LUMINEX技术原理及应用

1、Luminex的基本原理及应用传统的蛋白质分析主要采用双抗体夹心ELISA法。此法长期以来被视为蛋白质定量分析的“标准方法”。ELISA可以用来准确测定大批量生物样品，但每次实验只能分析一个目标分子，而不具备同时分析多种目标分子的能力。在ELISA基础上发展出的 luminex技术，不仅同样通过双抗体选择而具有高特异性，同时也具有ELISA的高通量、操作简便、测量准确等优点，而且可以在一次实验中完成对多种目标分子的分析，从而改变了过去的分析模式，建立了更加高效快速的分析平台。Luminex技术原理，在近年发表的文章中已有过详细的介绍和说明。Luminex 技术应用微球和流式细胞仪的原理。 微球

2、内部含有三种荧光免疫荧光，通过荧光不同的比例可以区分500种不同的微球。每种微球可以用来检测一种不同的蛋白或基因。 因此，利用微球技术，可以同时检测高达500个蛋白或基因。该技术利用荧光编码的微球共价交联单克隆抗体，与被测定的目标分子结合后，加入荧光素标记的检测抗体，再通过激光扫描荧光编码来识别单个微球和测量“检测荧光”强度来确定被测分子的浓度。在使用相同抗体对的条件下，luminex技术的测量结果在准确度、精确度、灵敏度方面与ELISA均可达到相似的水平。Luminex应用的荧光编码微球带有针对不同目标分子的特异性抗体，不同的微球在一定程度上可以自由组合，这样在一次实验中可以同时完成多个目标

3、分子的分析。多目标分子的同时测定可以大大减少生物样品的消耗量，节省成本和测定时间，并且使多种目标分子之间相关性的分析更加准确。很多公司已经开始提供Luminex试剂盒，用于基础和临床医学研究以及临床检测。目前，Luminex试剂盒已经可以检测500多种蛋白质分子，包括细胞因子、激素、自身抗体、肿瘤标志物等。Luminex常见问题及解答LUMINEX应用于哪些领域?生物医学研究，生物标记物开发，临床检测等领域。Luminex技术主要用于蛋白和核酸检测分析。LUMINEX敏感性如何？灵敏度取决于开头的质量。对于同样的抗体对，Luminex检测的灵敏度高于ELISA技术。一般检测灵敏度在pg级。对不

4、同类型的样品制备和样品量的要求是怎样的？血清、血浆是常用的样本，每次检测需要10ul， 每次可以检测多个蛋白。从各种细胞或组织中提取的蛋白也可以用Luminex技术检测，制备方法与ELISA、Western Blot完全一样。一般可以检测到多少基因或蛋白的表达信息？检测蛋白和基因的数目主要取决于试剂盒。 蛋白质检测目前最高可以达到50个左右，基因检测最高达500个。如何保证检测结果的特异性？检测的特异性取决于抗体高特异性。 试剂几乎全部来源于美国大公司，产品经过了严格的质量控制。同时，我们检测公司也有近15年的经验、严格的操作程序和质量控制体系。客户自己提供抗体，是否可以进行LUMINEX检测

5、？Luminex和ELISA检测试剂都需要两个配套的特异性抗体。我们公司具有开发Luminex试剂盒的经验。但是，需要一系列的开发工作才能保证结果的特异性、重复性和可靠性。除了蛋白，LUMINEX技术是否还可以用于其它指标的检测？可以用于基因表达，基因多态性和HLA配型分析。检测周期多久？视待测蛋白的种类、数量和标本数量定。一般来说，检测一组蛋白（1-50个，视蛋白种类定）和一组标本（多达360个标）需要3-4小时的操作时间及基本数据分析。但是，检测周期也取决于公司当时的工作量。一般来说，从标本收到起，检测应在1-2周完成；但是部分蛋白试剂盒需要收到订单后从美国进口，检测周期可能会延长到4-5

6、周。如何判定 LUMINEX数据表达水平差异有无意义？表达差异主要取决于标本的性质和数量，我们公司为客户提供专业的数据统计服务。LUMINEX实验和流式细胞仪的优劣比较? Luminex技术是流式细胞仪和微球相结合的蛋白、核酸检测技术， 检测对象是蛋白质、DNA等大分子。普通流式细胞仪主要用于检测整体细胞表面或细胞内的蛋白表达情况。Luminex检测蛋白和标本数目大，是一种高通量检测技术。普通流式细胞仪每次只能检测几种蛋白分子，而且检测速度较慢，不适合高通量分析。 由此可见，两种方法应用方向有很大差别。报告的格式如何？报告以xcel表格形式，包括每种蛋白在每个标本中的表达量。公司也可以为客户提

7、供数理统计分析结果。完成一个LUMINEX的实验,需要的细胞的量是多少? 至少10ul的血清、血浆，蛋白提取物， 或50-100万细胞。如何控制LUMINEX检测的质量？我们对每一次检测都设定标准曲线，并设定内参进行校正。我们会定期做仪器校正，检测精密度和重复性实验以确保检测结果的可靠性。实验失败有几种原因? 从实验室角度看，成败原因包括试剂盒的质量，待测样品稀释倍数；待测蛋白质低于仪器检测底限，实验操作程序。从客户角度看，成败取决于样品制备，保存和运输是否恰当。我们公司可以提供规范操作程序，供客户参考。得到实验的结果后, 可以进行那些研究的工作? 可进行多方面的研究，例如：观察不同实验条件对

8、待测蛋白含量的影响，可进行药物作用靶点研究，不同人群血样生物标记物的研究，健康评估，疾病诊断，指导治疗等。经过分析后，若得到几百个感兴趣的基因或蛋白，如何对这些基因做功能分类或者Pathway相关分析呢？分析方法与其它技术平台一样，我们公司可以提供全套有偿服务。如何考虑LUMINEX重复实验的问题？我们每次都会对使用的标准品和内参做重复性测定，同时也建议对每份样本进行重复2次测定。在进行LUMINEX实验时，由于经费的限制，是否可以把多个样品进行混合以消除样品的个体差异后再上LUMINEX检测？不建议这么做。多个样品做检测，计算平均值和误差才有统计学意义。如果多个样品混合后测定只能算1份样品。

9、客户是组织的样品，准备自己提取样品，请问样品提取方面有没什么技术要求？需要采用对抗原抗体反应，或者蛋白质抗原性没有抑制作用的提取液进行提取，避免采用会造成蛋白质变性的试剂，如高浓度的尿素或者盐酸胍等。需要能完全提取待测蛋白质，否则对结果会造成误判。提取以后需要怎么保存，怎么运输？建议保存于-80度。避免反复冻融。可用干冰或者至少用冰袋运输。LUMINEX的假阳性率是多少? 技术性的假阳性率非常低，小于1%。生物假阳性率取决于每个蛋白的生物学特征。可开展此项目的临床科室有哪些？目前我公司拥有的世界最先进的高通量液相芯片检测技术，在国内仅有3台。是否可以将同一症状的病例混合后抽提,看共性表达?可以

10、。混合后的样品将被视作单一样品进行检测。服务流程如何？帮助客户制定检测方案样品检测结果分析报告出具可为客户提供更深层次的服务（实验设计、数据分析、论文撰写与发表）如何订购您们的服务？通过咨询，协商检测方案，然后付费或签订合同。 LUMINEX蛋白检测平台服务项目一、细胞因子、化学因子类：6Ckine/CCL2BCA-1/CXCL13CTACK/CCL27皮肤T细胞虏获趋化因子EGF表皮生长因子ENA-78/CXCL5 中性粒细胞激活蛋白-78Eotaxin 嗜酸细胞活化趋化因子Eotaxin-2/CCL24/MPIF-2嗜酸细胞活化趋化因子-2Eotaxin-3/CCL26嗜酸细胞活化趋化因子

11、-3FGF-2 成纤维细胞生长因子-2Flt-3 ligand FMS样酪氨酸激酶3 配体Fractalkine 人神经趋化因子GCP2/CXCL6 人中性粒细胞趋化蛋白2G-CSF 粒系集落刺激因子GM-CSF 粒-单系集落刺激因子GRO生长相关基因蛋白HCC-1/3/CCL14/I-309/CCL1IFN2干扰素2IFN干扰素IL-10白介素-10IL-11白介素-11IL-12 (p40) 白介素-12IL-12 (p70) 白介素-12IL-13白介素-13IL-15白介素-15IL-16白介素-16IL-17白介素-17IL-1ra白介素-1raIL-1白介素1IL-1白介素-1IL

12、-2白介素-2IL-20 白介素-20IL-21 白介素-21IL-23 白介素-23IL-28a 白介素-28aIL-29 白介素-29IL-3白介素-3IL-33/NF-HEV (mature) 白介素-33IL-4 白介素-4IL-5 白介素-5IL-6 白介素-6IL-7 白介素-7IL-8 白介素-8IL-9 白介素-9IP-10 干扰素诱导蛋白-10I-TAC/CXCL11干扰素诱导T细胞趋化因子LIF白血病抑制因子Lymphotactin淋巴细胞趋化蛋白MCP-1(MCAF)单核细胞趋化蛋白1MCP-2单核细胞趋化蛋白2MCP-3/CCL7单核细胞趋化蛋白3MCP-4单核细胞趋化

13、蛋白4M-CSF巨噬细胞集落刺激因子MDC/CCL22 巨噬细胞来源的趋化因子MIG/CXCL9趋化因子9MIP-1D (MIP-5/CCL15)巨噬细胞炎性蛋白-1DMIP-1巨噬细胞炎性蛋白-1MIP-1巨噬细胞炎性蛋白-1MIP-3/CCL19巨噬细胞炎性蛋白3MIP-3/CCL20巨噬细胞炎性蛋白3MMP -1基质金属蛋白酶-1MMP -2 基质金属蛋白酶-2MMP -3 基质金属蛋白酶-3MMP -7 基质金属蛋白酶-7MMP -9 基质金属蛋白酶-9MMP -10 基质金属蛋白酶-10MMP -12 基质金属蛋白酶-12MMP -13 基质金属蛋白酶-13NAP-2/CXCL7中性

14、粒细胞趋化蛋白2PDGF-AA 血小板衍生生长因子AAPDGF-AB/BB血小板衍生生长因子AB/BBRANTES分泌趋化因子sCD30 可溶性CD30sCD40L可溶性CD40LSCF干细胞因子SDF-1+/CXCL12基质细胞衍生因子-1+sEGFR可溶性表皮生长因子受体sgp130 可溶性糖蛋白130sIL-1RI可溶性白细胞介素-1受体IsIL-1RII可溶性白细胞介素-1受体IIsIL-2R可溶性白细胞介素-2受体sIL-4R可溶性白细胞介素-4受体sIL-6R 可溶性白细胞介素-6受体sRAGE 可溶性晚期糖基化中产物受体sTNF RI 可溶性肿瘤坏死因子受体IsTNF RII可溶

15、性肿瘤坏死因子受体IIsVEGF R2 可溶性血管内皮生长因子受体2sVEGF R3 可溶性血管内皮生长因子受体3sVEGF RI 可溶性血管内皮生长因子受体ITARC/CCL17胸腺活化调节趋化因子TGF转化生长因子TIMP-1组织金属蛋白酶抑制剂-1TIMP-2组织金属蛋白酶抑制剂-2TIMP-3组织金属蛋白酶抑制剂-3TIMP-4组织金属蛋白酶抑制剂-4TNF 肿瘤坏死因子TNF肿瘤坏死因子TPO 甲状腺过氧化物酶TRAIL/TNFSF10TSLP人胸腺基质淋巴细胞生产素VEGF血管内皮生长因子二、细胞信号通路类：Active Caspase 3 活化半胱胺酸蛋白酶 3Active Cl

16、eaved PARP活化切割的多腺苷二磷酸多聚酶Akt/PKB (Ser473) 磷酸化蛋白激酶BAkt/PKB (Thr308) 磷酸化蛋白激酶BATF2 (Thr69/71)活化复制因子2BAD (Ser112)CD3 (pan Tyr)c-Jun (Ser73)c-Kit (pan Tyr)Cleaved PARPc-Met/HGFR (pan Tyr)CREB (Ser133)EGF Receptor (pan Tyr)表皮生长因子受体Erb-B2/HER2 (pan Tyr)第二人体表皮生长因子受体ERK/MAP Kinase 1/2 (Thr185/Tyr187)GAPDHH2A.

17、X (Ser139)HSP27 (Ser 78)IGF1R (pan Tyr)胰岛素样生长因子1受体IRS1 (pan Tyr)IB (Ser 32)JNK (Thr183/Tyr185)LAT (pan Tyr)Lck (pan Tyr)MEK1 (Ser222)MKK6 (Ser207/Thr211)MSK1 (Ser212)p21p38 (Thr180/Tyr182)p53 (Ser15)p53 (Ser46)p70 S6 Kinase (Thr412)PDGF Receptor (pan Tyr)Rsk1 (Ser380)STAT1 (Tyr701)STAT1 (Tyr707)STAT

18、2 (Tyr690)STAT3 (Ser727)STAT3 (Tyr705)STAT5A/B (Tyr694/699)STAT6 (Tyr641)Syk (pan Tyr)ZAP-70 (pan Tyr)三、神经因子类：CortisolApo AlApo CIIIApo EBDNFCathepsin D组织蛋白酶DComplement C3Complement C4Complement Factor HC reactive protein (CRP) C-反应蛋白MelatoninMIP-4MPONCAMNeurotensinOrexin AOxytocinPAI-1 (total)PDGF-

19、AAPDGF-AB/BBPEDFPrealbuminRANTESSAPsICAM-1Substance PsVCAM-11-Antitrypsin2-Macroglobulin-MSH-Endorphin四、骨代谢因子类：RANKLAdiponectin脂联素IL-1ACTHIL-6InsulinLeptin瘦素Osteopontin (OPN)骨桥蛋白OsteocalcinOsteoprotegerinPTHTNF 肿瘤坏死因子五、皮肤生长调控因子：CortisolFibronectinHSAInvolucrinLPSKeratin-6Keratin - 1Keratin - 10六、凋亡及

20、败血症因子：MIF巨噬细胞移动抑制因子PAI-1 (Total)sFassFasLsICAM-1sVCAM-1七、免疫球蛋白分型：IgAIgG1IgG2IgG3IgG4IgM八、肿瘤生物标记物：CA-125癌抗原125IGF-II 胰岛素样生长因子2Leptin瘦素MIF巨噬细胞移动抑制因子Osteopontin (OPN)骨桥蛋白Prolactin泌乳刺激素MMP-1基质金属蛋白酶-1MMP-2 基质金属蛋白酶-2MMP-9基质金属蛋白酶-9CA 15-3癌抗原检测15-3Serum amyloid A血清淀粉样蛋白ACA 19-9癌抗原19-9TGF 转化生长因子Cathepsin D组织

21、蛋白酶DTNF 肿瘤坏死因子VEGF血管内皮生长因子VEGFR2血管内皮生长因子受体2-2-Microglobulin -2微球蛋白CEA 癌胚抗原C reactive protein (CRP) C-反应蛋白E-cadherin 上皮型钙黏附蛋白EGFR表皮生长因子受体Eotaxin 嗜酸细胞活化趋化因子ER- 雌激素受体Fas(CD95 or Apo-1) 肿瘤坏死因子受体超家族成员6Ferritin 铁蛋白Fibrinogen纤维蛋白原AFP 甲胎蛋白Follistatin 卵泡素G-CSF 集落刺激因子3Haptoglobin 结合珠蛋白HER-2(erbB2) 第二人体表皮生长因子受

22、体ICAM-1细胞间粘附分子-1IGFBP-1胰岛素样生长因子结合蛋白1IGFBP-2胰岛素样生长因子结合蛋白2IGFBP-3胰岛素样生长因子结合蛋白3Angiopoietin-2血管生成素2LH赖氨酸羟化酶MCP-1(MCAF)单核细胞趋化蛋白1MIG/CXCL9趋化因子9tPSA总前列腺特异性抗原fPSA游离前列腺特异性抗原NSE神经元特异性烯醇化酶Free-hCG游离血清人绒毛膜促性腺激素EB antibody EB病毒抗体HE4人附睾分泌蛋白4CA215癌抗原215CA242癌抗原242CA724癌抗原724CA50癌抗原50Cyfra 21-1角蛋白19片段SCCA鳞状细胞癌抗原九、内分泌激素类：ACTHAGRPAmylin (Active or Total)BDNFCNTFC-PeptideFSHGHGLP-1 (Active)GlucagonIGF-1IGFBP-1胰岛素样生长因子结合蛋白1IGFBP-2胰岛素样生长因子结合蛋白2IGFBP-3胰岛素样生长因子结合蛋白3IGFBP-4胰岛素样生长因子结合蛋白4IGFBP-5胰岛素样生长因子结合蛋白5IGFBP-6IGFBP-7InsulinLeptinLH赖氨酸羟化酶Prolactin泌乳刺激素TSHGhrelin (Active)GIP (Tota