胃肠外营养添加精氨酸对结直肠癌术后患者细胞免疫功能的影响

1、胃肠外营养添加精氨酸对结直肠癌术后患者细胞免疫功能的影响         08-07-26 17:05:00     作者：刘新纯    编辑：studa20【摘要】  目的：探讨胃肠外营养(TPN)添加精氨酸(Arg)对结直肠癌患者术后淋巴细胞免疫功能的影响及临床意义。方法：对56例结直肠癌患者术后进行了TPN支持的前瞻性研究，检测无脂TPN、常规TPN和常规TPN中添加Arg营养支持前后患者外周血的T淋巴细胞亚群（CD4+

2、和CD8+T细胞亚群）和NK细胞百分比的变化以及外周血中IL2、IL4以及IFNr水平的变化。结果：无脂TPN、常规TPN支持前后患者外周血的CD4+T细胞、CD8+T细胞以及NK细胞水平无明显变化，IL2、IL4以及IFNr水平无明显变化；常规TPN中添加Arg营养支持后患者外周血的CD4+和NK细胞百分比明显增加，CD8+T细胞亚群明显减少，CD4/CD8比值也较术前明显升高，外周血中IL2、IL4以及IFNr水平明显增加。结论：常规TPN不能纠正结直肠癌患者术后的细胞免疫抑制状态，但TPN添加Arg则可促进CD4+的Th1细胞亚群和NK细胞增加，外周血IL2和IFNr生成增加，提示TPN

3、添加Arg对结直肠癌患者术后的细胞免疫有上调作用。 【关键词】  胃肠外营养 精氨酸 结直肠癌 免疫功能    The influence of total parenteral nutrition added with arginine on cellular immune function of colonic cancer after operation      Abstract  Objective:To explore the influence of total parentera

4、l nutrition(TPN) added with arginine on the cellular immune function of colonic cancer after radical operation.Methods: There were 56 cases of colonic cancer supported with TPN who were divided into 3 groups (TPN without fat, routine TPN and TPN added with arginine), whose data were designed and ana

5、lysed prospectively. The percent of T lymphocyte subpopulation and national killer cell (NK) in peripheral blood was detected, and so was the level of IL2, IL4 and IFNr in peripheral blood. Results: There was no marked change about CD4+ T cell, CD8+ T cell and NK in peripheral blood after TPN withou

6、t fat and routine TPN, and so was the level of IL2, IL4 and IFNr. After TPN added with arginine, there was significant increase of CD4+ T cell, the ratio of CD4+ T/CD8+T and NK in peripheral blood, and so was the level of IL2 and IFNr. On the contrast, the percent of CD8+ T cell and the level of IL4

7、 in peripheral blood decreased significantly after TPN added with arginine. Conclusion: Routine TPN can not correct the cell mediated immunity suppression after radical operation of colonic cancer. But TPN added with arginine can augment the percent of Th1 subpopulation and NK, and increase the leve

8、l of IL2 and IFNr in peripheral blood, which denote that arginine can upregulate the cell mediated immunity of colonic cancer after operation.    Key words   Total Parenteral Nutrition；Arginine；Colonic Cancer；Cell Mediated Immunity    精氨酸(arginine, Arg)是人体半必需的

9、二元氨基酸，同时Arg亦是一种具有免疫调节作用的小分子化学物质，具有内分泌促分泌功能1。另外，Arg可以在体内转换生成瓜氨酸和一氧化氮（NO），通过上述两个机制来发挥免疫上调作用2, 3。我们在结直肠癌患者术后的胃肠外营养(TPN)中添加Arg，观察其对淋巴细胞免疫功能的影响，现报告如下。    1  对象与方法    1.1  研究对象：选择2001年1月至2006年6月我院胃肠外科收治并经结肠镜及病理学证实的56例结直肠癌患者，其中结肠癌32例，直肠癌24例。男38例，女18例，年龄3177岁，平均(56.4&

10、#177;5.6)岁，中位年龄55.5岁。    1.2  入选标准：56例患者均符合下列条件而被纳入本研究：肝肾功能正常，无伴随代谢性、感染性和肠道炎性疾病；未用类固醇激素和免疫抑制剂；无肠道外恶性肿瘤性疾病以及无化疗放疗史；临床病理分期为期的结直肠癌。所有患者在随机抽签分组进入本研究前，均予以知情谈话并征得同意。    1.3  分组：56例患者随机分为3组(拆信封法)：组(n17)，使用无脂TPN；组（n18），使用含MCT/LCT(中/长链脂肪乳剂)的TPN；组：实验组，n21，使用含MCT/LCT和Arg

11、的TPN。3组患者在年龄、体重、术式及结直肠癌分期方面均相近，具可比性。组(空白对照组)：另随机选取年龄和性别相近的符合本研究入选标准的非免疫相关的胃肠道良性疾病患者共24例，测定其入院淋巴细胞免疫功能作为正常参照值。    1.4  静脉营养实验方法：3组患者术前均在医院固定膳食，于气管插管吸入加静脉复合麻醉下手术，术中经锁骨下静脉置放中心静脉留置导管。术后第1天经中心静脉留置管(44例)或经外周静脉(12例)行TPN支持治疗，共6 d。氮源为10%复方氨基酸(苏州，华瑞公司)；脂肪乳剂为10%和20% Lipofundin(Braun，德国)；糖为5

12、0%、10%和5%葡萄糖溶液；并补充足够维生素、电解质和微量元素，能量和氮量均按营养计算尺计算，热卡为125146 J/kg·d，氮为0.200.25 g/kg·d，脂肪乳剂占非蛋白热卡的35%40%4。LArg由上海生物化学制药厂提供，Arg为25 g/d。以上营养制剂以“全合一”方式混合于三升袋中，16 h内输完。分别于手术前1 d和术后TPN结束后第2天取患者外周空腹静脉血进行免疫检测。    1.5  检测指标和操作方法    无菌取静脉学2 mL，肝素抗凝处理，600 rpm离心10 min，弃

13、上清，细胞团内培养液少于25 L。加入FITC或PE标记的CD80、CD86和CD11c等表面分子的单克隆抗体15 L，混合均匀，4下避光反应30 min。PBS洗涤2次后，弃上清，加入1 mL的1%甲醛，固定30 min。加样枪将荧光标记抗体结合的细胞加入BeckmanCoulter流式细胞仪的检测孔内，检测淋巴细胞CD4、CD8和CD11c等表面分子的表达以了解外周血内淋巴细胞的比例变化情况5。数据以表达率的95%可信区间作为衡量表达情况的标准。    外周血予以5000 rpm离心10 min后，吸取上清，4冰箱保存备检。用俘获抗体包被96孔板，4孵化过夜。

14、吸干孔内液体，每孔加300 L洗涤液，共洗涤3次。每孔加200 L的Assay Diluent封闭，室温下孵化1 h。吸干封闭液后洗涤板孔。除空白孔外，分别将不同浓度（2倍连续稀释）标准品、待测血清加入相应的反应孔中（100 L/孔），每个标本设3个复孔。用封板胶纸封住反应孔，置37孵箱孵育2 d。重复吸干、洗涤板孔5次。除空白孔外，每孔加入抗体工作液100 L，用封板胶纸封住反应孔，置室温孵育1 h。重复吸干、洗涤板孔5次。除空白孔外，每孔加入酶结合物工作液100 L，用封板胶纸封住反应孔，置室温下孵箱孵育30 min。重复吸干、洗涤板孔7次。每孔加底物溶液100 L，室温下孵箱孵育15 m

15、in。每孔加终止液50 L。反应完毕后，即刻在酶标仪上读取样本孔及标准品孔的OD450nm值和OD570nm值，以二者差值和对应的细胞因子浓度的常用对数值，分别作纵、横坐标，绘制标准曲线，从标准曲线求出样本的细胞因子浓度6。    1.6  统计学处理    3组患者以及一组非结直肠癌住院患者的计量资料的描述采用均数±标准差（±s），组间均数比较应用独立t检验进行比较，予以t检验，计数资料采用单因素方差分析进行统计学比较，设定为0.05。所有数据均在计算机SPSS10.0统计软件上进行运算。 &

16、#160;  2  结  果    2.1  一般情况：56例结直肠癌患者均成功地实施了结直肠癌根治术，其中行右半结肠癌根治术21例，左半结肠癌根治术17例，Dixon术18例。1例Dixon术后吻合口漏，保守治疗后自愈，1例右半结肠癌根治术后发生切口感染，引流后二期愈合，术中及术后无其它并发症发生。常规行TPN监测，未发生代谢及导管并发症。6例患者术中输血治疗，输浓缩红细胞量均少于200 mL。    2.2  T淋巴细胞亚群变化：见表1。    经单因

17、素方差分析，各组患者的CD4、CD8、CD4/CD8以及NK变化存在统计学差异（t2.96，P0.05）。    患者、组患者手术TPN后CD4、CD4/CD8、NK水平均较术前有所下降，但经配对t检验，下降无统计学差异（t1.50，P0.05）；、组患者手术TPN后CD8水平较术前无明显变化（t1.24，P0.05）；经配对t检验，组患者的CD4水平增加，增加存在统计学差异(t3.06，P0.05)，CD4/CD8比值也较术前明显升高(t2.32，P0.05)，NK百分比升高未达到统计学意义（t1.12，P0.05）。    与组相

18、比，、以及组的术前CD4和NK水平均降低，经单因素方差分析，存在统计学差异(t2.42，P0.05)；组以及组患者TPN后CD4和NK水平仍低于组结果(t2.65，P0.05)，组患者TPN后CD4和NK水平和组相比，无明显统计学差异(t1.64，P0.05)。表1  4组患者淋巴细胞亚群变化 注：*和术前相比较，P0.05；*和组及组手术+TPN前后相比较，P0.05    2.3  外周血IL2、IL4以及IFNr水平变化：见表2。    经单因素方差分析，各组患者外周血IL2、IL4以及IFNr水平变化存在统计学差异（t2.59，P0.05）。    患者、组患者外周血IL2、IL4以及IFNr水平在TPN前后比较未发现明显变化，经配对t检验，变化无统计学差异（t1.15，P0.05）；组患者的外周血IL2与IFNr水平在