第一节DNA重组技术的基本工具11

1、 又叫做又叫做 技术或技术或 技术。技术。DNA重组 基因拼接 基因工程基因工程是指按照人们的愿望，进行严是指按照人们的愿望，进行严格的设计，并通过格的设计，并通过体外体外DNADNA重组和转基因重组和转基因等技术，赋予生物以等技术，赋予生物以新的遗传特性新的遗传特性，从，从而创造出而创造出更符合人们需要的新的生物类更符合人们需要的新的生物类型和生物产品型和生物产品。由于基因工程是在。由于基因工程是在DNADNA分分子水平子水平上进行设计和施工的，因此又叫上进行设计和施工的，因此又叫做做DNADNA重组技术重组技术。 转基因转基因1.1 DNA重组技术的基本工具重组技术的基本工具磷酸磷酸脱氧核

2、糖核苷酸脱氧核糖核苷酸DNA的基本单位？的基本单位？ T磷酸二酯键磷酸二酯键1234512345 ADNA的二级结构的二级结构磷磷酸酸二二酯酯键键氢键氢键胞胞嘧嘧啶啶脱脱氧氧核核苷苷酸酸这体现了限制酶这体现了限制酶具有专一性具有专一性黏性末端黏性末端平末端平末端GCTTAAGCTTAAGCGCGCGCGGCC4 作用特点：作用特点：序列特点：序列特点：GCTTAAGCTTAAGCGCGCGCGGCC4 作用特点：作用特点：G A A T T CC T T A A G C C C G G GG G G C C CEcoR（4） 黏性末端或平末端黏性末端或平末端Sma黏性末端黏性末端黏性末端黏性末

3、端黏性末端黏性末端黏性末端黏性末端 限制酶存在于原核细胞中的作用是限制酶存在于原核细胞中的作用是什么？为什么限制酶不剪切细菌本身的什么？为什么限制酶不剪切细菌本身的DNA？1 1、种类：、种类：2 2、作用部位：、作用部位：Ecoli DNAEcoli DNA连接酶连接酶T T4 4 DNA DNA连接酶连接酶磷酸二酯键磷酸二酯键 二、二、 DNADNA连接酶连接酶“分子缝合针分子缝合针”类型GCTTAAGCTTAADNA聚合酶DNA连接酶区别区别相同点相同点只能将只能将单个核苷酸单个核苷酸连接连接到已有的到已有的DNADNA片段上，片段上，形成磷酸二酯键形成磷酸二酯键形成形成磷酸二酯键磷酸二

4、酯键在在两个两个DNADNA片段之间片段之间形成磷酸二酯键形成磷酸二酯键(三)“分子运输车” 基因进入受体细胞的载体载体需要的条件：有1多个限制酶切点对受体细胞无害导入基因能在受体细胞中复制、表达有某些标记基因，便于筛选 (5)结构简单，大小适中。常用运载体种类： 细菌的质粒 噬菌体或某些动植物病毒假如目的基因导入受体细胞后不能复制或不能转假如目的基因导入受体细胞后不能复制或不能转录，转基因生物能有预想的效果吗？录，转基因生物能有预想的效果吗？作为分子运输车作为分子运输车载体，如果没有切割位点将载体，如果没有切割位点将会怎样？会怎样？霍乱菌的质粒多个限制酶切点，你会用它来做分霍乱菌的质粒多个限

5、制酶切点，你会用它来做分子运输车吗？子运输车吗？目的基因有没有进入受体细胞，如何去发现？目的基因有没有进入受体细胞，如何去发现？ 注意：真正用作运载体的质粒都是人工改造过的。注意：真正用作运载体的质粒都是人工改造过的。小结基因工程基因工程的工具的工具限制限制 酶酶来源来源作用作用结果结果DNA连连接酶接酶作用作用 种类种类E.coliDNA连接酶连接酶T4 DNADNA连接酶连接酶运载运载工工 具具具备的具备的条件条件结构简单结构简单,大小适中大小适中能在宿主细胞中自能在宿主细胞中自我复制并稳定存在我复制并稳定存在具一个多个限制酶切位点具一个多个限制酶切位点具标记基因具标记基因质粒、质粒、 噬

6、菌体衍生物噬菌体衍生物 、动植物病毒、动植物病毒 例例1：科学家们经过多年的努力，创立了：科学家们经过多年的努力，创立了 一种新兴生物技术一种新兴生物技术基因工程，实施该基因工程，实施该 工程的最终目的是工程的最终目的是 A. 定向提取生物体的定向提取生物体的DNA分子分子 B. 定向地对定向地对DNA分子进行人工分子进行人工“剪切剪切” C. 在生物体外对在生物体外对DNA分子进行改造分子进行改造 D. 定向地改造生物的遗传性状定向地改造生物的遗传性状D 在基因工程中，切割运载体和在基因工程中，切割运载体和含有目的基因的含有目的基因的DNA片段，需片段，需使用（使用（ ）同种限制酶同种限制酶

7、 B. 两种限制酶两种限制酶同种连接酶同种连接酶 D. 两种连接酶两种连接酶例例2 2. .下列有关基因工程中限制酶的描述，下列有关基因工程中限制酶的描述，错误的是错误的是 A.A.一种限制酶只能识别一种特定的脱氧苷一种限制酶只能识别一种特定的脱氧苷酸序列酸序列B.B.限制酶的活性受温度的影响限制酶的活性受温度的影响C.C.限制酶能识别和切割限制酶能识别和切割RNARNAD.D.限制酶可从原核生物中提取限制酶可从原核生物中提取C1 1、关于限制酶的说法中，正确的是、关于限制酶的说法中，正确的是A A、限制酶是一种酶，只识别、限制酶是一种酶，只识别GAATTCGAATTC碱碱 基序列基序列B B、EcoRIEcoRI切割的是切割的是GAGA之间的氢键之间的氢键C C限制酶一般不切割自身的限制酶一般不切割自身的DNADNA分分 子，只切割外源子，只切割外源DNADNAD D限制酶只存在于原核生物中限制酶只存在于原核生物中课堂巩固C例例3 3：同一种限制酶切割成的黏性末端是：同一种限制酶切割成的黏性末端是 A. B. C. D. A例例4 4：质粒是基因工程中最常用的载体，：质粒是基因工程中最常用的载体，它的主要特点是它的主要特点是能自主复制能