HPLC测定妇舒液中黄芩苷含量

1、    HPLC测定妇舒液中黄芩苷含量        摘要目的：采用HPLC测定妇舒液中黄芩苷含量，以控制该制剂的质量。方法：用十八烷基键合硅胶柱分离黄芩苷，流动相为甲醇-4g.L-1磷酸(5050)；检测波长278nm。结果：黄芩苷峰与对硝基苯酚峰的分离度为4.5；理论塔板数以黄芩苷峰计算为3800；线性范围20900ng(r=0.999 9)；平均回收率为99.88%，RSD1.54%(n=5)。结论：本法简便、快速，适用于该产品质量分析检验。关键词妇舒液；黄芩苷；高效液

2、相色谱法Determination of baicalin in Fushuye by HPLCWang Yonglin (Wang YL),Lan Yanyu (Lan YY),Zhou Baozhu (Zhou BZ) (Department of Pharmacy,Guiyang Medical College,Guiyang550004)ABSTRACTOBJECTIVE:To domminate the quality of Fushuye,the contents of baicalin in Fushuye was determined by HPLC.METHOD:Baical

3、in was separated on Spherisorb C18 column and detected at 278 nm,by using methanol-4g.L-1 phosphoric acid (5050) as mobile phase.RESULTS:The resolution was 4.5.The number of theoretical plates calculaled for baicalin peak was 3800.The standard curve was linear over the range of 20 ng900ng,with the c

4、orrelation coefficient 0.999 9.The average recovery was 99.88% with RSD=1.54%(n=5). CONCLUSION:The method is simple and fast,and can be used for quantitative analysis of Fushuye.KEYWORDSFushuye,baicalin,HPLC妇舒液系由黄芩、蛇床子、五倍子等中药经提取加工制成的溶液剂，具有清热解毒，除湿止带的功能。临床用于治疗妇女湿热下注之带下而出现的带下色黄，味臭，阴痒等症。药理试验研究表明，黄芩苷是妇舒液

5、中的主要有效成分。本实验采用HPLC对妇舒液中的黄芩苷含量测定方法进行了实验研究，结果表明，该法操作简便、快速、重现性好，可用于妇舒液的质量控制。1仪器与试药LC-5A高效液相色谱仪，SPD-6AV紫外检测器，C-R6A色谱数据处理机(日本岛津)。甲醇(色谱醇)、磷酸(分析醇)、对硝基苯酚(分析醇)、黄芩苷对照品(中国药品生物制品检定所提供，供含量测定用)。2方法与结果2.1内标溶液的制备精密称取对硝基苯酚适量，加少量乙醇溶解后，加水稀释成每1ml含2.5mg的溶液，即为内标溶液。2.2对照品溶液的制备精密称取在60真空干燥4h的黄芩苷对照品适量，加甲醇制成每1ml含0.2mg的溶液；准确吸取

6、该溶液100l，内标溶液10l，加水稀释至1ml，即为对照品溶液。2.3供试品溶液的制备准确吸取样品原液10l，内标溶液100l，加水稀释至10ml，即为供试品溶液。同法制备不含黄芩药材的阴性样品溶液。2.4色谱条件色谱柱为十八烷基键合硅胶(Spherisorb C185m)250mm×4.6mm；流动相：甲醇-4g.L-1磷酸(5050)；流速：0.8ml*min-1；柱温：室温；检测波长：278nm(黄芩苷的最大吸收波长1。对硝基苯酚的最大吸收波长为318nm，但在278nm仍能检测，并服从朗泊比尔定律)。2.5系统适用性试验分别取对照品溶液、黄芩苷及内标物对照品溶液、不加内标物

7、的供试品溶液、阴性供试液、加内标物的供试品溶液等注入色谱仪，记录色谱(1)。从中可见，阴性样品谱在黄芩苷峰位置处无假阳性峰。在不含内标物的供试品溶液色谱中，在与内标物质峰相应的位置处无杂质峰，即本试液条件下黄芩苷峰与其它组分完全分离，内标物也不与其它组分峰重叠，柱效以黄芩苷峰计算为3800，保留时间约为9min，黄芩苷与对硝基苯酚的分离度为4.5。1妇舒液中黄芩苷HPLCA-黄芩苷对照品；B-黄芩苷及内标物对照品；C-供试品；D-阴性样品；1-黄芩苷峰；2-内标物峰2.6线性关系考察.ml-1.ml-1)10l，加水稀释至1ml，混匀后进样，按上述色谱条件测定峰面积，以重量比(W样/W内)对峰

8、面积比(A对/A内)进行线性回归，回归方程为：W样/W内0.500768×A对/A内-0.009679，r0.9999；当拟合成完全过原点的直线方程时，回归方程为：W样/W内0.49731×A对/A内，r=0.9999；以一供试液分析所得峰面积分别代入两方程计算含量，所得结果的相对平均偏差为0.075%，由此可看出截距近似为零，故可采用内标一点法计算含量。线性范围20ng900ng。2.7精密度试验取一供试品按供试品溶液的制备方法制备供试液，重复进样5次，记录色谱，RSD为0.50%。2.8重现性试验取一供试品按供试品溶液的制备方法制备5份供试液，分别进样，记录色谱，RSD

9、为1.35%。2.9回收率试验采用加样回收，精密称取已测定含量的同一样品9份，加内标溶液，再分别精密加入黄芩苷对照品适量，按供试品溶液的制备方法制备供试液，进样，记录色谱，计算回收率。平均回收率为99.88%，RSD为1.54%。2.10样品测定按供试品溶液的制备方法制备供试液及对照品溶液，分别进样510l，记录色谱，测定峰面积，计算含量。5批样品中黄芩苷含量测定结果见表1。表15批样品含量测定结果.n=3批号含量/mlRSD/%9608169610229610299701069703143讨论 在参考文献23及试验研究的基础上，以对硝基苯酚为内标物质，建立了一种不需对样品进行繁杂前处理的测定

10、方法，在准确吸取样品液、内标液后，其它步骤可不要求准确量取，稀释及进样等均不影响测定结果。本法操作简便、快速、灵敏、专属、可靠。经稳定性试验考察，样品溶液在室温(25)下放置，每隔2h测定1次，5次测定的结果RSD为0.96%。说明样品液中黄芩苷含量在10h内稳定。黄芩药材主要含黄酮类化合物(黄芩苷元、黄芩苷4)，其中黄芩苷含量较高，文献报道不同产地及品种含量差异较大5，鉴于大生产中的原料受产地、来源、品种等因素的影响，使测定结果产生较大的差异，故对黄芩药材中黄芩苷的含量作了限度规定，制剂中黄芩以黄芩苷(C21H18O11)计，不得少于2.80%。在黄芩药材中黄芩苷含量测定时发现，乙醇浓度大于85%时，一次提取率仅为90%左右，用50%70%的乙醇一次提取率可达99.5%，说明黄芩药材中黄芩苷的含量测定不宜用高浓度乙醇提取。作者单位：王永林兰燕宇周宝珠 (贵阳550004贵阳医学院药学系)参考文献1王宝琴.中成药质量标准与标准物质研究.北京：中国医药科技出版社，1994：106.2袁俊贤，邵依囡，许培竖.黄芩中黄芩甙与黄芩甙元的HPLC测定法.中成药，19