分光光度计测土壤TN,TP,NH4,NO3,NO2,PO3方法

1、目 录1水质总磷的测定-钼 酸 铵 分 光 光 度 法Water qualityDetermination of total phosphorusAmmonium molybdate spectrophotometric method2土壤全磷测定方法之一HClO4H2SO4法3 中性和石灰性土壤速效磷的测定0.5mol·L-1NaHCO3法4水质总氮的测定-碱性过硫酸钾消解紫外分光光度法5亚硝酸盐-磺胺和盐酸萘乙二胺试剂法6次溴酸钠氧化法（水中氨态氮的测定）7镉铜还原法（测定水中硝态氮）8土壤总有机碳测定9半微量开氏法（土壤总氮测定）10消煮液中铵的测定11 镀铜镉还原-重氮化偶合

2、比色法（土壤硝态氮测定）12铁的测定-邻啡啰啉比色法1水质总磷的测定钼 酸 铵 分 光 光 度 法Water qualityDetermination of total phosphorusAmmonium molybdate spectrophotometric method 1.1主题内容与适用范围本标准规定了用过硫酸钾（或硝酸-高氯酸）为氧化剂，将未经过滤的水样消解。用钼酸铵分光光度测定总磷的方法。总磷包括溶解的、颗粒的、有机的和无机磷。本标准适用于地面水、污水和工业废水。取25mL试料，本标准的最低检出浓度为0.01mg/L,测定上限为0.6mg/L。在酸性条件下，砷、铬、硫干扰测定。

3、1.2原理在中性条件下用过硫酸钾（或硝酸-高氯酸）使试样消解，将所含磷全部氧化为正磷酸盐。在酸性介质中，正磷酸盐与钼酸铵反应，在锑盐存在下生成磷钼杂多酸后，立即被抗坏血酸还原，生成蓝色的络合物。1.3试剂本标准所用试剂除另有说明外，均应使用符合国家标准或专业标准的分析试剂和蒸馏水或同等纯度的水。1.3.1硫酸（H2SO4），密度为1.84g/mL。1.3.2硝酸（HNO3）,密度为1.4g/mL。1.3.3高氯酸（HClO4）,优级纯，密度为1.68g/mL。1.3.4硫酸（H2SO4），1+1。1.3.5硫酸，约c（H2SO4）=1mol/L：将27mL硫酸（3.1）加入到973mL水中。1

4、.3.6氢氧化钠（NaOH），1mol/L溶液：将40g氢氧化钠溶于水并稀释至1000mL。1.3.7氢氧化钠（NaOH）,6mol/L溶液：将240g氢氧化钠溶于水并稀释至1000mL。1.3.8过硫酸钾，50g/L溶液：将5g过硫酸钾（K2S2O8）溶解于水，并稀释至100mL。1.3.9抗坏血酸，100g/L溶液：溶解10g抗坏血酸（C6H8O6）于水中，并稀释至100mL。此溶液贮于棕色的试剂瓶中，在冷处可稳定几周，如不变色可长时间使用。1.3.10钼酸盐溶液：溶解13g钼酸铵(NH4)6Mo7O24·4H2o于100mL水中。溶解0.35g酒石酸锑钾KSbC4H4O7

5、83;H2o于100mL水中。在不断搅拌下把钼酸铵溶液徐徐加到300mL硫酸（1.3.4）中，加酒石酸锑钾溶液并且混合均匀。此溶液贮于棕色试剂瓶中，在冷处可保存二个月。1.3.11浊度色度补偿液：混合两个体积硫酸（1.3.4）和一个体积抗坏血酸溶液（1.3.9）。使用当天配制1.3.12磷标准贮备液：秤取0.2197±0.001g于110干燥2h在干燥器中放冷的磷酸二氢钾（KH2PO4），用水溶解后转移至1000mL容量瓶中，加入大约800mL水、加5mL硫酸（1.3.4）用水稀释至标线并混匀。1.00mL此标准溶液含50.0g磷。本溶液在玻璃瓶中可贮存至少六个月。1.3.13 标准

6、使用溶液：将10.0mL的磷标准溶液（1.3.12）转移至250mL容量瓶中，用水稀释至标线并混匀。1.00mL此标准溶液含2.0g磷。 使用当天配制。1.3.14 酚酞，10g/L溶液：0.5g酚酞溶于50mL95%乙醇中。1.4仪器 实验室常用仪器设备和下列仪器。1.4.1 医用手提式蒸汽消毒器或一般压力锅（1.11.4kg/cm2）。1.4.2 50mL具塞（磨口）刻度管。1.4.3 分光光度计。注：所有玻璃器皿均应用稀盐酸或希硝酸浸泡。1.5 采样和样品1.5.1 采取500mL水样后加入1mL硫酸（1.3.1）调节样品的pH值，使之低于或等于1，或不加任何试剂于冷处保存。 注：含磷量

7、较少的水样，不要用塑料瓶采样，因易磷酸盐吸附在塑料瓶壁上。1.5.2 试样的制备：取25mL样品（1.5.1）与具塞刻度管中（1.4.2）。取时应仔细摇匀，以得到溶解部分和悬浮部分均具有代表性的试样。如样品中含磷浓度较高，试样体积可以减少。1.6分析步骤1.6.1空白试样按（1.6.2）的规定进行空白试验，有水代替试样，并加入与测定时相同体积的试剂。1.6.2测定1.6.2.1消解1.6.2.1.1 过硫酸钾消解：向（1.5.2）试样中加4mL过硫酸钾（1.3.8），将具塞刻度管的盖塞紧后，用一小块布和线将玻璃塞扎紧（或用其他方法固定），放在大烧杯中置于高压消毒器（1.4.1）中加热，待压力达

8、1.1kg/cm2,相应温度为120时，保持30 min后停止加热。待压力表读数降至零后，取出放冷。然后用水稀释至标线。注：如用硫酸保存水样。当用过硫酸钾消解时，须先将试样调至中性。1.6.2.1.2硝酸高氯酸消解：取25mL试样（1.5.1）与锥形瓶中，加数粒玻璃珠，加2mL硝酸（1.3.2）在电热板上加热浓缩至10mL。冷后加5mL硝酸（1.3.2），再加热浓缩至10mL，放冷。加3mL高氯酸（1.3.3），加热至高氯酸冒白烟，此时可在锥形瓶上加小漏斗或调节电热板温度，使消解液在锥形瓶内壁保持回流状态，直至剩下34mL，放冷。 加水10mL,加1滴酚酞指示剂（1.3.14）。滴加氢氢氧化钠

9、溶液（1.3.6或1.3.7）至刚呈微红色，再滴加硫酸溶液（1.3.5）至微红刚好退去，充分混匀。移至具塞刻度管中（1.4.2），用水稀释至标线。注： 用硝酸高氯酸消解需要在通风橱中进行。高氯酸和有机物的混合物经过加热易发生危险，须将试样先用硝酸消解，然后再加入硝酸高氯酸进行消解。 决不可把消解的试样蒸干。 如消解后有残渣时，用滤纸过滤于具塞刻度管中，并用水充分清洗锥形瓶及滤纸，一并移到具塞刻度管中。 水样中的有机物用过硫酸钾氧化不能完全破坏时，可用此法消解。1.6.2.2发色 分别向各份消解液中加入1mL抗坏血酸溶液（1.3.9）混匀，30s后加2mL钼酸盐溶液（1.3.10）充分混匀。 注

10、： 如试样中含有浊度或色度时，须配制一个空白试样（消解后用水稀释至标线）然后向试料中加入3mL浊度色度补偿液（1.3.11），但不加抗坏血酸溶液和钼酸盐溶液，然后从试料的吸光度中扣除空白试料的吸光度。 砷大于2mg/L干扰测定，用硫代硫酸钠去除。硫化物大于2mg/L，通氮气去除。铬大于50mg/L干扰测定，用亚硫酸钠去除。1.6.2.3分光光度测定室温下放置15min后，使用光程为30mm比色皿，在700nm波长下，以水作参比，测定吸光度。扣除空白试验的吸光度后，从工作曲线上查得磷的含量。注; 如显色时室温低于13，可在2030水浴上显色15min即可。1.6.2.4工作曲线的绘制取7支具塞刻

11、度管（1.4.2）分别加入0.0，0.5，1.00，3.00，5.00，10.0，15.0mL磷酸盐标准溶液（1.3.14）。加水至25mL。然后按测定步骤（1.6.2）进行处理。以水作参比，测定吸光度。扣除空白试验的吸光度后，和对应的磷的含量绘制工作曲线。1.7结果的表示总磷含量以C（mg/L）表示，按下式计算： C=式中：m实样测得含磷量，g。 V测定用试样体积，mL。1.8 精密度与准确度1.8.1 十三个实验室测定（采用1.6.2.1.1消解）含磷2.06mg/L的统一样品1.8.1.1 重复性实验室内相对标准偏差为0.75%。1.8.1.2再现性 实验室间相对标准偏差为1.5%。1.

12、8.1.3准确度相对误差为+1.9%。1.8.2六个实验室测定（采用1.6.2.1.2消解）含磷量2.06mg/L的统一样品1.8.2.1重复性实验室内相对标准偏差为1.4%。1.8.2.2再现性实验室间相对标准偏差为1.4%。1.8.2.3准确度相对误差为1.9%。质控样品主要成分是乙铵酸（NH2CH2COOH）和甘油磷酸钠（C3H7Na2O6P·5H2O）。2土壤全磷测定方法之一HClO4H2SO4法2.1 方法原理 用高氯酸分解样品，因为它既是一种强酸，又是一种强氧化剂，能氧化有机质，分解矿物质，而且高氯酸的脱水作用很强，有助于胶状硅的脱水，并能与Fe3+络合，在磷的比色测定中

13、抑制了硅和铁的干扰。硫酸的存在提高消化液的温度，同时防止消化过程中溶液蒸干，以利消化作用的顺利进行。本法用于一般土壤样品分解率达97%98%，但对红壤性土壤样品分解率只有95%左右。溶液中磷的测定采用钼锑抗比色法。2.2主要仪器 721型分光光度计；LNK872型红外消化炉。2.3 试剂（1） 浓硫酸 （H2SO4,1.84g·cm-3,分析纯）。（2） 高氯酸CO（HClO4）70%72%，分析纯）。（3） 2，6-二硝基酚或2，4-二硝基酚指示剂溶液。溶解二硝基酚0.25g于100mL水中。此指示剂的变色点约为pH3，酸性时无色，碱性时呈黄色。（4） 4mol·L-1氢

14、氧化钠溶液。溶解NaOH16g于100mL水中。（5） 2mol·L-1（H2SO4）溶液，吸取浓硫酸6mL，缓缓加入80mL水中，边加边搅动，冷却后加水至100mL。（6）钼锑抗试剂。A .5g·L-1酒石酸氧锑钾溶液：取酒石酸氧锑钾K（SbO）C4H4O60.5g，溶解于100mL水中。B.钼酸铵-硫酸溶液：称取钼酸铵（NH4）6Mo7O24·4H2O10g，溶于450mL水中，缓慢地加入153mL浓H2SO4，边加边搅。再将上述A溶液加入到B溶液中，最后加水至1L。充分摇匀，贮于棕色瓶中，此为钼锑混合液。临用前（当天），称取左旋抗坏血酸（C6H8O5，化学纯

15、）1.5g，溶于100mL钼锑混合液中，混匀，此即钼锑抗试剂。有效期24小时，如藏于冰箱中则有效期较长。此试剂中H2SO4为5.5mol·L-1(H+)，钼酸铵为10g·L-1，酒石酸氧锑钾为0.5 g·L-1，抗坏血酸为15 g·L-1。（7） 磷标准溶液。准确称取在105烘箱中烘干的KH2PO4（分析纯）0.2195g，溶解在400mL水中，加浓硫酸5mL（加H2SO4防长霉菌，可使溶液长期保存），转入1L容量瓶中，加水至刻度。此溶液为50g·mL-1P标准溶液。吸取上述磷标准溶液25mL，稀释至250mL，即为5g·mL-1P标

16、准溶液（此溶液不宜久存）。2.4操作步骤（1） 待测液的制备。准确称取通过100 目筛子的风干土样0.50001.0000g（注1），置于50mL开氏瓶（或100mL消化管）中，以少量水湿润后，加浓硫酸H2SO48mL，摇匀后，再加70%72%HClO410滴，摇匀，瓶口上加一个小漏斗，置于电炉上加热消煮（至溶液开始转白后继续消煮）20min。全部消煮时间为4060min。在样品分解的同时作一个空白试验，即所用试剂同上，但不加土样，同样消煮得空白消煮液。将冷却后的消煮液倒入100mL 容量瓶中（容量瓶中事先盛水3040mL），用水冲洗开氏瓶（用水应根据少量多次的原则），轻轻摇动容量瓶，待完全冷

17、却后，加水定容。静置过夜，次日小心地吸取上层澄清液进行磷的测定；或者用干的定量滤纸过滤，将滤液接收在100mL干燥的三角瓶中待测定。（2） 测定。吸取澄清液或滤液5mL（对含P0.56g·kg-1以下的样品可吸取10mL），以含磷（P）在2030g为最好注入50mL容量瓶中，用水冲稀至30mL，加二硝基酚指示剂2滴，滴加4mol·L-1NaOH溶液直至溶液变为黄色，再加2mol·L-1（H2SO4）1滴，使溶液的黄色刚好退去（这里不用NH4OH调节酸度，因消煮液酸浓度较大，需要较多碱去中和，而NH4OH浓度如果超过10 g·L-1就会使钼蓝色迅速消退）。

18、然后加钼锑抗试剂5mL，再加水定容50mL，摇匀。30min后，用880nm或700nm波长进行比色（注2），以空白液的透光率为100（或吸光度为0），读出测定液的透光度或吸收值。（3） 标准曲线。准确吸取5g·mL-1P标准溶液0、1、2、4、6、8、10mL，分别加入50mL容量瓶中，加水至约30mL，再加空白试验定容后的消解液5mL，调节溶液pH为3，然后加钼锑抗试剂5mL，最后用水定容至50mL。30min后进行比色。各瓶比色液磷的浓度分别为0、0.1、0.2、0.4、0.6、0.8、1.0g·mL-1P。2.5 结果计算 从标准曲线上查得待测液的磷含量后，可按下式

19、进行计算：土壤全磷（P）量（g·kg-1）=×××10-3式中：待测液中磷的质量浓度（g·mL-1）； V样品制备溶液的mL数； m烘干土质量（g）； V1吸取滤液mL数； V2显色的溶液体积（mL）; 10-3将g数换算成每kg土壤中含磷的g数的乘数。2.6 注释注1.最后显色溶液中含磷量在2030g为最好。控制磷的浓度主要通过称样量或最后显色时吸取待测液的毫升数。 注2.本法钼蓝显色液比色时用880nm波长比700nm更灵敏，一般分光光度计为721型只能选700nm波长。3 中性和石灰性土壤速效林的测定0.5mol·L-1NaHC

20、O3法3.1方法原理 石灰性土壤由于大量游离碳酸钙存在，不能用酸溶液来提取有效磷，一般用碳酸盐的碱溶液。由于碳酸根的同离子效应，碳酸盐的碱溶液降低碳酸钙的溶解度，也就降低了溶液中钙的浓度，这样有利于磷酸钙盐的提取。同时由于碳酸盐的碱溶液，也降低了铝和铁离子的活性，有利于磷酸铝和磷酸铁的提取。此外，碳酸氢钠碱溶液中存在着OH-、HCO3-、CO32-等阴离子，有利于吸附态磷的置换，因此NaHCO3不仅适用石灰性土壤，也适应于中性和碱性土壤中速效磷的提取。待测液中磷用钼锑抗试剂显色，进行比色测定。3.2 主要仪器 往复振荡机、分光光度计或比色计。3.3 试剂 （1） 0.5mol·L-1

21、NaHCO3浸提液。溶解NaHCO340.2g于800mL水中，以0.5 mol·L-1NaOH溶液调节浸提液的pH至8.5。此溶液曝于空气中可因失去CO2而使pH增高，可于液面加一层矿物油保存之。此溶液贮存于塑料瓶中比在玻璃瓶中容易保存，若贮存超过一个月，应检查pH值是否改变。（2） 无磷活性炭。活性炭常含有磷，应作空白试验，检验有无磷存在。如含磷较多，须先用2 mol·L-1HCl浸泡过夜，在平瓷漏斗上抽气过滤，每次用少量蒸馏水淋洗多次，并检查到无磷为止。如含磷较多，则直接用NaHCO3处理即可。（3） 钼锑抗试剂。A .5g·L-1酒石酸氧锑钾溶液：取酒石酸

22、氧锑钾K（SbO）C4H4O60.5g，溶解于100mL水中。B.钼酸铵-硫酸溶液：称取钼酸铵（NH4）6Mo7O24·4H2O10g，溶于450mL水中，缓慢地加入153mL浓H2SO4。边加边搅。将上述A溶液加入到B溶液中，最后加水至1L。充分摇匀，贮于棕色瓶中，此为钼锑混合液。临用前（当天），称取左旋抗坏血酸（C6H8O5，化学纯）1.5g，溶于100mL钼锑混合溶液中，混匀，此即钼锑抗试剂。有效期24小时，如藏于冰箱中则有效期较长。此试剂中H2SO4为5.5mol·L-1(H+)，钼酸铵为10g·L-1，酒石酸氧锑钾为0.5 g·L-1，抗坏血酸

23、为15 g·L-1。（4）磷标准溶液。准确称取在105烘箱中烘干的KH2PO4（分析纯）0.2195g，溶解在400mL水中，加浓硫酸5mL（加H2SO4防长霉菌，可使溶液长期保存），转入1L容量瓶中，加水至刻度。此溶液为50g·mL-1P标准溶液。吸取上述磷标准溶液25mL，稀释至250mL，即为5g·mL-1P标准溶液（此溶液不宜久存）。3.4 操作步骤 秤取通过20目筛子的风干土样2.5g（精确到0.001g）于150mL三角瓶（或大试管）中，加入0.5mol·L-1NaHCO3溶液50mL，再加以一勺无磷活性炭（注1），塞紧瓶塞，在振荡机上振荡3

24、0min（注2），立即用无磷滤纸过滤，滤液承接于100mL三角瓶中，吸取滤液10mL（含磷量高时吸取2.55.0mL，同时应补加0.5 mol·L-1NaHCO3溶液至10mL）于150mL三角瓶中（注3），再用滴定管准确加入蒸馏水35mL，然后移液管加入钼锑抗试剂5mL（注4），摇匀，放置30min后，用880nm或700nm波长进行比色。以空白液的吸收值为0，读出待测液的吸收值（A）。 标准曲线绘制：分别准确吸取5g·mL-1P标准溶液0、1.0、2.0、3.0、4.0、5.0mL于150mL三角瓶中，再加入0.5mol·L-1NaHCO310mL，准确加水使

25、各瓶的总体积达到45mL，摇匀；最后加入钼锑抗试剂5mL，混匀显色。同待测液一样比色，绘成标准曲线。最后溶液中磷的浓度分别为0、0.1、0.2、0.3、0.4、0.5g·mL-1P。3.5结果计算土壤中有效磷（P）含量（mg ·kg-1）=×1000式中：从工作曲线上查得P的质量浓度（g·mL-1）； V显色时定容体积（mL）; ts为分取倍数（即浸提液总体积与显色对吸取浸提液体积之比）； m风干土质量（g）； k将风干土换算成烘干土质量的系数； 103将g换算成mg； 1000换算成每kg含P量。 土壤速效磷g·kg-1P 等级 5 低 51

26、0 中 10 高3.6注释注1. 活性炭对PO43-有明显的吸附作用，当溶液中同时存在大量的HCO3-离子饱和了活性炭颗粒表面，抑制了活性炭对PO43-的吸附作用。注2. 本法浸提温度对测定结果影响很大。有关资料曾用不同方法校正该法浸提温度对测定结果的影响，但这些方法都是在某些地区和某一条件下所得的结果，对于各地区不同土壤和条件下不能完全适用，因此，必须严格控制浸提时的温度条件。一般要在室温（2025）下进行，具体分析时，前后各批样品应在这个范围内选择一个固定温度，以便对各批结果进行相对比较。最好在恒温振荡机上进行提取。显色温度（20左右）较易控制。注3. 由于取0.5mol·L-1

27、NaHCO3浸提滤液10 mL于50 mL容量瓶中，加水和钼锑抗试剂后，即产生大量的CO2气体，由于容量瓶口小，CO2气体不易逸出，在摇匀过程中，常造成试液外溢，造成测定误差。为了克服这个缺点，可以准确加入提取液、水和钼锑抗试剂于三角瓶中，混匀，显色。注4. 全磷钼锑抗法，其显色溶液的酸的浓度为0.55 mol·L-1（H2SO4）,钼酸铵浓度为1g·L-1。在A.L.Page,Methods of Soil Analysis. part2,1982（419 422页）Olsen 法中先用H2SO4中和NaHCO3提取液至pH5，再加钼锑抗试剂使最后显色溶液的酸的浓度为0.

28、42 mol·L-1（H2SO4），钼酸铵溶液浓度为0.96g·L-1。经我们试验6，用本法测定磷的含量，其结果是很理想的。为了统一应用全磷测定中的钼锑抗试剂，同时考虑到Olsen 方法是属于例行方法，可以省去中和步骤，这样最后显色液酸的浓度约为0.45mol·L-1（H2SO4），钼酸铵浓度为1.0g·L-1，这样仍在合适的显色的酸的浓度范围。4水质总氮的测定碱性过硫酸钾消解紫外分光光度法4.1 主题内容与适用范围4.1.1主题内容 本标准规定了用碱性过硫酸钾在120124消解、紫外分光广度测定水中总氮的方法。4.1.2适用范围 本标准适用于地面水、地

29、下水的测定。本法可测定水中亚硝酸盐氮、硝酸盐氮、无机铵盐、溶解态氨及大部分有机含氮化合物中氮的总和。氮的最低检出浓度为0.050mg/L，测定上限为4mg/L。本方法的摩尔吸光系数为1.47×103L·mol-1·cm-1。测定中干扰物主要为 碘离子和溴离子，碘离子相对于总氮含量的2.2倍以上，溴离子相对于总氮含量的3.4倍以上有干扰。某些有机物在本法规定的测定条件下不能完全转化为硝酸盐时有对测定有影响。4.2 定义4.2.1可滤性总氮：指水中可溶性及含可滤性固体（小于0.45m颗粒物）的含氮量。4.2.2总氮：指可溶性及悬浮颗粒中的含氮量。4.3 原理在60以上

30、水溶液中，过硫酸钾可分解产生硫酸氢钾和原子态氧，硫酸氢钾在溶液中离解而产生氢离子，故在氢氧化钠的碱性介质中可促使分解过程趋于完全。 分解出的原子态氧在120124条件下，可使水样中含氮化合物的氮元素转化为硝酸盐，并且在此过程中有机物同时被氧化分解。可用紫外分光光度法于波长220和275nm处，分别测出吸光度A220及A275按式（1）求出校正吸光度A： A=A220-A275(1)按A的值查校准曲线并计算总氮（以NO3-N计）的含量。4.4试剂和材料 除非（4.4.1）另有说明，分析时均使用符合国家标准或专业标准的分析纯试剂。4.4.1水，无氨。按下述方法之一制备：4.4.1.1离子交换法：将

31、蒸馏水通过一个强酸型阳离子交换树脂（氢型）柱，流出液收集在带有密封玻璃盖的玻璃瓶中。4.4.1.2蒸馏法：在1000mL蒸馏水中，加入0.10mL硫酸（=1.84g/mL）。并在全玻璃蒸馏器中重新蒸馏，弃去前50mL馏出液，然后将馏出液收集在带有玻璃塞的玻璃瓶中。4.4.2氢氧化钠溶液，200g/L：称取20g氢氧化钠，溶于水（4.3.1）中，稀释至100mL。4.4.3氢氧化钠溶液，20g/L：将（4.4.2）稀释10倍而得。4.4.4碱性过硫酸钾溶液：称取40g过硫酸钾（K2S2O8），另称取15g氢氧化钠，溶于水（4.4.1）中，稀释至1000mL，溶液存放在聚乙烯瓶内，最长可贮存一周。

32、4.4.5盐酸溶液，1+9。4.4.6硝酸钾标准溶液。4.4.6.1硝酸钾标准贮备液，CN=100mg/L：硝酸钾（KNO3）在105110烘箱中干燥3h，在干燥器中冷却后，称取0.7218g，溶于水（4.4.1）中，移至1000mL容量瓶中，用水稀释至标线，在1020暗处保存，或加入12mL三氯甲烷保存，可稳定6个月。4.4.6.2 硝酸钾标准使用液，Cn=10mg/L：将贮备液用水（4.4.1）稀释10倍而得。使用时配制。4.4.7硫酸溶液，1+35。4.5仪器和设备4.5.1常用实验室仪器和下列仪器。4.5.2紫外分光光度计和10mm石英比色皿。4.5.3医用手提式蒸汽灭菌器或家用压力锅

33、（压力为1.11.4kg/cm2），锅内温度相当于120124。4.5.4具玻璃磨口塞比色管，25mL.所用玻璃器皿可用盐酸（1+9）或硫酸（1+35）浸泡，清洗后再用水（4.4.1）冲洗数次。4.6样品4.6.1采样在水样采集后立即放入冰箱中或低于4的条件下保存，但不得超过24h。水样放置时间较长时，可在1000mL水样中加入约0.5mL硫酸（=1.84g/mL），酸化到pH值小于2，并尽快测定。样品可贮存在玻璃瓶中。4.6.2试样的制备 取实验室样品（4.6.1）用氢氧化钠溶液（4.4.3）或硫酸溶液（4.4.7）调节pH至59从而制得试样。如果试样中不含悬浮物按（4.7.1.2）步骤测定

34、，试样中含悬浮物则按（4.7.1.3）步骤测定。4.7分析步骤4.7.1测定4.7.1.1用无分度吸管取10.00mL试样（CN超过100g时，可减少取样量并加水（4.4.1）稀释至10mL）置于比色管中。4.7.1.2试样不含悬浮物时，按下述步骤进行。a. 加入5mL碱性过硫酸钾溶液（4.4.4），塞紧磨口塞用布及绳等方法扎紧瓶塞，以防弹出。b. 将比色管置于医用手提蒸汽灭菌器中，加热，使压力表指针到1.11.4kg/cm2，此时温度达120124后开始计时。或将比色管置于家用压力锅中，加热至顶压阀吹气时开始计时。保持此温度加热半小时。c. 冷却、开阀放气，移去外盖，取出比色管并冷至室温。d

35、. 加盐酸（1+9）1mL，用无氨水稀释至25mL标线，混匀。e. 移取部分溶液至10mm石英比色皿中，在紫外分光光度计上，以无氨水作参比，分别在波长为220与275nm处测定吸光度，并用式（1）计算出校正吸光度A。4.7.1.3 试样含悬浮物时，先按上述4.7.1.2中a至d步骤进行，然后待澄清后移取上清液到石英比色皿中。再按上述4.7.1.2中e步骤继续进行测定。4.7.2 空白试验 空白试验除以10mL水（4.4.1）代替试料外，采用与测定完全相同的试剂、用量和分析步骤进行平行操作。 注：当测定在接近检测限时，必须控制空白试验的吸光度Ab不超过0.03，超过此值，要检查所用水、试剂、器皿

36、、和家用压力锅或医用手提灭菌器的压力。4.7.3校准4.7.3.1校准系列的制备： a. 用分度吸管向一组（10支）比色管（4.5.4）中，分别加入硝酸盐氮标准使用溶液（4.6.2）0.0，0.10，0.30，0.50，0.70，1.00，3.00，5.00，7.00，10.00mL。加水（4.4.1） 稀释至10.00mL。 b. 按7.1.2中a至e步骤进行测定。4.7.3.2 校准曲线的绘制：零浓度（空白）溶液和其它硝酸钾标准使用溶液（4.4.6.2）制得的校准系列完成全部分析步骤，于波长220和275nm处测定吸光度后，分别按下式求出除零浓度以外其它校准系列的校正吸光度As和零浓度的校

37、正吸光度Ab及其差值At As=As220-As275 (2) Ab=Ab220-Ab275(3) At=As-Ab (4)式中： As220标准溶液在220nm波长的吸光度； As275标准溶液在275nm波长的吸光度； Ab220零浓度（空白）溶液在220nm波长的吸光度； Ab275零浓度（空白）溶液在275nm波长的吸光度；按At值与相应的NO3-N含量（g）绘制校准曲线。4.8结果的表示4.8.1计算方法按式（1）计算得试样校正吸光度Ar，在校准曲线上查的相应的总氮g数，总氮含量CN（mg/L）按下式计算： CN=（5）式中：m试样测出含氮量，g； V测定用试样体积，mL。4.9 精

38、密度和准确度4.9.1 重复性 21个实验室分别测定了亚硝酸钠，氨基丙酸与氯化铵混合样品；CW604氨氮标准样品；L谷氨酸与葡萄糖混合样品。上述三种样品含氮量分别为1.49，2.64，和1.15mg/L，其分析结果如下： 各实验室的室内相对标准偏差分别为2.3，1.6和2.5%。室内重复测定允许精密度分别为0.074，0.092和0.063mg/L。4.9.2再现性 上述实验室对上述三种统一合成样品测定。实验室间相对标准偏差分别为3.1%，1.1%和4.2%；再现性相对标准偏差分别为4.0% ，1.9%，和4.8%；总相对标准偏差分别为3.8%，1.9%和4.9%。 4.9.3准确度上述实验室

39、对上述三种统一合成样品测定，实验室内均值相对误差分别为6.3%，2.4%，和8.7%。室内单内相对误差分别为7.5%，3.8%，和9.8%。实验室平均回收率置信范围分别为99.0±6.4%，99.0±5.1%和101±9.4%。5亚硝酸盐-磺胺和盐酸萘乙二胺试剂法5.1原理亚硝酸盐与芳香胺反应形成重氮化合物，继而再与另一芳香胺偶联生成偶氮染料，由其颜色的强度确定亚硝酸盐的含量。5.2仪器和器皿水样分样和显色反应均在50cm3带刻度的具塞玻璃比色管中进行。加液用自动可调加液器。用分光光度计或比色计进行吸光度的测定，我国海上调查目前多用船用分光光度计。5.3试剂. 亚

40、硝酸盐标准贮备溶液亚硝酸钠（分析纯）在100110干燥1小时。称取0.3450g溶解于1000cm3蒸馏水中，此溶液N的浓度为5mol·cm-3。溶液应保存于棕色试剂瓶中，并加入几滴氯仿作为防护剂，置于冰箱内。此溶液一般只能保存12个月。固体亚硝酸钠试剂不宜久存，选用试剂时要注意。.亚硝酸盐标准使用溶液吸取10.00cm3亚硝酸钠贮备溶液，用去离子水稀释至1000 cm3。这种使用溶液应在当天使用。此溶液的浓度为0.05mol·cm-3。. 磺胺溶液将10g分析纯磺胺晶体溶解于100 cm3浓盐酸（分析纯）和500 cm3蒸馏水中（温热以加快溶解）。冷却后用蒸馏水稀释至10

41、00 cm3。. 盐酸萘乙二胺取0.5g分析纯盐酸萘乙二胺溶解于500 cm3蒸馏水中，并保存于棕色试剂瓶，置于冰箱中。若棕色退去，则应重新配制。5.4测定步骤 .空白的测定（1）Ac值的测定：将样品和参比比色槽都装满蒸馏水，用分光光度计或光度计，在波长540nm下进行测量，记下读数Ac。如果比色槽间的差值大于±0.005，说明比色槽被弄脏或被磨毛。这时最好改用新的比色槽。应经常检查注意比色槽的清洁。并给两个比色槽编号，以免分析样品和参比比色槽搞混乱。（2）试剂空白：取50cm3与配制试剂同一批的蒸馏水于50cm3具塞带刻度比色管中，加入磺胺溶液1cm3，混匀后再加入盐酸萘乙二胺溶液

42、1 cm3，摇匀，放置15分钟，用分光光度计或比色计，用与标准相同的比色槽，约在波长540nm处，以蒸馏水作参比，测定消光值Ab。 如果蒸馏水无亚硝酸盐，则 Ab仅包括试剂空白和比色槽空白，则 Ab= Ab-Ac 若蒸馏水含有微量的亚硝酸盐，就首先按上法测定Ab,然后取48cm3与配制试剂所用的同一批蒸馏水注入50cm3的具塞刻度比色管中，按上法分别加入各种试剂2cm3,按同样方法测定A2b。 试剂的Ab=A2b-Ab。由于试验室的空气常含有亚硝酸根，因此显色试剂容易被污染，应当定期测定空白值。试剂瓶塞要盖紧，保持清洁。.标准的测定（1） 分别取标准使用溶液0，0.50，1.00，1.50，2

43、.00，2.50cm3，转入50 cm3具塞有刻度比色管中，用蒸馏水稀释至标线，充分摇匀。此溶液的浓度分别为0，0.50，1.00，1.50，2.00，2.50mol·dm-3。工作曲线的浓度范围按照所测水样亚硝酸盐的浓度来确定。（2）用可调加液器加入1cm3磺胺溶液，混匀，放置5分钟，再加入1cm3盐酸萘乙二胺溶液，摇匀，显色15分钟，颜色可稳定5小时左右，用分光光度计或比色计，选用适当的比色槽，在波长为540nm处，以蒸馏水作参比，测定各比色管标准液吸光值A，空白液的吸光值为Ab1,它包括试剂和蒸馏水的吸光值。如蒸馏水无亚硝酸盐，则Ab1=Ab'。A值应减去空白值Ab1。

44、然后以含量和相应的吸光值做标准曲线。.水样的测定（1） 用具塞有刻度玻璃比色管直接在采水器水龙头上迅速注入50cm3水样，立即加盖。（2） 按照（2）方法加入各种试剂。（3） 按照（2）方法测定水样的吸光值Aw。（4） 如果水样混浊，就要量取50cm3水样，加入1cm3磺胺溶液和1cm3蒸馏水，混匀。按上述方法测出水样的混浊吸光值At'。At'要减去Ac。即At= At'-Ac。（5）将水样的测定数据Aw，Ab，At，Ac记录于记录表中。水样的吸光度等于： An=Aw-Ab-At-Ac.计算水样中的亚硝酸盐氮的含量根据水样吸光值An查工作曲线或用回归直线方程可求出。5.

45、5 测定的浓度范围、精密度和准确度亚硝酸盐N浓度从010mol·dm-3遵守比尔定律。由于摩尔消光系数很大，约4.6×104左右。如消光值超过0.8，则首先用蒸馏水稀释水样。方法的重现性为±0.02mol·dm-3。为了得到准确的测定结果，在做浑浊度测定时，一定要向水样加入磺胺试剂（含酸），因为海水中的一部分浊度可能由钙质颗粒物质所产生，这些物质会被试剂中的酸所溶解，使实际浊度与未加试剂的海水浊度不同。因亚硝酸盐标准溶液存在杂质或部分分解，可能造成不同实验室之间的偏差，所以在进行大规模联合调查时，需要进行试验室之间的相互校准。5.6 干扰 将亚硝酸盐与芳

46、香胺形成偶氮染料进行测定，不受海水中通常存在组分的影响。硫化氢对测定有干扰。如果水样存在硫化氢时，就应在加入酸性磺胺溶液之后用氮气将硫化氢驱除。 6次溴酸钠氧化法（水中氨态氮的测定）6.1 原理 溴酸钾溴化钾溶液配制次溴酸钠的原理，是利用已知浓度的KBrO3-KBr溶液，当加入酸后即定量产生溴，再与碱在常温下生成次溴酸钠。 BrO3-+5Br-+6H+=3Br2+3H2O Br2+2NaOH=NaBrO+NaBr+H2O次溴酸钠在碱性溶液中与氨发生反应 NH4+OH-=NH3+H2O 3BrO-+NH3+OH-=NO2-+2H2O+3Br-生成的亚硝酸钠，在酸性溶液中与磺胺进行重氮化反应，反应

47、的产物与盐酸萘乙二胺作用形成深红色偶氮染料。于543nm波长，进行光度测定。少许过量的次溴酸钠经酸化后，所生成的的溴即与过量磺胺作用生成二溴磺胺，起到还原剂作用。BrO-+2H+ Br-= Br2+H2ONH2C6H4SO2NH2+2Br2= NH2C6H2Br2SO2NH2+2HBr6.2 仪器和器皿. 船用分光光度计或光电比色计。. 可调加液器：规格010.0cm3。. 带刻度具塞比色管：规格50cm3。. 容量瓶：1000cm3，200cm3。. 玻璃蒸馏瓶：容积2000cm3。. 聚乙烯瓶：1000cm3。. 玻璃试剂瓶：棕色1000cm3，250 cm3等。白色500cm3，250c

48、m3等。6.3 试剂及其配制.无氨蒸馏水 每1dm3蒸馏水中加入15 cm30.5 mol·dm-3NaOH（分析纯）和1g分析纯过二硫酸钾（K2S2O8）放在蒸馏器中，先敞口煮沸约十分钟，再接好冷凝器蒸馏，直至剩下约150cm3 蒸馏水时为止。刚蒸出的水没有氨和硝酸盐。.次溴酸钠氧化剂的配制（1） 溴酸钾溴化钾氧化剂贮备液 称取2.8g溴酸钾，20g溴化钾溶于1000cm3无氨蒸馏水中。保存于冰箱内，此溶液可长期稳定。（所用试剂为分析纯级）。（2） 次溴酸钠氧化剂使用液 取氧化剂贮备溶液1cm3于棕色试剂瓶中，用无氨蒸馏水稀释至50cm3，加入3cm3 1：1盐酸，迅速盖上瓶盖，混

49、匀，置于暗处放置5分钟，加入50cm340×10-2氢氧化钠，混匀。此溶液至少可稳定8小时。25以上，此溶液稳定时间会缩短，最好临用前现配。. 磺胺溶液将10g分析纯磺胺晶体溶解于100 cm3浓盐酸（分析纯）和500 cm3蒸馏水中（温热以加快溶解）。冷却后用蒸馏水稀释至1000 cm3。所用蒸馏水需统一用无氨和无亚硝酸盐的蒸馏水。. 盐酸萘乙二胺（分析纯）取0.5g分析纯盐酸萘乙二胺溶解于500 cm3蒸馏水中，并保存于棕色试剂瓶，置于冰箱中。若棕色退去，则应重新配制。所用蒸馏水需统一用无氨和无亚硝酸盐的蒸馏水。. 40×10-2氢氧化钠溶液称取400g（一级品）氢氧化

50、钠，溶于1000 cm3刚蒸出的无氨蒸馏水，转入塑料瓶中，把盖子塞紧。. 1：1盐酸溶液 在500 cm3 无氨蒸馏水中加入500 cm3分析纯的浓盐酸。. 氯化铵标准溶液将分析纯NH4Cl在100下烘干1小时，冷却、衡重，称取0.1070 g溶于少许无氨蒸馏水中，转入1000 cm3容量瓶中，稀释至标线。其氮含量为2mol·cm-3。加入2cm-3氯仿（分析纯）固定，盛于1000 cm3棕色试剂瓶中，置于冰箱内，此标准溶液在3个月内有效。. 4：1盐酸 量取60 cm3蒸馏水（无氨水）于烧杯中，加入240 cm3分析纯浓盐酸，混匀。6.4 测定步骤.空白测定（1） 比色槽间的空白A

51、c值的测定：将样品和参比比色槽都装满蒸馏水，用分光光度计或光度计，在波长540nm下进行测量，记下读数Ac。如果比色槽间的差值大于±0.005，说明比色槽被弄脏或被磨毛。这时最好改用新的比色槽。应经常检查注意比色槽的清洁。并给两个比色槽编号，以免分析样品和参比比色槽搞混乱。（2）试剂空白分别取3份50 cm3与配制各种试剂同一批的无氨蒸馏水于50 cm3具塞比色管中，加入5cm3 次溴酸钠使用溶液，混匀，氧化30 分钟后加入1cm3磺胺溶液与3cm3（4：1）盐酸，混匀，待5分钟后加入1cm3盐酸萘乙二胺溶液，显色15分钟后，用与标准相同方法测定吸光值A'b。如果重蒸馏水无氨

52、，则A'b值仅包括试剂空白和比色槽空白。于是假若重蒸馏水中含有痕量氨，则按下述方法测定试剂空白。首先按上述方法测定Ab'，然后取40cm3无氨蒸馏水于50cm3具塞比色管中，按上述方法加入双倍各种试剂，测得消光值A2b。则试剂空白： Ab =A2b-A'b由于试剂能吸收空气中的氮，应定期测定试剂的空白。而且实验室应远离厕所，无关人员不要入内，室内不得吸烟，不要存放氨水或含有氨的试剂。.校准反应比色管应用酸洗净，用水充分冲洗。（1） 在4个200 cm3容量瓶中分别移入氯化铵标准溶液0，0.20，0.40，0.60 cm3，用无氨蒸馏水稀释至标线，混匀。溶液的浓度分别为0

53、，2.00，4.00，6.00mol·dm-3。（2）分别取50cm3上述溶液于具塞比色管中。未加标准的是空白。（3）用可调加液器加入5cm3次溴酸钠使用溶液，混匀，氧化30分钟后加入1cm3磺胺溶液和3cm3（4：1）盐酸，混匀，待5分钟后加入1cm3盐酸萘乙二胺溶液，显色15分钟，用船用分光光度计或光电比色计，选用适当比色槽，在波长约543nnm，对照蒸馏水测定各比色管的标准液吸光值A。未加标准溶液的吸光度值为Ab1，它包括试剂和蒸馏水的吸光值。用（AAb1）和浓度做工作曲线或求出直线回归方程。. 水样测定（1） 用具塞带刻度比色管在采水器水龙头迅速注入50 cm3水样。（2）

54、按照标准（3）节步骤操作，测出水样吸光值Aw。（3） 量取50cm3水样加入1cm3磺胺溶液和3cm3（4：1）盐酸，混匀，按上法测定水样的吸光值At'。水样的混浊吸光值：At= At'-Ac。将水样的测定数据Aw、Ab、At、Ac和水样原有的亚硝酸的吸光度A'NO2-N记录于分析记录表中。如果测定亚硝酸盐所用的比色槽的长度与本测定不同，则需对A'NO2-N进行校正后才减去。如所用的水样体积相同，但所加的试剂量不同，A'NO2-N值也需乘以校正值，因为测定亚硝酸盐是50 cm3样品加2 cm3试剂，而测定氨是50 cm3样品加入试剂总量为10 cm3。

55、.计算水样中氨的吸光值An应为： An=AwAcAtAbA'NO3-N 根据An值查工作曲线或与回归直线方程计算得氨含量。6.5 测定的浓度范围次溴酸钠氧化法在氨氮07mol·dm-3浓度范围内符合郎伯比尔定律。6.6 干扰 使用次溴酸钠氧化法在氨氮浓度含量从012mol·dm-3内，淡水和海水的吸光值基本一致，在误差范围，二者的氧化时间也均在30分钟达到平衡。因此无盐误差。但使用次溴酸钠氧化法或次氯酸盐氧化法，海水中的有机化合物如氨基酸等也会被氧化，甚至70×10-2的氨基酸氮被测出来。7镉铜还原法（测定水中硝态氮）7.1 原理 水样通过镀铜镉粒还原柱，将硝酸盐还原为亚硝酸盐。基本反应是： NO3-+Me（固）+2H+ NO2-+Me2+H2O硝酸盐还原为亚硝酸盐的还原率受样品pH值和还原剂金属的电负性或金属表面活性所决定。若样品pH值太高或金属表面活性不好，则产生还原率过低的现象；若样品pH值过低或金属表面活性太强，则产生过度还原，见下列反应式： NO3-+3 H+2e-= HNO2+H2O NO3-+4 H+3e-= NO+2 H2O在pH值等于7或弱碱性的样品中，反应最好