发酵液溶磷含量测定

1、编号共 4 页制订人制订日期审核人审核日期批准人批准日期颁发部门质量管理部实施日期发酵液溶磷含量测定SOP 一、 目的： 制订发酵液溶磷含量测定标准操作规程，确保发酵液中溶磷含量检测的准确。二、 适用范围：适用于公司发酵液溶磷含量的检验。三、 责任者：质量检验部QC操作人员四、内容：1、原理：正磷酸盐在酸性溶液中与钼酸铵反应生成磷钼酸铵，再用抗坏血酸使之还原成低价的钼蓝，此蓝色溶液符合比尔定律。2、 仪器：电子分析天平 分光光度计 恒温水浴埚 容量瓶 刻度吸管3、磷标准溶液配置取一定量KH2PO4(A.R)置于称量瓶内，在105干燥至恒重，精密称取0.439克，加水溶解，加入1mL硫酸，于10

2、0mL容量瓶中定容至刻度，摇匀，即得1mg/mL磷标准溶液。有效期10天。准确吸取上述磷标准溶液1mL于100mL容量瓶中，用水定容至刻度，摇匀，即得 10ug/mL磷标准溶液。此标准溶液现配现用。4、定磷试剂配制：将下述溶液3mol/L硫酸、水、2.5%钼酸铵、10%抗坏血酸按体积比1211的比例混匀即得。现配现用。5、绘制磷标准曲线取7支试管，分别按下表加入各试剂，充分摇匀，45水浴20分钟，冷却至室温，按照分光光度计校准使用SOP在660nm波长下测量其OD值。以溶液磷含量为纵坐标，OD值为横坐标，绘制标准曲线，得到回归方程。管号012345610ug/mL磷标准溶液（mL）00.51.

3、01.52.02.53.0溶液磷含量（ug）051015202530水（mL）3.02.52.01.51.00.50定磷试剂（mL）3.03.03.03.03.03.03.0线性回归系数0.9996、样品磷含量检测取发酵液离心后上清液0.1mL，至试管中，加2.9 mL水，再加入定磷试剂3mL，振摇，于45水浴20分钟，冷却至室温，以空白做对照，按照分光光度计校准使用SOP于660波长测OD 值。5计算：根据磷标准曲线以及稀释倍数计算磷含量(ug/mL)。五、文件发放范围公司生物产业部质量管理部1份，质量检验部2份，产业部相关领导每人1份，存档2份。 六、变更记录：上版文件编号上版文件实施日期

4、本次变更原因、依据及详细变更内容SL-QAD-248-00采用新版格式和编号，增加文件修订内容SLB-QC-010-01增加了定磷试剂的配制、标定方法、标定记录，规定了定磷试剂的有效期磷标准曲线绘制记录批号： 编号：SLB-QC-010-02R1磷标准溶液配制：（天平编号： ）精密称取0.439克于105干燥至恒重的磷酸二氢钾，加水溶解，加入1mL硫酸，于100mL容量瓶中定容至刻度，摇匀，即得1mg/mL磷标准溶液。有效期10天。配制人： 配制日期： 年 月 日准确吸取上述磷标准溶液1mL于100mL容量瓶中，用水定容至刻度，摇匀，即得 10ug/mL磷标准溶液。现配现用。配制人： 配制日期

5、： 年 月 日定磷试剂配制：将下述溶液3mol/L硫酸、水、2.5%钼酸铵、10%抗坏血酸按体积比1211的比例混匀即得。现配现用。试剂取用数量:3mol/L硫酸水2.5%钼酸铵10%抗坏血酸配制人： 配制日期： 年 月 日磷标准曲线的绘制：（分光光度计编号： ）取7支试管，分别按下表加入各试剂，充分摇匀，45水浴20分钟，冷却至室温，于660nm波长处分别测溶液OD值。以溶液磷含量为纵坐标，OD值为横坐标，绘制标准曲线，得到回归方程。管号012345610ug/mL磷标准溶液（mL）00.51.01.52.02.53.0水（mL）3.02.52.01.51.00.50定磷试剂（mL）3.03.03.03.03.03.03.0测得溶液OD值为：管号0123456溶液磷含量（ug）051015202530OD值线性回归方程（磷标准曲线）为：线性回归系数应0.999 线性回归系数为： 符合规定 不符合规定标定人： 标定日期： 年 月 日 复核人： 日期： 年 月 日发酵液溶磷检验记录 编号：SLB-QC-010-02R2品名：批号：操作步骤：取发酵液离心上清液0.1mL至试管中，加2.9 mL水，加定磷试剂3mL，振摇，于45水浴20分钟，冷却至室温，以空白做对照，按照分光光度计校准使用SOP于