灭菌注射用水无菌检查方法适用性

1、 编 号：SOP-VM-02-075 版本号：00陕西同康药业有限公司灭菌注射用水无菌检查方法适用性试验方案起草人日 期年 月 日会 审化 验 室：日 期年 月 日质量管理处：日 期年 月 日批准人日 期年 月 日目 录1 试验描述22 试验依据23 试验项目组成员及职责24 试验内容25 试验前准备36 试验过程47 偏差处理88 变更控制99 最终评价及建议910 试验周期9陕西同康药业有限公司灭菌注射用水无菌检查方法适用性试验方案1 试验描述：本分析方法为本公司的灭菌注射用水检验标准操作规程（下称SOP），该SOP制定依据中华人民共和国药典2015年版二部的方法。为确保其检测结果准确，本

2、公司实验室对该品种无菌检查方法适用性是否适合进行试验。2 试验依据：中华人民共和国药典2015年版四部分析方法指导原则中华人民共和国药典2015年版二部灭菌注射用水检验标准操作规程SOP-QC-01-001无菌检查标准操作规程SOP-QC-07-018灭菌注射用水质量标准3 试验项目组成员及职责：部门成员职责QC报告起草QC方法实施QAQA监督质量部分析方法审核4 试验内容:序列号试验测试项目可接受标准1灭菌注射用水无菌检查方法适用性试验该检查方法适用于灭菌注射用水的无菌检查5 试验前准备：5.1 人员培训：根据试验方案已对本次试验相关人员进行培训（见附表1）。序号参加试验人员名单是否参加培训

3、培训考核结果1口是 口否口符合规定 口不符合规定2口是 口否口符合规定 口不符合规定3口是 口否口符合规定 口不符合规定4口是 口否口符合规定 口不符合规定5口是 口否口符合规定 口不符合规定6口是 口否口符合规定 口不符合规定7口是 口否口符合规定 口不符合规定8口是 口否口符合规定 口不符合规定9口是 口否口符合规定 口不符合规定10口是 口否口符合规定 口不符合规定11口是 口否口符合规定 口不符合规定12口是 口否口符合规定 口不符合规定5.2 仪器设备、标准品和试剂：5.2.1 仪器设备仪器名称编号设备操作规程万分之一天平pH计集菌仪蒸汽灭菌器生化培养箱霉菌培养箱生物安全柜快速振荡器

4、5.2.2 标准品和试剂名称厂家批号硫乙醇酸盐流体培养基胰酪大豆胨液体培养基（TSB培养基）沙氏葡萄糖琼脂培养基（SDA培养基）0.9%无菌氯化钠溶液5.2.3 指导文件文件名称编 号存放地点无菌检查标准操作规程SOP-QC-07-018质量管理处5.2.4 样品名称厂家规格批号灭菌注射用水本公司5ml6 试验过程6.1培养基的适用性检查对配制好的硫乙醇酸盐流体培养基、胰酪大豆胨液体培养基无菌性及灵敏度检查均符合中国药典2015年版无菌检查法（通则1101）要求。6.2菌种及菌液制备6.2.1、菌种：金黄色葡萄球菌( Staphylococcus aureus)CMCC(B) 26 003，枯

5、草芽孢杆菌（Bacillus subtilis）CMCC（B）63 501，生孢梭菌( Clostridium sporogenes)CMCC(B) 64 941，大肠埃希菌菌（Escherichia coli）CMCC(B) 44 102，白色念珠菌( Candida albicans)CMCC(F) 98 001，黑曲霉( Aspergillus niger)CMCC(F) 98 003，上述标准菌株均源自中国食品药品检定研究院，工作用菌株为第三代。6.2.2、菌液制备： 6.2.2.1 接种金黄色葡萄球菌的新鲜培养物至胰酪大豆胨液体培养基（TSB培养基）中，3035培养1824h培养后，

6、用0.9%无菌氯化钠溶液制成每1ml含菌数小于100cfu的混悬液。6.2.2.2 接种生孢梭菌的新鲜培养物至硫乙醇酸盐流体培养基（+琼脂）中，3035培养1824h培养后，用0.9%无菌氯化钠溶液制成每1ml含菌数小于100cfu的混悬液。6.2.2.3 接种大肠埃希菌的新鲜培养物至胰酪大豆胨液体培养基（TSB培养基）中，3035培养1824h培养后，用0.9%无菌氯化钠溶液制成每1ml含菌数小于100cfu的混悬液。6.2.2.4 接种枯草芽孢杆菌的新鲜培养物至胰酪大豆胨液体培养基（TSB培养基）中，3035培养1824h培养后，用0.9%无菌氯化钠溶液制成每1ml含菌数小于100cfu的

7、混悬液。6.2.2.5 接种白色念珠菌的新鲜培养物至沙氏葡萄糖液体培养基（SDB培养基）中，2025培养2448h培养后，用0.9%无菌氯化钠溶液制成每1ml含菌数小于100cfu的混悬液。6.2.2.6 接种黑曲霉的新鲜培养物至沙氏葡萄糖琼脂斜面培养基（SDA培养基）上，2025培养57d，加入含0.05%（ml/ml）聚山梨酯80的0.9%无菌氯化钠溶液，将孢子洗脱。然后 ，采用适宜的方法吸出孢子悬液至无菌试管内，用0.05%（ml/ml）聚山梨酯80的0.9%无菌氯化钠溶液制成每1ml含菌数小于100cfu的孢子悬液。上述6株菌制得菌悬液含量（每1ml含菌数）结果见表1。 表1 菌液制备

8、计数结果试验菌株代 数菌液稀释度接菌量ml/皿 计数结果cfu/皿均值cfu/ml平皿1平皿2大肠埃希菌金黄色葡萄球菌生孢梭菌枯草芽孢杆菌白色念珠菌黑 曲 霉6.3方法适用性试验6.3.1 供试液制备：按照中国药典2015年版 “无菌检查法（通则1101）”，取供试品120支/每次，按无菌操作法处理，以薄膜过滤法进行试验。6.3.2 试验过程：6.3.2.1 试验管 取供试品20支，导入集菌过滤器内（单联），按薄膜过滤法过滤。用0.9%无菌氯化钠溶液冲洗，每次100ml，共冲洗2次，在最后一次冲洗液中分别加入小于100cfu的金黄色葡萄球菌，加入硫乙醇酸盐培养基；枯草芽孢杆菌、生孢梭菌、大肠埃

9、希菌菌、白色念珠菌、黑曲霉等试验菌，同法操作，加入相应培养基。6.3.2.2 对照管 不加入供试液，按试验管方法同法试验。6.3.2.3 培养 硫乙醇酸盐流体培养基置3035培养，胰酪大豆胨液体培养基培养基置2025培养。培养不得超过5天。6.3.2.4 结果判断 与对照管比较，如含供试品各容器中的试验菌均生长良好，则说明供试品的该检验量在该检验条件下无抑菌作用或其抑菌作用可以忽略不计，照此检查方法和检查条件进行供试品的无菌检查。如含供试品的任一容器中的试验菌生长微弱、缓慢或不生长，则说明供试品的该检验量在该检验条件下有抑菌作用，应采用增加冲洗量、使用中和剂或灭活剂、更换滤膜品种等方法，消除供

10、试品的抑菌作用，并重新进行方法适用性试验。6.3.2.5 阴性对照 阴性对照试验同时进行，不得有菌生长。6.3.3 方法适用性试验结果6.3.3.1第一次结果试验时间： 年 月 日培养温度：硫乙醇酸盐流体培养基置35；胰酪大豆胨液体培养基置25。 试验结果见表2。表2 无菌检查方法适用性第一次试验结果试验菌 培养对象培养时间硫乙醇酸盐流体培养基观察结果12345大肠埃希菌试验管对照管金黄色葡萄球菌试验管对照管生孢梭菌试验管对照管阴性对照硫乙醇酸盐流体培养基（ ）试验菌培养对象 培养时间胰酪大豆胨液体培养基观察结果12345枯草芽孢杆菌试验管对照管白色念珠菌试验管对照管黑曲霉试验管对照管阴性对照

11、胰酪大豆胨液体培养基（ ）备注： “+”表示混浊；“-” 表示澄清；“+/-”表示生长微弱试验结果评价：本次试验小组组长对检验方法进行试验及评价。评价人： 日期： 年 月 日6.3.3.2 第二次试验结果试验时间： 年 月 日 培养温度：硫乙醇酸盐流体培养基置35；胰酪大豆胨液体培养基置25。试验结果见表3。表3 无菌检查方法适用性第二次试验结果试验菌 培养对象培养时间硫乙醇酸盐流体培养基观察结果12345大肠埃希菌试验管对照管金黄色葡萄球菌试验管对照管生孢梭菌试验管对照管阴性对照硫乙醇酸盐流体培养基（ ）试验菌 培养时间培养对象胰酪大豆胨液体培养基观察结果12345枯草芽孢杆菌试验管对照管白

12、色念珠菌试验管对照管黑曲霉试验管对照管阴性对照胰酪大豆胨液体培养基（ ）备注： “+”表示混浊；“-” 表示澄清；“+/-”表示生长微弱试验结果评价：本次试验小组组长对检验方法进行试验及评价。评价人： 日期： 年 月 日6.3.3.3 第三次试验结果试验时间： 年 月 日 培养温度：硫乙醇酸盐流体培养基置35；胰酪大豆胨液体培养基置25。 试验结果见表4。 表4 无菌检查方法适用性第三次试验结果试验菌 培养对象培养时间硫乙醇酸盐流体培养基观察结果12345大肠埃希菌菌试验管对照管金黄色葡萄球菌试验管对照管生孢梭菌试验管对照管阴性对照硫乙醇酸盐流体培养基（ ）试验菌 培养对象培养时间胰酪大豆胨液

13、体培养基观察结果12345枯草芽孢杆菌试验管对照管白色念珠菌试验管对照管黑曲霉试验管对照管阴性对照胰酪大豆胨液体培养基（ ）备注： “+”表示混浊；“-” 表示澄清；“+/-”表示生长微弱试验结果评价本次试验小组组长对检验方法进行试验及评价。评价人： 日期： 年 月 日6.3.4 灭菌注射用水无菌检查方法适用性试验结论本次试验小组组长对试验结果进行试验及评价。评价人： 日期： 年 月 日6.4 无菌检查方法取供试品60支，采用薄膜过滤法，以0.9%无菌氯化钠溶液为冲洗液（冲洗量：200ml/膜，100ml/次）按照中国药典2015年版四部无菌检查法，以相应溶剂和稀释液、冲洗液同法操作，作为阴性

14、对照；以金黄色葡萄球菌为阳性对照菌。6.5 结果判断阳性对照应生长良好，阴性对照管不得有菌生长。否则，试验无效。若供试品管均澄清，或虽显浑浊但均确证无菌生长，判供试品符合规定；若供试品管中任何一管显浑浊并确证有菌生长，判供试品不符合规定，除非能充分证明试验结果无效，即生长的微生物非供试品所含。当符合下列至少一个条件时方可判试验结果无效：（1） 无菌检查试验所用的设备及环境的微生物监控结果不符合无菌检查法的要求。（2） 回顾无菌实验过程，发现有可能引起微生物污染的因素。（3） 供试品中污染的微生物经鉴定后，确证是因无菌试验中所使用的物品和（或）无菌操作技术不当引起的。 试验若经确认无效，应重试。

15、重试时，重新取同量供试品，依法检查，若无菌生长，判供试品符合规定；若有菌生长，判供试品不符合规定。7 偏差处理方案执行过程中如有偏差产生，根据偏差处理管理规定处理，并填写偏差处理记录最终报告包括偏差列表（见附表3）和以下信息。偏差编号发生工序 产生原因处理情况处理措施处理结果8 变更控制方案执行过程中如有对原系统进行变更，提出的变更应遵循，变更控制管理规程，并要求填写变更申请控制表，最终报告应包括变更控制列表（见附表4）和以下信息变更控制号变更内容变更原因处理情况变更结果9 最终评价及建议验证委员会主任对本次试验进行评价。9.1 本次试验人员培训效果是否达到预期。9.2 本次试验的先决条件的试验是否满足设计要求。评价人： 日期： 年 月 日10 试验周期 当质量标准有变更，需对相关项目进行再试验。附表1编 号：S