乙型肝炎表面抗原检测中的偶然误差及对策

1、292.13No.32003ChinJNosocomiolVol论著乙型肝炎表面抗原检测中的偶然误差及对策肖征1,周薇薇1,徐雅萍1,董立2(1.解放军总医院,北京100853;2.漯河市第一人民医院,河南漯河462000)摘要:目的观察临床常规检测乙型肝炎表面抗原(HBsAg)中出现偶然误差的机率以及探讨相应的解决办法。方法对临床常规检测乙型肝炎表面抗原的血清标本,用ELISA首次测定后,对其阳性标本再用ELISA方法复测和用胶体金纸条法检测,部分标本再用另外两种ELISA试剂检测,并对其中7例标本进行了确认试验。结果共检测16944例,首次单孔测试阳性883例,复查后确定其中阳性846例,

2、假阳性率为4.1%,用胶体金法对这846例进行测试,假阴性率为8.03%。结论对ELISA检测方法,阳性者确有必要进行复孔测试,若用胶体金法复测可节约成本和时间,但单独的胶体金法只适合于初筛试验。关键词:HBsAg;偶然误差;ELISA中图分类号:R512.6+2文献标识码:A文章编号:100524529(2003)0320292203ChanceErrorsinClinicalHBsAgDetectionandCountermeasuresXIAOZheng,ZHOUWei2wei,XUYa2ping,DONGLi(1.DeptMicrobiology,GeneralHospitalofPL

3、A,Beijing,100853,China;2.ClinicalLab,theFirstHospitalofLuoheCity,Luohe,Henan462000,China).SomesampleswerecheckedbytwootherELISAkitsgoldstripswereappliedtothoseshowingreactiveresultscanbeusedforretesttosavethetimeandcost.Itsbettertouserapidstripsonlyforscreenpurposeduetoitslowsensitivity.Keywords:HBs

4、Ag;Chanceerror;ELISA目前国内对乙型肝炎病毒感染的诊断首要倚重的是对患者血清中HBsAg的检测。而最多采用的检测方法是酶免疫试验(ELISA)。我们实验室在临床检验中,注意到ELISA试验由于本身的一些特点,不可避免地出现一些误差,也就是偶然误差。如果处理不好,会极大地影响到实验结果的准确性。为此,我们在采取相应措施的同时,观察了一部分标本的实际测定情况,以了解乙肝表面抗原的酶免疫检测中偶然误差对实验结果的影响程度,以及可能的解决方法。1材料与方法1.1材料2002年15月间我院住院患者及门诊患者送检的常规检测HBsAg的血液标本,不抗凝。对需保留的标本,分离血清后,-20冻

5、存。试剂:酶免疫法检测HBsAg,厂家有美国雅培(Murex)、法国生物梅里埃(AKZO)、北京万泰。HBsAg胶体金纸条法检测试剂,我们对3家赠送试剂进行了测试,选用灵敏度最好的一家试剂作复测用,其灵敏度约12g L。HBsAg确认试剂:厂家为美国雅培公司(Murex),其原理是对标本进行双孔检测,在加入标本后将试剂盒所带的HBsAg中和抗体加入其中的1孔(中和孔)中,而另一孔不加抗体为对照孔。其他步骤与普通的ELISA测试大致相同,测定结果以中和孔的OD值对照孔的一定比值时为HBsAg阳性。收稿日期:2002205202;修订日期:2002211217中华医院感染学杂志2003年第13卷第

6、3期1.2观察方法检测,其中ELISA阳性者再用胶体金方法测试,若亦为阳性即报告阳性。对胶体金方法检测结果为阴性者,再用ELISA法双孔复查,以双孔复查的结果为准出具报告。常规检测,共测16944例,其中ELISA初次测定阳性反应(reactive)883例。对这883例标本用胶体金试剂测定,其中有105例阴性。这105例再用ELISA复查后有37例为阴性,占初测阳性的4.10%,ELISA法阳性总数为846例,其中68例胶体金试剂为阴性,假阴性率8.03%。血清总阳性率为4.99%。上述68例胶体金试剂阴性标本中用另外两种ELISA试剂(进口、国产各1种)检测了36例,结果这36例用进口试剂

7、测试均为阳性,国产试剂有1例阴性。37例ELISA初次测定假阳性的OD值分布为:3.000、3.000、3.000、3.000、3.000、3.000、2.997、2.875、1.683、1.145、1.010、0.745、0.711、0.697、0.667、0.552、0.522、0.445、0.435、0.401、0.352、0.344、0.311、0.309、0.301、0.293、0.293、0.231、0.228、0.222、0.211、0.200、0.198、0.192、0.188、0.182、0.152。36例胶体金法假阴性标本其ELISA测定的OD值分布为:3.000、2.50

8、1、1.989、1.510、1.345、1.132、1.119、1.038、1.035、0.945、0.844、0.820、0.812、0.799、0.787、0.773、0.770、0.746、0.697、0.634、0.542、0.539、0.531、0.510、0.485、0.462、0.461、0.460、0.324、0.311、0.309、0.272、0.251、0.212、0.209、0.191。7例确认测试结果,有6例阳性,1例阴性。其分布与ELISAOD值分布无关。3讨论自ELISA方法进入免疫学检测领域以来,大家多注意它对各种标本检测的灵敏度及特异性指标,这两个指标是由测试本

9、身的系统误差所决定的。实验系统本身的系统误差是由试剂的制备情况,包括板的包被、单克隆抗体的制备、酶标记物的制备以及其他相关试剂的配置等因素所决定的,这些可能因素导致的测试误差是可以预测的,但是不能避免的。293也就是说,一旦试剂成分确定下来,其敏感性、特异性也就确定下来了。在临床实践中,最常遇到的问题却是偶然误差。由于ELISA试验的特点,极易受加样错误、孔与孔之间的交叉污染、加试剂的不均一性、实验程序以及仪器故障等的影响,尤其是手工或半自动操作时。其中最容易出现的是假阳性。在试剂的评价以及研究工作中,可以通过做双孔(doublewells)的办法去除相当多的加样、交叉污染所造成的误差,再加上

10、严格操作规程、最优化实验条件,可以取得最优的检测结果。但在常规工作中,由于成本问题,不可能对所有标本都采用双孔检测的方法;而实验人员的水平也会参差不齐,并不是所有的检测都是在最优条件下进行的。在一般情况下,可以说对临床标本的检测结果,首次测定为阴性的基本可以认为是真阴性(truenegative),而阳性反应者(reactive)则并不一定为真阳性(truepositive)。这一点,从我们的实验结果分析中可以看到。本试验中ELISA方法首次单孔测定,其总的假阳性(falsereactive)率为4.10%。最简单的解决办法,是将此标本再作1次重复性的测定(应为双孔),以为确定。但这个方法的缺

11、点在于,需要增加0.5d出具报告时间,并要增加试剂费用。值得注意的是,据我们的了解,国内的实验室,尤其是中小型实验室,有许多并不做这个重复测定,初测阳性后即报阳性。国内几本权威性的操作手册也没有对ELISA检测必须复测的规定1,2。如果不做复测,从本研究所统计的数据看,可能会出现4.10%的误报阳性。从这37例的测定结果来看,有约一半的OD测定值0.300,对这一部分标本,多数实验室是会做重复测定的,换句话说,对于部分操作稍为严格一些的实验室,单孔测定的误报阳性率会在2.00左右。但有一点要提出的是,根据我们的经验,如果应用全自动系统进行试验,可以大大减少偶然误差。我们认为,重复测定主要解决的

12、问题是偶然误差,而胶体金法虽敏感特异性均比ELISA方法要低,但其偶然误差率却大大低于ELISA,也就是说它的重复性好。所以我们选择将ELISA初测阳性的标本用胶体金法复测,采取两种方法的优势互补,效果很好。首先是缩短出具报告所需时间,即ELISA试验阳性后加做胶体金试验只需增加十几分钟的实验时间;其次胶体金法试剂费用要低于ELISA试剂(约1 21 4),更为经济。在这里,我们不是用胶体金法去确认ELISA法,而是增加ELISA法的一个参照指标,如果这个参照指标与ELISA是相符的,即认为这个ELISA结果是可信的。但是,胶体金法294.13No.32003ChinJNosocomiolVo

13、l不应作为临床大中型实验室的常规检测乙肝表面抗原的方法。本研究所作的胶体金法,假阴性率为8.03%。这些假阴性标本的初次ELISA2OD值有70%1.000,属于胶体金法敏感度不够,未能测出sAg的阳性率应低于就诊人群。这已低于前些年普遍认为的我国普通人群的HBsAg阳性率在10%左右的数值。也说明我国对乙肝的防治工作有了很大的进展,人民的健康水平有了长足的提高。(本研究中乙肝表面抗原确认试验,承北京市血站质检)科邱燕协助进行,在此表示感谢。所致。对随机取的7个胶体金复测为阴性的标本作乙肝表面抗原确认试验,即有6个为阳性,说明ELISA初测阳性标本多数血中确有乙肝表面抗原存在。本研究中胶体金法

14、的假阴性百分率大于已有的一些报道3,4。建议胶体金法只适合于做初筛试验,如试验结果与临床症状不太符合,应用其他的方法复查。本研究只对标本是否为HBsAg阳性进行了探讨,并未对其乙型肝炎病毒感染状态作进一步的研究,如检测乙肝病毒核酸等。另外,对ELISA初次测定阴性的标本亦未作其是否假阴性的进一步测试。从研究的总测定例数来看,住院及门诊患者的HBsAg的总阳性率为4.99%,而普通人群的HB2参考文献:1李影林.临床医学检验手册M.1987.2仲剑平.医疗护理技术操作常规M.1998.3FarghalyAM,KotkatAM.Studyofthesensitivityofbloodspotted

15、onfilterpaperinthedetectionofHBsAgandanticoreusingELISAtechniqueJ.1990,65(324):3912400.4任卫国,陈虹,王知秋.金标试纸法与ELISA法检测无偿献血JEgyptPublicHealthAssoc,吉林:吉林科学技术出版社,北京:人民军医出版社,者HBsAg结果比较J.中国输血杂志,2001,14(1):25.护理人员医院感染认知程度调查分析宋翼(黄石市二医院,湖北黄石435002)关键词:护理人员;医院感染;知识中图分类号:R471文献标识码:B文章编号:100524529(2003)0320294201为了

16、解我院护理人员医院感染认知程度,以采取有地放矢的培训方法,2000年8月,笔者对临床17个科室护理人员进行调查,现将结果报告如下。师医院感染诊断及抗生素应用、微生物及免疫学知识欠缺;护士除有以上缺陷外,卫生学监测掌握不完全;而实习护士除了解消毒隔离知识外,其余均知晓甚少。1材料与方法调查对象为临床一线护理人员,调查内容为消毒隔离基本知识、一次性物品的管理、卫生学监测、医院感染诊断,抗生素应用、微生物与免疫学等相关内容。调查方法采用统一闭卷答题,分别调查了护士长21名、主管护师82名、护士94名、实习护士42名。3建议由此可看出护理人员掌握的医院感染知识远不能适应临床需要,加强和普及医院感染知识培训以及拓宽护理人员知识面已成为当务之急,