饲料中基本营养成分测定标准

1、实际上, 100多年来世界各国一直沿用的是由德国科学家 Hennberg 和 Stohman 所创立 的 Weende 饲料分析体系。 该分析体系是把饲料分成 6种组分来分析测定:水分 (干物质 ; 粗灰分 (矿物质 ;粗蛋白 (N x 6. 25 ; 粗脂肪 (乙醚浸出物 粗纤维;无氮浸出 物 (NFE,计算值 。这种饲料分析体系显然是饲料的概略分析 (Feed Proximate Analysis , 但也是最基本的饲料成分分析。按照 GB10648-1999 饲料标签的规定:蛋白质饲料、配合 饲料、 浓缩饲料和复合顶混料等饲料都要把水分、 粗蛋白、 粗纤维和粗灰分做为保证值项目 进行标注

2、。 饲料组成成分的分析对饲料组成成分的分析是研究营养物质的利用,评价饲料营养价值最基础的工作。 饲料中最重要的营养物质有碳水化合物、蛋白质、脂类、矿物质和维生素。概略养分 分析法把饲料组成成分分为水分、粗灰分、粗蛋白质(CP 、粗脂肪或乙醚浸出物(EE 、 粗纤维(CF 和无氮浸出物(NEF 。(一 水分饲料中的水分有两种存在形式,游离水和结合水。饲料分析中经常测定总水分,采用 干燥失重的方法。 对于不同饲料, 干燥的方法应考虑其理化性质而有所区别。 尽管饲料中的 水分营养价值不大, 但是测定饲料中的水分可得出饲料干物质的含量, 这与饲料的能量含量 密切相关,因此水分的测定意义重大。本方法依据

3、 GB6435 86 饲料中水分的测定, 它适用于配合饲料和单一饲料水分含量 的测定,但不适用于做饲料的奶制品、动植物油中的水分测定。1. 方法原理试样在 (105±2 烘箱内和常压条件下烘干至恒重的质量为水分。2. 仪器设备(1植物样品粉碎机或研钵;(2试验筛:孔径 0.42mm (40目(3分析天平:分度值 0. 0001g ;(4称量皿:玻璃或铝质,直径 40mm 、高 25mm(5电热式恒温烘箱:控制±2;(6干燥器:变色硅胶干燥剂(1选取有代表性的原始样品不少于 1000g 。 按四分法缩分到 250g , 风干或以 60烘干, 用植物样品粉碎机碾细,过 0.42

4、mm 试验筛 (注意一定要将样品全部过筛,并混合均匀 。封 入样品袋,放在阴凉处保存,以备测定。(2如果饲料样品是含多汁的鲜样,如青贮、牧草等,无法直接粉碎,应进行预干燥处 理:称取 200-300g(准确至 0.01g 鲜样,在 105烘箱中烘杀 15min ,立即把温度降至 65, 烘 6-8h ,取出,在空气中冷却 4h ,称量。失重即初水分 w 0(H 20 。将得到的烘干样,粉碎, 过筛,装袋,以备测定。4测定步骤(1将称量皿洗净, 在 (105±2 烘箱内烘干 1 2h , 取出在干燥器内冷却 30min , 用分 析天平称量。再放入烘箱烘干 30min ,冷却,称量,直

5、至两次称量之差小于 0. 0005g 为恒 重。(2用分析天平称取 2-5g 样品, 均匀平摊在已恒重的称量皿中, 厚度小于 0. 5cm 。 不盖 称量皿盖,在 (105±2 恒温烘箱内烘干 2 4h 。取出,盖上称量皿盖,放在干燥器内冷却 30min ,称量,同样再烘 1h ,冷却、称量。直至两次称量之差小于 0. 002g 为恒重。(1饲料中水分含量按公式 (3 1 计算 式中:W(H2O 饲料中水分的质量分数,%;m 1 105烘干前试样和称量皿总质量,m 2一 105烘干后试样和称量皿总质量,m 0 105烘干的称量皿质量, g 。(2每个试样应取两个平行样测定,以算术平均

6、值为测定结果。两个平行样的相对误差应 小于 0.2%。(二 粗灰分粗灰分是饲料中有机物被全部氧化除去后剩余的残渣,主要为矿物质氧化物和盐类等 无机物质。粗灰分的测定方法为高温灼烧法,即将饲料样品放入别 550±5的高温电炉 中灼烧, 至灰白色, 称残渣的重量。 测定饲料中的粗灰分含量, 对评定饲料矿物质营养价值 意义不大。(三 粗蛋白质饲料中的一切合氮物质的总称为粗蛋白质,用饲料中的含氮量乘以 6.25进行计算。粗 蛋白质包括真蛋白质 (TP和非蛋白质性含氮化合物。饲料总氮中的非蛋白氮 (NPN部分对 水产动物几乎无用, 评定饲料蛋白质营养价值有时需要对饲料中真蛋白质进行分析, 如虾

7、粉 中含有大量的几丁质氮。本方法依据 GB /T6432 94饲料中粗蛋白测定方法,适用于配合饲料、浓缩饲料和单 一饲料中粗蛋白的测定。1原理凯氏法测定试样蛋白质含量,是在催化剂作用下用浓硫酸将含氮化合物转化为硫酸铵, 将生成的硫酸铵在强碱性条件下馏出氨, 经硼酸溶液吸收, 再用标准酸溶液滴定, 将测得的 氮含量乘以换算系数 6. 25,即粗蛋白的含量。2仪器设备(1植物样品粉碎机或研钵。(2试验筛:孔径 0, 42mm(40 目 。(3分析天平:分度值 0. 0001g(4专用消煮炉或可调电炉。(5酸式滴定管:10mL 或 25mL 。(6专用消化管或 250mL 凯氏瓶。(7凯氏蒸馏装置:

8、常量直接蒸馏式或半微量水蒸汽蒸馏也可采用专用定氮仪。(8三角烧瓶:150mL 或 250mL 。3试剂(1硫酸 (AR, =1.84。(2混合催化剂:0.4硫酸铜 (CuSO4·5H 2O , AR 和 6g 硫酸钾 (K2SO 4, AR ,磨细混均。(340%氢氧化钠溶液:称取 40g 氢氧化钠 (NaOH,CP溶于 1mL 蒸馏水中。(42%硼酸溶液:称取 20g 硼酸 (H3BO3, AR1000mL 蒸馏水中。(5混合指示剂:将 0.1%甲基红乙醇溶液与 0.5%溴甲酚绿乙醇溶液, 按 1:1等体积混 合。(60.1000mol/L盐酸 (HCl标准溶液:取 8. 3mL

9、盐酸 (AR注入 1000ml 蒸馏水。用无水 碳酸钠 (280烘干 法标定准确浓度。称取 0. 2000g ,溶于 50mL 水,加混合指示剂,用 0.1mol/L盐酸滴定至暗红色。同时滴定空白,加以校正。(7蔗糖 (AR(8硫酸铵 (AR4操作步骤(1选取有代表性的样品用四分法缩分至 200g ,风干或以 65烘干后粉碎,过 0.42mm 试验筛,封入样品袋,在阴凉处保存,以备分析。(2用分析天平准确称取 0.3 1.0g 制好的试样,放入专用消化管或凯氏瓶中,加入混合 催化剂 2.0g 和 12mL 硫酸,盖好专用消化管盖或凯氏瓶口盖一漏斗,置于专用消煮炉或可 调电炉上消煮, 开始用小火

10、加热消煮, 待泡沫消失后再加大火力保持微沸状态, 直至溶液透 明呈蓝绿色并继续消煮 2h.(3将消化的试样放冷,加入 50-60mL 蒸馏水,摇匀,冷却。将蒸馏装置冷凝管末端浸 入内装 25mL 2%硼酸溶液的三角瓶底部,加入 2滴混合指示剂。然后小心地向消化液内加 入 50mL40%氢氧化钠溶液, 立即进行加热蒸馏, 直至馏出液体体积为 100mL 为止。 取下三 角瓶使冷凝管末端离开液面,继续蒸馏 1-2min ,并用蒸馏水冲洗冷凝管末端,停止蒸馏。(4滴定:用 0.1mol/L 盐酸标准溶液滴定,溶液由蓝绿色变为红色为终点。(5空白测定:称取 0. 5g 蔗糖代替试样,按上述操作步骤测定

11、。(1饲料中粗蛋白质的含量按公式计算 式中:w(CP 饲料中粗蛋白的质量分数,%;V 滴定试样时所消耗的标准盐酸溶液的体积, mLV 0滴定空白时所消耗的标准盐酸溶液体积, mLC B 标准溶液盐酸的量浓度, MryLI0.0140 氮的摩尔质量, kg/mol;m 试样质量, g(2每试样取两个平行样进行测定,取平均值为分析结果方法允许相对偏差 5%。 6注意事项(1方法的可靠程度可用硫酸铵代替试样进行测定氮含量,与化学式计量氮作比较,误 差应为±0. 2%。例如,准确称取 0.2000g 硫酸铵测定含氮量应为 (21.19±0. 2 %(2如果试样中蛋白质含量高,可适当

12、减少称样量,同时考虑蒸馏完全的问题,可适当 多蒸几分钟,以保证蒸馏完全,防止对下一个样品造成的记忆效应。(3凯氏定氮法己沿用了 l00多年, 目前已有全自动定氮仪, 这类仪器从消化、 蒸馏到 滴定可自动完成,但仪器价格较贵。目前国产半自动定氮仪实际上是一套蒸馏装置,消化、 滴定还要另行试验。(4GB6432 94 国标方法中规定样品消化时要加入玻璃球以防爆沸,但我们的经验证 明,由于加入大量混合催化剂呈颗粒状,不产生爆沸,故无需加入。另外,本实验考虑消化 需要回流过程和减少蒸馏逸出造成的氨损失,建议消化管或凯氏瓶要加盖消化。(5国标方法中使用邻苯二甲酸氢钾作为基准物标定盐酸溶液。实际上使用无水

13、碳酸钠 基准物质标定盐酸溶液也是很方便的。(四 粗脂肪粗脂肪包括了饲料中可溶于乙醚的所有成分,故又称乙醚浸出物。通常用索氏抽提器 回流浸提饲料样品进行粗脂肪的测定。按照国标 GB /T6433 94,饲料中粗脂肪的测定方法适用于各种单一饲料、混合饲料 和配合饲料的分析。1原理采用索氏 (Soxhlet脂肪提取器用乙醚抽提试样,抽提物的总质量为粗脂肪含量。(1植物样品粉碎机或研钵 .(2试验筛:孔径 0. 42mm(40 目 (4电热恒温水浴锅:室温 -100。(5鼓风电热烘箱:50-200。(6索氏脂肪提取仪 (带球形冷凝管 100-150mL(7滤纸或滤纸筒:中速,脱脂。(8干燥箱:变色硅胶

14、或无水氯化钙作干燥剂3试剂无水乙醚(AR (1选取有代表性的试样, 用四分法缩分至 200g , 风干或以 65烘干后粉碎, 过 0.42mm 试验筛,混匀封于样品袋内,于阴凉处保存,以备分析。(2索氏提取器应干燥无水, 把抽提瓶 (内装数粒沸石 在 (150±2 烘箱内烘干 1 2h , 取出放入干燥器内冷却 30min , 称量。 再烘 30min , 同样冷却, 称重。 两次称量之差小于 0. 0008g 为恒重。(3视饲料中脂肪含量称取 l 5g(准确至 0. 0002g 置于滤纸筒内,或用滤纸包好,放入 l05烘干 1 2h ,取出放入抽提器内,滤纸包应完全浸入乙醚,向抽提

15、瓶内加 60-100mL 乙 醚,装好回流装置,在 65-75水浴上加热回流,控制乙醚回流速度为每小时 8-10次,共回 流 50-70次。取出试样,仍用原抽提瓶回收乙醚,取抽提瓶,在水浴上蒸除残存乙醚。(4将抽提瓶外水分擦干, 放入 (150±2 烘箱内烘干 2h , 取出放入干燥器内冷却 30min ,称量。同样再烘 lh ,冷却,称量。两次称量之差小于 0.001g 为恒重。5结果计算(1饲料中粗脂肪的含量按公式计算 式中:w(EE饲料中粗脂肪的质量分数,%:m 2己恒重的抽提瓶质量, g ;m l 己恒重的拍提瓶和粗脂肪的总质量m 风干试样质量, g 。(2母个试秤取两个平行

16、样测定,取平均值作为分析结果相对误差应小于 5%。(1本文介绍的方法又称为油重法, GB/T6433 94中称为仲裁法。如果样品数量多, 又不作为仲裁,可采用减重法。将风干样称量装入于 105烘干恒重的滤纸筒内,包好,在 105烘干,冷却称量。放入拍提瓶内抽提 50 70次。取出滤纸包,吹干乙醚,放入 (105±2 烘箱内烘干 2h. 取出放入干燥器内冷却 30min ,称量。滤纸包的减量为粗脂肪含量。 该方法抽提器内一次可放 3-5个样品抽提。由于样品量大,抽提次数可适当多些。(2目前,全自动脂肪测定仪已有销售,使用这类仪器可按仪器说明书操作。(五 粗纤维粗纤维是植物细胞壁的主要组

17、成成分,它包括纤维素、半纤维素、多缩戊糖、木质素 及角质素等成分。 粗纤维影响饲料的消化, 但适宜的水平对动物是必需的。 测定饲料中粗纤 维的含量是控制饲料中适宜的粗纤维水平的前提。 通常用稀硫酸和稀 Na0H 溶液溶解饲料样 品,不溶性残渣为粗纤维。概略养分分析法测定粗纤维时,由于部分半纤维素、木质素溶解于酸、碱中,导致结 果出现误差。 V an Soest(1976腾出了改进方案, 用中性洗涤纤维 (NDF 、 酸性洗涤纤维 (ADF、 酸性洗涤木质素 (ADL,作为测定饲料中纤维性物质的指标。国标 GB /T6434-94 饲料中粗纤维的测定方法适用于各种混合饲料、配合饲料、浓缩 饲料和

18、单一饲料。牧草、青贮等饲料中粗纤维高达 60% 80%(干物质计 ,而精料中,如玉 米、豆粕中粗纤维不过 2% 4%。1 原理饲料用稀酸和稀碱在规定条件下分别进行消煮,再用乙醇除去可溶物,经高温灼烧后 扣除矿物质所剩余的物质总称。 主要包括纤维素、 半纤维素、 木质素和少量杂质, 如果胶等。 2仪器设备(1植物样品粉碎机或研钵。(2试验筛:孔径 1mm 。(3分析天平:分度值 0. 0001g 。(4可调电炉。(5高温电阻炉。(6电热恒温箱。(7消煮器:有冷凝球的 600mL 高型杯或有冷凝管的瓶。(8抽滤装置:包括真空泵、吸滤瓶和 30ML 滤埚 (内铺孔径 0.42mm 不锈钢网 或 G

19、2玻 璃砂滤埚。(9干燥器:变色硅胶或无水氯化钙作干燥剂。(10.225molL 硫酸(1/2H2SO4溶液： 6.93mL 硫酸(AR， 将 98移入 500mL 蒸馏水， 冷却后定容至 1000mL。用氢氧化钠标准溶液标定其浓度，允许误差±0.005mol/L。 (20.313mol/L 氢氧化钠(NaOH溶液：准确称取 12.52g 氢氧化钠溶于 500mL 蒸馏水， 冷却后定容至 1000mL。该溶液可用邻苯二甲酸氢钾基准物质标定，浓度允许误差± 0.005mol/L。 标定方法：称取 1.8000g 105-110烘干的邻苯二甲酸氢钾基准物，溶于 5mL 不合二氧

20、 化碳的蒸馏水中，加 2 滴 1酚酞指示剂，用配好的氢氧化钠溶液滴定至粉红色。同时滴定 空白。按以下式计算氢氧化钠溶液的量浓度 c(NaoH： 式中：c(NaOHNaOH 标准溶液浓度，mol/L m邻苯二甲酸氢钾的质量，g V1滴定时所用 NaoH 溶液体积，mL； V0滴定空白时所用 NaoH 溶液体积，mL： 0.2042邻苯二甲酸氢钾的摩尔质量，kg/mL。 (3酸洗石棉：将市售的酸洗石棉先用盐酸溶液(1+3煮沸 30min， 过滤烘干后于 550 高温电阻炉内灼烧 16h。用 0.255mol/L 硫酸(1/2H2SO4溶液浸泡并煮沸 30min，过滤，用水 洗净，再用 0313nD

21、lL 氢氧化钠(NaOH溶液煮沸 30min，过滤，可先用少量酸洗一次， 再用水冲洗至中性，烘干后于 550高温电阻炉内灼烧 2h。冷却装瓶备用，此酸洗石棉空白 试验每克含粗纤维值应小于 0.001g。 (495乙醇(CP (5乙醚(CP (6正辛醇：(AR。 4测定步骤 (1取有代表性饲料样品用四分法缩至 200g，风干或以 65烘箱烘干后，用植物粉碎机 粉细，全部通过 lmm 试验筛，混匀，封入样品袋，作为试样以备测定。 (2用分析天平准确称取 12g 试样，放入消煮器内，加入 200mL 0.255mol/L 硫酸 (1/2H2SO4溶液和一滴正辛醇，装好冷凝球或冷凝管立即快速加热至沸，调节加热器保持微 沸状态 30min。 立即抽滤(古氏坍塌内铺孔径 6.5m 尼龙布。 残渣用蒸馏水洗至中性， 抽干， 用 200mL 0 313mol/L 氢氧化钠(Na0H溶液将残渣完全转入原消煮溶器内， 同样煮沸 30min。 立即用已于 550恒重的滤埚铺酸洗石棉 0.2-0.3g过滤。 先用 25mL0.255mol/L 硫酸(1/2H2SO4 溶液