血清胱抑素C在肾损伤中研究及与血肌酐尿素氮关系的分析

1、血清胱抑素C在肾损伤中研究及与血肌酐尿素氮关系的分析张立军摘要 目的 探讨血清胱抑素C(cystatin C)作为早期肾功能损害及肾损伤时敏感标志物对临床诊断的价值。方法 采用颗粒增强透射比浊法测定血清结果 560例血清胱抑素C高于正常参考值的患者中血清肌酐(Scr)、cystatin C的浓度，同时测定血清肌酐(Scr)、尿素氮(BUN)。尿素氮(BUN)异常的分别是355例、结论 血清cystain C是反映早期肾脏损伤的敏感指标，422例。结合血清肌酐、尿素氮可以更准确判断肾小球滤过功能。应用cystatin C评价异常肾小球滤过率(GFR)有广泛的前景。关键词 血清胱抑素C；血清肌酐；

2、尿素氮Abstract Objective To discuss the value of using serum cystatin C as an early sensitive mark when kidney functional im-paired and kidney damni ed. Methods Using transmission turbidity method to test the density of serum cystatin C serumcreatinine (Scr) BUN .Results Among 560 patients whose values

3、 of serum cystatin C were over than the normal there were 355 patients whose values of Scr increased too and there were 422 patients who complicating singularity of BUN. Conclusion Serum cystatin C is a sen-sitive mark to re ect the kidney impairment it can be used to judge the ltration function of

4、glomerular instead of the te-dious endogenous creatinine clearane(Ccr)method.Using cystatin C to evaluate the abnormal glomerular ltraion rate(GFR)has a wide prospect.Key words Serum cystatin C;Serum creatinine;Urea nitrogen肾损伤疾病是临床上一种常见的疾病，主要表现双肾排泄过滤机体废物能力的极大降低。早诊断、早治疗，可逆转损伤的肾功能，阻止肾脏疾病恶化。目前血清胱抑素C(c

5、ystatin C)检测是近几年发展起来的肾脏疾病早期诊断的新检测项目，它是一种低分子量蛋白质，由体内有核细胞产生，来源恒定。作为一种血浆内源性成分对此我们采用颗粒透射比浊法测定血清cystatin C的浓度，探讨其在肾病中的变化情况，并同血清肌酐(Scr)、尿素氮(BUN)进行比较。1 材料与方法1.1 研究对象 2010年16月6338例患者血清标本来自我院门诊及住院患者共同检测cystatin、血清肌酐(Scr)、尿素氮(BUN)，其中血清胱抑素C(cystatin C)1.55(mg/L)共560例，男性328例，女性232例。年龄9460岁368例，3059岁163例，1529岁23

6、例，014岁6例。cystatin C正常参考范围0.501.55mg/L，血清肌酐(Scr)正常参考范围44133mol/L、尿素氮(BUN)正常参考范围2.47.5mol/L。各项正常参考范围是依据全国临床检验操作规程，结合本院实际情况做适当修改得出。1.2 仪器 cystatin C、Scr、BUN浓度测定采用贝克曼公司生产的LX20全自动生化分析仪。采用Excel 2003分析处1.4 数据处理 数据以(s)表示，理。2 结果560例cystatin C(cysc)1.55mg/L的患者cystatin C、BUN、Scr性别年龄构成比比较。cystatin C的值在1.55mg/L时

7、为异常，BUN的值在7.5mol/L为异常，Scr的值在133mol/L时为异常，各组的异常检出率见表1。560例cystatin C(cysc)1.55mg/L的患者各年龄阶段cystatin C、Scr、BUN均值结果比较。cystatin C的值在1.55 mg/L时为异常，BUN的值在7.5mol/L为异常，Scr的值在133mol/L时为异常，各年龄段均值见表2。从560例标本中选出cystatin C(cysc)、Scr、BUN数值最高30、60、90、120、150、180例患者，并计算cystatin C、BUN、Scr均值与BUN、Scr对应cystatin C(cysc)均

8、值，分析cystatin C、Scr、BUN的相互关系，见表3。3 讨论在1981年检测了人胱氨酸蛋白酶抑制剂C(cystatinC)的氨基酸系列，它没有显示与已知任何超家族蛋白系列的同源性。直到两年后研究者检测了鸡胱氨酸蛋白酶抑制剂的结构，并发现两种蛋白44%的氨基系列相同，才确定胱氨酸蛋白酶抑制剂C的功能半胱氨酸蛋白酶的抑制剂。又经过二十多年的研究，人胱氨酸蛋白酶抑制剂家族目前已有明确11种蛋白组成。它们是胱氨酸蛋白酶抑制剂家族1中的胱氨酸蛋白酶抑制剂A和B，是惟一的细胞内蛋白。胱氨酸蛋白酶抑制剂家族2中的胱氨酸蛋白酶抑制剂C、D、E、F、S、SA和SN组成，它们是细胞外蛋白和细胞间蛋白。

9、胱氨酸蛋白酶抑制剂家族3由高和低分子量的激肽原(Kininogen)组成，它们主要是血管内蛋白。1983年Anastasi等首次从鸡蛋清中分离纯化得到高纯度的半胱氨酸蛋白酶抑制剂(cysteine proteinase inhibitor，CPI)，是这一类蛋白质超大家族的成员之一，有半胱氨酸蛋白酶抑制剂C、胱抑素C、-痕迹蛋白(-trace protein)、后球蛋白(post-globulin)之称，目作者单位:518020 暨南大学第二临床学院深圳市人民医院检验科 (张立军)当代医学2011年1月第17卷第2期总第229期Contemporary Medicine, Jan. 2011,

10、Vol.17 No.2 Issue No.229表1 560例cystatin C(cysc)1.55mg/L的患者cysc、BUN、Scr性别年龄构成比总数(男/女) 9460岁 5930岁 2915岁 014岁cysc1.55mg/L 560(328/232) 66%(368/560) 29%(163/560) 4%(23/560) 1%(6/560)BUN7.5mol/L 422(257/165) 70%(297/422) 26%(109/422) 4%(16/422) (0/422)Scr133mol/L 355(229/126) 66%(235/355) 29%(104/355) 5

11、%(16/355) (0/355)表2 560例cystatin C(cysc)1.55的患者各年龄阶段cysc scr BUN均值cysc1.55mg/L 总数(男/女) 6094岁 3059岁 1529岁 014岁cysc均值mg/L 2.99 2.85 3.31 3.36 1.75BUN均值mol/L 14.05 13.46 14.36 20.1 4.86Scr均值mol/L 309.5 271.4 384.56 514.76 39.33表3 560例标本中数值最高30180例cysc、BUN、Scr均值与BUN、Scr对应cysc均值560例中数值最高 30例 60例 90例 120例

12、 150例 180例cysc均值(mg/L) 9.21 7.53 6.5 5.95 5.43 5.05BUN均值(mol/L) 40.49 34.11 30.22 27.8 25.89 24.22Scr均值(mol/L) 1273.58 1098.05 968.33 857.36 733.65 683.41BUN对应cysc均值 4.07 4.67 4.67 4.54 4.42 4.31Scr对应cysc均值 6.47 6.69 6.2 5.66 5.21 4.83前中文多称之为胱抑素C。它由122个氨基酸组成，带正电荷，等电为比较血清胱抑素C在医院常规检测中相对血清肌酐(Scr)、点为9.3

13、，是一种碱性非糖化的低分子蛋白质，相对分子质量为13 尿素氮(BUN)的优势，笔者从6338份医院患者标本中统计出血清3001。胱抑素C异常标本560例，在560例血清胱抑素C异常标本中，血清Cystatin C是一种半胱氨酸蛋白酶抑制剂，也被称为-微肌酐(Scr)异常355例，尿素氮(BUN)异常422例。各项正常参考范量蛋白或-后球蛋白，广泛存在于各种组织的有核细胞和体液围的来源是依据全国临床检验操作规程，结合我院实际情况中，是一种低分子量、碱性非糖化蛋白质，分子量为13300Mr，由做适当修改得出。从横向比较得出的这个数据中可以看出血清胱122个氨基酸残基组成，由机体有核细胞产生，产生率

14、恒定，不受抑素C在检测中相对血清肌酐、尿素氮的优势。因此可以说胱抑素炎性反应、胆红素、溶血、血脂等影响，且与性别、年龄、体重、饮C(Cystatin C)因其分子量小，能自由通过肾小球滤过膜，几乎完食无关。Cystatin C相对分子质量低、等电点高，能自由地通过肾全被肾小管重吸收且不被分泌，能很好地替代血肌酐而成为一种小球滤过膜并在近曲小管上皮细胞重吸收和降解。由于cystatin 新的反映肾小球滤过率(GFR)的理想标志物4-5。在纵向比较时，4C的生成速度和血浓度稳定，不受其他病理变化影响，肾脏是其个不同的年龄段中除最低年龄段(014岁)，检测中的血清胱抑素惟一的滤过和代谢器官，因此其可

15、作为反映肾小球过率的一种理C和血清肌酐、尿素氮无论是在异常检出率和均值上都无很大区想的内源性标志物，当肾小球出现轻微损伤时血中cystatin C浓别，血清胱抑素C在低年龄段(014岁)检测中具有很好优势，而血度即可出现升高，并随着病情的加重而逐渐升高，所以cystatin C清肌酐与尿素氮由于小儿体重和代谢原因，不能真实反映早期肾被公认为是反映早期肾损害的敏感标志物之一2-3。损伤。在早期的研究中，胱氨酸蛋白酶抑制剂C浓度的测定只能通国内外对血清胱抑素C的参考值从出生到101岁之间年龄过放射免疫扩散方法，此方法非常耗时，需要至少1020h，并且CV范围的个体以及各种体液进行了研究，正常人血清

16、胱抑素C为值相当高(大约10%)。10年后发展了全自动的微粒子增强透射免疫比(0.960.20)mg/L，脐带血为(2.080.33)mg/L，婴儿(1个浊法和夹心酶免疫法，不仅快速而且精密度高，所以明显促进胱氨月)为(0.180.04)mg/L，12酸蛋白酶抑制剂C再临床常规实验的发展。透射免疫比浊法可在自个月为(0.720.29)mg/L。脑脊液为(5.3710.36)mg/L，唾动生化分析仪上进行，有准确、简便、快速的优点。颗粒增强透射免液为(1.220.67)mg/L，关节液为(1.270.41)mg/L，尿液为疫比浊法是以多克隆抗体为基础的改良免疫比浊分析法，利用碳二(0.110.1

17、25)mg/L。羊水中的浓度与血浆中的浓度接近，脑脊液亚胺反应将抗胱抑素C IgG共价结合到Intex颗粒上，与抗原结合浓度为血浆的56倍，精浆中浓度最高，平均为51mg/L6。形成的免疫复合物被聚乙二醇-6000沉淀，在340nm处比浊，与同血清胱抑素C应用中的不足，相对血清肌酐与尿素氮低廉的价样处理的标准液比较，计算标本中胱抑素C的含量。整个分析过程格，血清胱抑素C的价格是昂贵的，增加患者负担。从表2我们可以只需几分钟，可利用生化分析仪进行比浊测定，批内和批间CV分别看到血清胱抑素C最大测定值大多小于10mg/L，在中至重度肾损为0.9%和2.2%，回收率为98%，黄疸、溶血和脂血标本均不

18、受影响。伤的患者的检测结果中对患者肾损伤程度上的反映不如血清肌酐使cystain C在临床的广泛应用成为可能。与尿素氮明显。从方法学上颗粒增强透射免疫比浊法测血清胱抑白藜芦醇对高糖环境近端小管上皮细胞氧化应激的影响王兴红 李德恒摘要 目的 白藜芦醇对高糖诱导的近端小管上皮细胞(proximal tubule epithelial cells,PTEC)氧化应激的影响。方法 采用手工微分离法体外培养大鼠PTEC，行免疫细胞化学法鉴定细胞类型。将细胞分为正常对照组(NC)(DMEM培养基)、高糖组(25mmol/L)、白藜芦醇治疗组(高糖+Res组)，化学比色法测定各组PTEC还原型谷胱甘肽(re

19、duced glutathione hormone,GSH)水平和过氧化氢酶(catalase,CAT)活性。的一氧化氮(nitrogen monoxidum,NO)、过氧化氢(hydrogen peroxide,H2O2)、结果 高糖组NO和H2O2显著高于NC组(P0.01)；高糖+Res组NO和H2O2与高糖组比较明显降低(P0.05)；高糖组CAT活性和GSH水平显著低于NC组(P0.05)；高糖结论 白藜芦醇具有抑制氧化应激和增强抗氧化能力，+Res组CAT活性和GSH水平较高糖组明显升高(P0.05)，与NC组比较无明显差异。来发挥对糖尿病肾病(diabetic nephropat

20、hy,DN)的防治作用。关键词 白藜芦醇；近端小管上皮细胞；氧化应激Abstract Objective To observe the effect of Resveratrol on oxidative stress of rat proximal tubule epithelial cells (PTEC) under high concentration of glucose Methods PTEC were cultured with microdissected freehand and cells types identi ed by immunocy-tochemistry T

21、he cells were divided and cultivated in the following medium containing DMEM (control group),25mmol/L glucose,25mmol/L glucose and resveratrol respectively The level of NO, H2O2, GSH and CAT of PTEC was determined by chemical colorimetric method.Results The level of NO and H2O2 was signi cantly incr

22、eased in high glucose concentration group than that in control group(P0.01)however, the level was obviously decreased in low, 25mmol/L glucose and resveratrol and high glucose concentration group(P0.05)The activity of CAT and GSH was signi cantly decreased in high glucose concentration group than th

23、at in control group(P0.05); however, the activity was obviously increased,25mmol/L glucose and resveratrol and high glucose concentration group(P0.05) Conclusion Resveratrol can inhibit oxidatie stress and enhance oxidation resistance, to play the role in prevention and treatment of diabetic nephrop

24、athy.Key words Resveratrol; Proximal tubule epithelial cells; Oxidative stress糖尿病是我国中老年人常见的疾病，糖尿病肾病(diabetic nephropathy,DN)是糖尿病最为严重的并发症之一，也是临床上导致糖尿病患者死亡的主要原因之一。近年来随着对自由基氧化损伤的不断深入研究，证实氧化应激是糖尿病及并发症发生的主要病理生理机制之一1。应用抗氧化治疗，改善氧化应激可延缓糖尿病并发症的发展。白藜芦醇(Resveratrol，Res)是一种含有芪类结构非黄酮类多酚化合物，许多基础研究和临床观察均表明，白藜芦醇具有广

25、泛的药理作用2。本实验试图观察白藜芦醇对高糖诱导的近端小管上皮细胞(proximal tubule epithelial cells,PTEC)氧化应激的影响，进一步为白藜芦醇防治DN的临床应用提供理论依据。1 材料与方法1.1 实验材料作者单位:462002 漯河医学高等专科学校生理学教研室 (王兴红 李德恒)养，自由饮水，日常光照。1.2 原代近端小管上皮细胞的培养及鉴定 用手工微分离法分离大鼠单根近端小管，原代培养大鼠近端小管上皮细胞。将近端肾小管置入2mlDMEM培养液的培养瓶中，置于37 5%CO2的培养箱中原代培养，于第3天更换第1次培养液，78d细胞基本铺满瓶底。免疫细胞化学SABC法鉴定细胞。1.3 实验分组 用MTT法检测高糖和Res对细胞增殖的影响，由此选出高糖及药物浓度。PTEC生长至基本铺满瓶底，将