路，进行抽气，至到有液体从“Purge”这个管路排出。.2参数设定.2.1波长设定：在数据采集窗口的时间程序视

4、图中检测器A，选择波长(1)输入所需波长。.2.2流速设定：在数据采集窗口的时间程序视图中泵，选择泵总流量，输入所需流速。.2.3流动相比例设定：在数据采集窗口的时间程序中泵，选择所用泵，输入泵项下所需的浓度比例。.3设置好后，点击“下载”系统自动按照设置好的方法，进行走基线。.4基线平稳后，方可进样。可以进行单次分析或批处理分析。.4.1单次分析:单击数据采集窗口助手栏上的“单次开始”图标；设置“样品名”“方法文件”“数据文件”“样品瓶”“样品架”“进样体积”等信息；点击确定，系统即自动进行单次分析。.4.2批处理分析:单击数据采集窗口助手栏上的“批处理”图标；从文件菜单中选择新建批处理文件

5、；设置“样品名”“方法文件”“数据文件”“样品瓶”“样品架”“进样体积”等信息；点击保存，保存批处理文件；点击批处理助手栏中的“批处理开始”，系统即执行批处理程序。梯度洗脱.1排气:打开Purge，点击程序中的“自动排气”，系统自动进行排气，若使用多通道或梯度，根据实际需要选择通道进行排气；如果不出液，用针头接上“p”的管路，进行抽气，至到有液体从“Purge”这个管路排出。.2参数设定.2.1波长设定：在数据采集窗口的时间程序视图中检测器A，选择波长(1)输入所需波长。.2.2流速设定：在数据采集窗口的时间程序视图中泵，选择泵总流量，输入所需流速。.3 梯度洗脱设置程序:在数据采集窗口的时间

6、程序视图，选择时间程序图标中的LC时间程序；设置程序洗脱的时间及流动相比例；设置完后应以controllerstop（控制仪器停止）为结尾；点击“时间程序”查看设置时间程序是否正确；点击“泵”选择泵，调节压力限制(最大压力设为20.0MPa)；.4 设置好后，点击“下载”系统自动按照设置好的方法，进行走基线。.5 基线平稳后，方可进样。可以进行单次分析或批处理分析。.5.1单次分析:单击LC实时分析窗口助手栏上的“单次开始”图标；设置“样品名”“方法文件”“数据文件”“样品瓶”“样品架”“进样体积”等信息；点击确定，系统即自动进行单次分析。.5.2批处理分析:单击数据采集窗口助手栏上的“批处理

7、”图标；从文件菜单中选择新建批处理文件；设置“样品名”“方法文件”“数据文件”“样品瓶”“样品架”“进样体积”等信息；点击保存，保存批处理文件；点击批处理助手栏中的“批处理开始”，系统即执行批处理程序。泵的清洗 检测完毕后，如流动相无盐、酸及缓冲液，可直接用甲醇或乙腈冲洗30分钟即可，如流动相含有盐、酸及缓冲液，先用甲醇:水=10:90冲流30分钟，再用甲醇冲洗30分钟即可。 样品测试完毕后，绘制标准曲线。方法如下：.1点击“LabSolutions”中的再解析图标，LC再解析开始；.2单击再解析助手栏中的LC数据分析图标，出现LC数据分析窗口；.3选择文件菜单中的打开数据文件，然后选择与测量

8、的数据文件，数据文件打开；.4单击助手栏中的向导图标，出现化合物向导；.5请确保设置了正确的积分参数，然后单击下一步；.6记录要识别的峰的保留时间，然后单击下一步；.7指定定量计算方法和校准曲线类型，然后单击下一步；.8设置识别的方法，然后单击下一步；.9提供化合物表的详细设置，然后单击完成；.10单击LC数据助手栏中的应用到方法图标；.11命名方法文件并单击保存；.12单击确定而不进行任何更改；.13单击再解析助手栏中的校准图标；.14打开用于生成校准曲线的方法文件；.15拖入需要作校准曲线的数据，即得出校准曲线。使用校准曲线计算数据浓度.1选择文件菜单中的打开数据文件，然后指定数据文件名；

9、.2选择文件菜单中的加载方法参数，然后指定方法文件名，出现方法参数屏幕；.3使用方法文件中的校准曲线计算数据的浓度。出具报告.1根据需要设置相应的报告格式；.2把测定的数据拖入设置好的报告模块中，即得报告。4.5.9关机全部分析完毕后，先关检测器和柱温箱电源，再用适宜的溶剂清洗色谱系统。依次关闭系统控制器、泵和微机电源，拔下各插头，做好使用记录。4.6泵的使用和维护注意事项为了延长泵的使用寿命和维持其输液的稳定性，必须按照下列注意事项进行操作：.1防止任何固体微粒进入泵体，因为尘埃或其它任何杂质微粒都会磨损柱塞、密封环、缸体和单向阀，因此应预先除去流动相中的任何固体微粒，而常用的方法是滤过，可

10、采用微孔滤膜（0.2µm或0.45µm）等滤器。泵的入口都应连接砂滤棒（或片）。输液泵的滤器应经常清洗或更换。.2流动相不应含有任何腐性物质，含有缓冲液的流动相不应保留在柱内，尤其是在停泵过夜或更长时间的情况下。如果将含缓冲液的流动相留在泵内，由于蒸发或泄漏，甚至是由于溶液的静置，就可能析出盐的微细晶体，这些晶体将和上述固体微粒一样损坏密封环和柱塞等。因此，必须泵入加入少量甲醇或乙腈和纯水将泵充分清洗后，再换成适合于色谱柱保存和有利于泵维护的溶剂（对于反相键合硅胶固定相，可以是甲醇或甲醇水）。.3泵工作时要留心防止溶剂瓶内的流动相被用完，否则空泵运转也会磨损柱塞、缸体或密封

11、环，最终产生漏液。.4输液泵的工作压力决不要超过规定的最高压力，否则会使高压密封环变形，产生漏液。.5流动相应该先脱气，以免在泵内产生气泡，影响流量的稳定性如果有大量气泡，泵就无法正常工作。如果输液泵产生故障，须查明原因，采取相应措施排除故障。.1没有流动相流出，又无压力指示。原因可能是泵内有大量气体，这时可打开泄压阀，使泵在较大流量下运转，将气泡排尽，也可用一个50ml针筒在泵出口处帮助抽出气体。另一个可能原因是密封环磨损，需更换。.2压力和流量不稳。原因可能是气泡，须要排除；或者是单向阀内有异物，可卸下单向阀，进入丙酮内超声清洗。有时可能是砂滤棒内有气泡，或被盐的微细晶粒或滋生的微生物部分

12、堵塞，这时，可卸下砂滤棒浸入流动相内超声除气泡，或将纱滤棒浸入稀酸内迅速除去微生物，或将盐溶解，再立即清洗。.3压力过高的原因是管路被堵塞，需要清除和清洗。压力降低的原因则可能是管路有泄漏。检查堵塞或泄漏时应逐段进行。关于试剂.1试剂类别：有机溶剂、无机化合物、水.2试剂的要求：.2.1有机溶剂的级别优级纯以上专用试剂。.2.2无机化合物要求分析纯以上。.2.3水要求是去离子纯净水。流动相.1无气泡，通过超声脱气，通氦气等方法进行脱气。.2纯净无杂质，常用方法为用0.45µm微孔过滤膜进行过滤。色谱柱的注意事项.1压力：注意每根柱的耐压（最大使用压力）。.2pH的范围：不同柱子的pH

13、值范围有所不同。.3清洗：柱子需要必要的清洗，请用户参考柱子的说明书。.4保存：长时间不使用柱子时需要用合适的试剂进行保存，请参考柱子的说明书。关于吸滤过滤器堵塞.1现象：塞吸现象、管路中不断产生气泡.2处理方式：将吸滤头1从溶剂管中拔出，放在正己烷或稀硝酸（一般10%中超声清洗。在线过滤器堵塞.1现象：不连接柱子及管路、混合器（松开泵进混合器或柱子的管路接头），设定泵流速为1ml/min，泵压力大于0.3MPa，说明在线过滤器堵塞。.2处理方式：一般建议用户更换新的过滤器，也可以将在线过滤器拆下，用稀硝酸（浓度小于10%），进行超声清洗。压力波动的原因及处理方法.1产生波动的原因：有气泡；密

14、封圈有磨损，产生微量的泄液；进口单向阀中有异物（较常见）；在线过滤器，管路，柱子进口处有盐析出或杂物；.2处理方法：流动相进行脱气，排除流路中的气泡；更换密封圈； 清洗进出口单向阀，将单向阀置于烧杯中，用异丙醇进行超声清洗；检查并清洗过滤器及流路。引起柱压升高的原因.1色谱柱长时间使用后用户发现柱压比以往要高出许多，造成此情况可能由以下几个因素引起。在线过滤器堵；高压混合器堵；进样器堵；流路中部分细管堵； 流通池堵；柱子内部吸附样品产生堵。.2确认方法：进行分段检测，确认的确是柱子压力高还是以上5点原因中某个引起的。进样峰分叉的原因.1流路及柱子等没有做任何改变的情况下，分析样品时，被检测峰产

15、生分叉，则说明保护柱或分析柱柱效下降，需再生保护柱或分析柱。.2柱的出口到检测池的管路偏长或管路内径宽所致（常用内径0.3mm以下）,导致样品扩散,造成峰分叉。什么情况下需更换D2Lamp（氘灯）.1显示D2LampERROR时，一般情况下认为氘灯不良需更换。.2氘灯超过使用时间（理论为2000小时），需要更换氘灯。造成检测池能量低的原因.1氘灯使用时间过长（大于2000小时），灯老化所致。.2光路系统受到污染或老化。说明：检测池能量高低以参比池为准。 检测池中有气泡如何排除一般情况下，很小的气泡会停留在检测池中，所以需要在池管路出口1处加一个背压管，池中气泡不易在池中产生。（加背压：出口处加上一段阻尼管增加压力）如何清洗流通池一般情况下，请用户不要将池拆散，而是用仪器附带的工具进行清洗。常用流程：水-甲醇-异丙醇-甲醇，或再用稀硝酸冲洗池流路。基线漂移，噪音增大的原因。.1所用试剂不纯.2整个流路系统不干净.3流动池污染.4氘灯使用时间过长.5电压不稳，或者有环境干扰.6柱子污染等因素梯度洗脱时可能产生的干扰峰在进行梯度洗脱时，由于溶剂的变化，导致吸光度背景值的该改变。所以会产生基线上下波动，这是正常现象。由于不断的洗脱，特别是水及无机盐混合的流路，流过柱子后部分杂质被柱子吸附，随着体系洗脱