临床检验基础

1、临床检验基础Clinical Laboratory Base课程编号：J6500M003课程类别：专业课程实验课性质：非独立设课适用专业：医学检验实验学时：先修课程：临床检验基础实验指导书：吴晓蔓主编的临床检验基础实验指导，由人民卫生出版社于2007年出版。开课实验室名称及地点：临床医学实验中心，实验教学楼6号楼。一、实验教学目的和基本要求 临床检验基础是临床检验医学的专业课之一，它是通过实验的各种方法包括感官检查，理学检查，化学检查，显微镜检查以及自动化仪器检查等手段，对病人的血液，体液，分泌物和排泄物等标本进行检验、分析以获取病原，病理变化及脏器功能状态等资料的学科。因此，临床检验基础的实

2、验课在临床检验基础的教学中显得非常重要，其目的主要在于通过实验进一步巩固学生的理论知识，提高学生临床检验基础的基本操作技术，培养学生对临床检验的严肃态度和实事求是的工作作风。实验教学的基本要求是让学生掌握实验的目的，原理，了解实验的器材，标本采集，操作过程及注意事项，除必要的示教外大多实验要求学生在规定的时间内完成，并写出符合要求的实验报告。二、实验课程内容和学时分配（见附表）实验课程内容和学时分配实验项目序 号实验项目名称实验内容学时分配实验属性实验类型每组人数实验要求每组主要消耗材料名称、数量、消耗额实验一血液标本的采集和血涂片的制备 1、血液的采集2血液涂片的制备3专业类验证性2必做玻片

3、、瑞氏染色液实验二血液的一般检验1器材、试剂的准备。2RBC、WBC、WBC分类、PLT计数实验室操作。3RBC、WBC、WBC分类PLT、计数结果换算。3专业类验证性2必做血小板稀释液牛鲍氏计数板实验三血栓与止血的一般检验l器材、试剂的准备2PT试管法实验操作3、APTT测定试管法的实验操作4、报告方式3专业类验证性2选做PT、APTT试剂盒 实验四尿液生成和标本的采集及处理l器材、试剂的准备2、防腐处理3专业类验证性2选做防腐试剂、尿杯实验五尿液理学检查和化学检查1器材、试剂的准备。2尿液外观、酸碱度、比密、尿渗量测定的实验过程。3尿液理化检查的报告方式。3专业类综合性2选做酸度计、比密计

4、及渗透压计实验六尿沉渣检查 1器材、试剂的准备。2尿沉渣非染色法、染色法检查的实验过程。3尿沉渣检查的报告方式。 3专业类验证性2必做玻片、生理盐水实验七尿液分析仪及其临床应用1器材、试剂的准备。2尿液干化学分析仪测定的实验过程和注意事项。3测定结果的分析与判断。3专业类综合性2必做尿液干化学分析仪配套尿试剂条实验八脑脊液检验1器材、试剂的准备。2脑脊液理学检查和用显微镜进行细胞计数和分类检查的实验过程。3脑脊液检查的报告方式。3专业类验证性2必做试管、玻片实验九浆膜腔积液检验 及病理分析1器材、试剂的准备。2浆膜腔积液的理学检查和显微镜检查的实验过程。3浆膜腔积液蛋白定性试验(李凡他试验)的

5、实验操作。4浆膜腔积液检查的报告形式。3专业类综合性2必做试管、玻片、量筒实验十粪便检验1器材、试剂的准备。 2粪便理学检查和显微镜检查的实验过程。3粪便隐血试验(邻一联甲苯胺法)的方法及评价、单克隆抗体金标法的测定方法。3专业类验证性2必做试管、玻片、邻一联甲苯胺、单克隆抗体金标试条实验十一生殖系统分泌物检验1器材、试剂的准备。2阴道分泌物检查理学检查和显微镜检查的实验方法。3精子形态检查4、前列腺液检查中理学检查和显微镜检查的实验方法3专业类验证性2必做试管、玻片实验十二脱落细胞检验基本知识、检验技术及临床应用1阴道脱落细胞检查2浆膜腔积液脱落细胞检查3、病理细胞与正常细胞显微镜检查3专业

6、类综合性2选做试管、玻片实验十三各系统脱落细胞检查细针吸取细胞学检查1阴道脱落细胞检查2浆膜腔积液脱落细胞检查3理学检查和显微镜检查的实验方法3专业类验证性2选做试管、玻片实验十四血型与输血检验 1器材、试剂的准备。2试管法ABO血型的鉴定(正定型)。3试管法ABO血型的鉴定(反定型法)。3专业类验证性2必做试管、玻片、抗A、B血清实验十五尿蛋白定性检查 1器材、试剂的准备。2磺基水杨酸法测定尿蛋白的实验过程和加热乙酸法测定尿蛋白的过程。3干扰因素的控制与分析。3专业类综合性2必做试管、磺基水杨酸、冰醋酸、尿干化学试剂条实验十六标本存放时间对血细胞分析结果的影响1实验设计。2对RBC检验的影响

7、。3对WBC检验的影响。4对血小板检验的影响3专业类设计性2选做血细胞分析仪配套试剂、瑞氏染色液等三、考试方法及成绩评定方法： 1、考试方法： （1）实验带教老师对实验报告进行评分； （2）操作技能考试； 2、成绩评定方法： （1）实验操作技能占70%； （2）平时表现占10%； （3）实验报告占20%；四、适用专业及年级：适用于医学检验专业五、主要仪器设备：牛鲍氏计数板、显微镜、血细胞分析仪、血凝仪、酸度计、721分光光度计、尿干化学分析仪、比密计、量筒。六、说明：本大纲是在上版大纲的基础上根椐2008培养方案修改。制定人：万腊根 审核人： 王小中临床检验基础（Clinical Labora

8、tory Base）课程编码： J6500M003 实验指导书：临床检验基础实验指导面向专业： 医学检验综合性实验项目名称血细胞分析仪间的比对 【实验目的】掌握血细胞分析仪间的方法对比试验的程序、结果判断。 【实验原理】根据NCCLSEP9A文件的要求对一组病人样品用新的检测系统与参考检测系统（原有的检测系统或公认的参考检测系统），同时进行分析测定，再用各种统计学方法或要求，计算出新的检测系统的系统误差。【实验器材】血细胞分析仪（两台以上）及配套试剂，新鲜EDTA抗凝血标本8×5份【操作步骤】每天应测定8份标本，每份标本都用两个检测系统进行双份测定，至少连续测定5d，共40份标本，测

9、定时先对样本排序，按顺序1至8测定第一次，再按8至1测定第二次，再按下表收集各检测项目（WBC、RBC、HGB、PLT、HcT）试验数据。表： 方法学比较试验数据记录表标本号新的检测系统参考检测系统Yi-XiYi1Yi2YiYi1-Yi2Xi1Xi2XiXi1-Xi212345:37383940平均值DYDXE表中： Yi1=Yi2=Yi=Yi1Yi2=Xi1=Xi2=Xi=Xi1Xi2=YiXi=DY=DX=E=新的检测系统第i个标本第1批次测定结果新的检测系统第i个标本第2批次测定结果新的检测系统第i个标本平均值新的检测系统第i个标本第1批次测定结果减第二批次测定结果参考检测系统第i个标本

10、第1批次测定结果参考检测系统第i个标本第2批次测定结果参考检测系统第i个标本的平均值参考检测系统第i个标本第1批次测定结果减第2批次测定结果两个检测系统第i个标本两次测定均值的差值为新的检测系统成对结果差值的均值为参考检测系统成对结果差值的均值两个检测系统计算出的差值均值的均值（DY+DX/2）3、离群点的判断（1）一般的判断方法：以参考检测系统所得结果为横坐标，新的检测系统所得结果为纵坐标，将两个检测系统测定结果及时绘于座标纸上，及时检查结果，各点的连结应该是一条直线，如出现明显的离群点，即出现明显的系统误差应查找原因，重新检测数据。（2）NCCLSEP9-A文件的判断标准：若两个检测系统存

11、在差值，则有Yi1Yi2，Xi1Xi2或YiXi超出限值：4XDY、4XDX或4XE时则视为离群点，在全部40个数据中可排除一个离群点，若离群点多于一个，则应增加8个实验数据。4、相关回归分析（1）计算回归方程和相关系数，将两个检测系统所得到的数据用数学方法求出一直线回归方程Y=bX+a和计算出相关系数r。X为参考检测系统的检测结果Y为新的检测系统的检测结果a为回归线的截距，代表恒定系统误差b为回归系数，代表比例系数误差r为两个检测系统的相关程度，可用于检验X取值范围是否适当，一般要求r大于或等于（或r2大于或等于），则认为X范围是合适的，若r小于，应再多做实验，扩大数据范围。（2）计算系统误

12、差和随机误差当时可利用回归方程计算出新的检测系统的系统误差和随机误差。在检测系统对比试验中，经数理统计得出的直线回归方程为：Y=bX+a，理想的斜率b=1，截距a=0，这时Y=X，两个检测系统的检测结果完全吻合，回归线为通过原点的直线。如a0，b1时，表示新的检测系统相对于参考检测系统存在系统误差，通过回归方程可以计算任意一点（或任意浓度）的系统误差，但临床上在医学决定水平处的浓度（Xc）系统误差最有意义，因此对应于Xc的系统误差计算：Yc=bXc+aSE=YcXc=（b1）Xc+a若SEEa则该新的检测系统在评价的某个范围内（Xc范围内）可以用于临床实验室。通过回归方程求了Y值与新的检测系统

13、在实际测定值Y间有一定的差异，但可以用回归线的标准差，表示实测值Y在回归线周围的分布情况称为回归线标准误，以SY/X表示，它可以定量表示组成回归线各点的离散程度即随机误差。RE=SY/X表：美国CLIA，88能力验证计划的血细胞分析项目的允许总误差检验项目可接受范围RBCHCTHGBWBCPLTT±6%T±6%T±7%T±15%T±25%【临床意义】1. 临床实验室引用一个新的检测系统对病人标本检测前必须对其正确度进行评价，确定其系统误差在允许误差范围之内，才能应用于临床。2. 同一实验室有两台以上检测相同项目的仪器，在应用于临床前必须做比对试

14、验以确保不同仪器间的相同项目的结果具有一致性。【注意事项】1.样品中分析物的浓度应包括在常规工作中可能遇到的整个分析范围（一定要有包括医学决定水平浓度的样品）。2.浓度值超出参考范围的样品最好要超过总样本的一半。综合性实验项目名称 尿蛋白定性检验实验项目学时：3学时 实验要求： 必修 选修 一、实验目的及要求：掌握尿蛋白定性检验的各种方法及各种检验方法的特性二、实验基本原理：1、磺基水杨酸法：生物碱试剂磺基水杨酸在酸性条件下与蛋白质氨基酸阳离子结合，形成不溶性肉眼可见的蛋白盐沉淀。2、加热醋酸法：蛋白质加热后变性，加稀醋酸后使尿液PH值达到蛋白质的等电点，使得变性凝固的蛋白质形成肉眼可见的白色

15、沉淀。3、PH指标剂蛋白误差法：尿干化学试剂模块中主要含有酸碱指示剂溴酚蓝、缓冲剂，在PH3.2时带负电荷，可与尿中白蛋白结合生成复合物，导致溴酚蓝进一步电离产生更多的H+，当超过一定缓冲范围时，指示剂发生颜色改变，变色程度与蛋白质含量相关。三、主要仪器设备及实验耗材：1、尿干化学分析仪；2、试管3、吸管4、酒精灯5、试剂：尿干化学试条、冰醋酸、磺基水杨酸。四、实验内容或步骤：1、标本：准备4个尿液标本，1号标本不含尿蛋白；2号尿标本含微量尿蛋白（0.050.1g/L）；3号尿标本蛋白含量高（1g/L）；4号尿标本仅含球蛋白。2、按照临床检验基础实验指导分别用三种方法对4个尿标本进行检验，结检

16、验的结果进行记录3、对三种方法对上述四种标本进行检验的结果进行比较分析，得出各实验方法的分析灵敏度和特异性五、思考题1、不同的实验方法测定的结果有什么不同？2、通过对不同的实验方法结果进行分析，各实验方法的分析灵敏度和特异性？六、主要参考书1、临床检验基础实验指导，吴晓蔓主编，人民卫生出版社于2007年出版。2、临床检验基础，熊立凡主编，人民卫生出版社于2007年出版。设计性实验项目名称 标本存放时间对血细胞分析结果的影响实验项目学时：3学时 实验要求： 必修 选修 一、实验目的及要求：了解全血标本存放时间对血细胞分析仪测定红细胞、白细胞和血小板各参数测定结果的影响探讨二、主要仪器设备 1、血

17、细胞分析仪； 2、显微镜； 3、牛鲍氏计数板； 4、玻片、试管、吸管等。 5、试剂：血细胞分析仪配套试剂、瑞氏染液等。见表临床检验基础修订 论证意见表专 家姓 名桂炳东、万腊根、王 伶郑晓丰、李俊明、谭立明论证时间2009年5月12日论证意见： 临床检验基础是临床检验医学的专业课之一，其实验课在临床检验基础的教学中显得非常重要，其目的主要在于通过实验进一步巩固学生的理论知识，提高学生临床检验基础的基本操作技术，培养学生对临床检验的严肃态度和实事求是的工作作风。实验教学的基本要求是让学生掌握实验的目的，原理，了解实验的器材，标本采集，操作过程及注意事项，除必要的示教外大多实验要求学生在规定的时间

18、内完成，并写出符合要求的实验报告。经专家组讨论，一致认为本大纲的修订是按照临床检验基础教学计划为依据，从医学检验人才的培养目标出发，体现创新教育观念、改革精神和素质教育的思想，吸收本学科专业的新知识、新内容和课程体系改革研究成果，注重本课程内容的有机衔接及教学方法与手段的改革。最大限度的利用现有的实验设备条件，通过对实验课程内容的调整与整合，开发新的实验内容，设置综合性、设计性实验，使有综合性、设计性实验的课程数达到培养学生的要求，实验内容更新率达到30%以上。按照本大纲的要求可在教学中贯彻循序渐进和理论联系实际的原则，选择有代表性的教学内容，以实验操作和示教讨论为主，还包括一些综合性、设计实

19、验等，有利于加深学生的感性认识，使学生掌握临床检验基础的基本操作技术，培养学生对临床检验的严肃态度和实事求是的工作作风。同意实施。 组长签名： 年 月 日学院审核意见： 公章： 年 月 日教务处意见：年 月 日附件4： 综合性实验项目论证意见表实验课程名称临床检验基础实验项目名称血细胞分析仪间的比对试验专 家 姓 名桂炳东、万腊根、王伶、郑晓丰、李俊明、谭立明论证时间2009年5月12日论证意见： “血细胞分析仪间的比对试验”通过对血细胞分析的样品采集、样品检验和不同血细胞分析仪间检验结果的比对和统计分析，使学生系统全面地掌握血细胞分析仪的评估方法。该实验内容具有一定的复合性；实验方法具有多元性；实验手段多样。该实验有利于学生动手能力、主动性的培养。经专家组讨论，“血细胞分析仪间的比对试验”达到了综合性实验的基本要求。同意列为综合性实验。 组长签名： 年 月 日学院审核意见： 公章： 年 月 日教务处意见：年 月 日附件4： 综合性实验项目论证意见表实验课程名称临床检验基础实验项目名称尿蛋白定性检验专 家 姓 名桂炳东、万腊根、王伶、郑晓丰、李俊明、谭立明论证时间2009年5月1