高效液相色谱法测定食品中甾体激素残留量的方法研究

1、高效液相色谱法测定食品中甾体激素残留量的方法研究中国进口食品卫生监督检验中心(广州510405陈永红广东药学院营养与食品卫生教研室叶蔚云保健饮料中可能添加某些激素,或由于生产工艺的原因致某些天然激素残留。我国和日本、美国等国家,均规定食品中不得检出甾体激素。因此,食品中甾体激素残留的分析检测具有重要意义。甾体激素分析采用的方法有比色法1、薄层层析法(TLC2、气相色谱法(GC3、高效液相色谱法4、气相色谱2质谱法5、高效液相色谱法6以及免疫分析法等7。本文对用高效液相色谱法同时测定肉类、奶粉及保健饮料中10种甾体激素残留量的方法进行了研究。现将结果报道如下。1实验部分1.1仪器PE高效液相色谱

2、仪、200泵、235C二极管陈列检测器,Turbochrom软件。1.2试剂10种激素标准品分别购自Sigma、MERCK 和中国药品生物制品检定所;2葡萄糖醛酸苷酶(Sigma Chemical Co;其余试剂均为分析纯;水为去离子重蒸水;激素标准贮备液:精密称取各激素标准品10mg,甲醇溶解,定容于10ml容量瓶中,于4冰箱保存;3%氯化钠;20mmol/L磷酸盐缓冲液(p H6.8;配制流动相所用溶剂均通过0.45m滤膜过滤,超声波脱气或氦气脱气。1.3实验方法2.5、5、12.5、25、37.5、50g/ml,其余激素浓度分别为0.5、1、2.5、5、7.5、10g/ml,各取10l进

3、样分析,每点测定3次,根据各激素平均峰面积A(VS与其相应浓度C(g/ml进行线性回归,分别计算10种激素的线性回归方程,并绘制标准曲线。2结果与讨论2.1色谱条件的选择(1流动相:利用甲醇、乙腈、水、磷酸盐缓冲液、四氢呋喃等不同溶剂,及不同配比的多种溶剂体系进行了一系列的预实验,并进行了等度洗脱和梯度洗脱的研究,结果表明,其最佳溶剂体系为甲醇-水二元二级梯度洗脱,流动相比例变化如前所述。(2检测波长:根据文献资料8可知,雌三醇、雌二醇、醋酸氯地孕酮和戊酸雌二醇的最大吸收波长为280nm,其余激素最大吸收波长在245254nm范围内,故本文采用双通道分析,A通道选择245nm,B通道选择280

4、nm,以满足最大吸收波长不同的多种激素的同量分离测定。2.2样品的预处理文献报道,甲醇广泛用于从动物源食品中提取甾体激素,本文利用甲醇提取肉制品、奶粉中的游离甾体激素,然后加入中性盐,使甾体激素的相对极性减弱,再用乙醚提取,此法较国标中采用单纯甲醇提取的方法提取效率更高,且杂质干扰较少。动物组织中的甾体激素有些是以结合型存在,需要水解才能准确定量,故本文采用2葡萄糖醛酸苷酶(内含少量芳基硫酸酯酶55水解3h,以测定肉制品、奶粉中的激素总量。2.3标准曲线10种激素的线性回归方程及相关系数如下:(1雌三醇A=1694.384+12253.07C,r=0. 9998;(2雌二醇A=-3123.32

5、1+16345.49C,r=0. 9998;(3醋酸氯地孕酮A=-2301.922+30049. 75C,r=0.9998;(4戊酸雌二醇A=164421.8+ 17317.67C,r=0.9999;(5甲基睾酮A=1361.946+ 157683.1C,r=0.9999;(6左旋甲基炔诺酮A= 5148.301+152905.7C,r=0.9999;(7黄体酮A= 2595.695+149736.2C,r=0.9998;(8丙酸睾酮A= 10916.15+134417C,r=0.9997;(9已烯雌酚A= 124.925+118972.5C,r=0.9997;(10安宫黄体酮A =-1473

6、.88+101268.3C,r=0.9999。2.4最低检出浓度和最低检出量在本法HPLC条件下,将激素标准液进行连续稀释后进样,据2倍噪声的峰响应值和称样量计算出最低检出浓度和最低检出量。结果表明,肉及肉制品中10种激素的最低检出浓度为.00650.0855g/g,最低检出量为0.324. 28ng;奶粉中激素的最低检出浓度为0.00530. 0627g/g,最低检出量为0.263.14ng;保健饮料中激素的最低检出浓度为0.00320.0427g/ml,最低检出量为0.030.43ng。2.5回收试验和精密度试验在牛肉、奶粉和保健饮料中分别添加一定量的激素标准,测定其回收率,重复测定7次,

7、计算其变异系数。结果表明,10种激素在牛肉中的回收率为86.1%97.2%,相对标准偏差为1. 6%7.8%;奶粉中的回收率为80.5%93.3%,相对标准偏差为1.8%5.1%;保健饮料中的回收率为85. 1%98.3%,相对标准偏差为1.5%7.2%。参考文献1.G oldzieher J W,et al.Fluorescence and absorption spectra ofsome corticosteroids in sulfuric and phosphoric acids.Anal Chem1958;30:9622.Lamparczyk H,et al.Separation

8、of steroid by reversed2phaseHPTLC using binary mobile phases.J Planar Chromatogr2 Mod.TLC1990;3(1-2:343.Degen PH,et al.Determination of42hydroxyandrostenedionein plasma and urine by extractive alkylation and electron2cap2 ture gas chromatography.J Chromatogr Biomed Appl1991;565:67公共卫生学报1995;14(6:372

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10、.Radioimmuno2assay of322hydroxy2522preg2nan2202one in rat and human plasma.Steroids1990;55(7: 290(1997203210收稿1997204228修回任旭红编辑务川仡佬族苗族自治县中小学生近视现状调查与分析贵州省务川县卫生防疫站(563400杨兴万雷正祥为掌握我县仡佬族、苗族中小学生的近视患病情况和近视程度,我们于1996年10月26日至11月6日对我县环城中小学的1895名学生进行了调查。现将结果报告如下。结果与分析学生1895人,检查眼数3790只,视力不良136人,211只眼,视力不良率为7.17%。视力不良率随学习阶段的上升比重逐渐增高,其中,小学阶段视力不良率为6.23%,初中阶段为7.0%,高中阶段视力不良率为10.64%,各阶段视力不良率相比差别有显著意义(2=7.03P<0.05。本次调查男生1091人,视力不良75人,视力不良率为6.87%;女生804人,视力不良61人,视力不良率为7.58%,男女学生视力不良率差别无显著意义(2=0.35P>0.05。仡佬族、苗族、土家族学生1464人,视力不良87人,视力不良率5.94%;汉族学生431人,视力不良49人,视力不良率为1