脂肪测定的四种方法,索氏提取法、酸水解法、巴布科克法、盖勃氏法

1、脂肪的测定方法第 法 索氏抽提法1 原理样品用无水乙醚或石油醚等溶剂抽提后，蒸去溶剂所得的物质，在食品分析上称为 脂肪或粗脂肪。因为除脂肪外，还含色素及挥发油、蜡、树脂等物。抽提法所测得的脂 肪为游离脂肪。2 试剂2.1 无水乙醚或石油醚。2.2 海砂 :同 GB 5009.3-85 食品中水分的测定方法 2.3。3 仪器索氏提取器。4 操作方法4.1 样品处理4.1.1固体样品：精密称取 25g（可取测定水分后的样品），必要时拌以海砂，全部移入 滤纸筒内。4.1.2液体或半固体样品：称取5.010.0g,置于蒸发皿中，加入海砂约20g于沸水浴上蒸干后，再于95105C干燥，研细，全部移入滤纸

2、筒内。蒸发皿及附有样品的玻棒，均 用沾有乙醚的脱脂棉擦净，并将棉花放入滤纸筒内。4.2 抽提将滤纸筒放入脂肪抽提器的抽提筒内，连接已干燥至恒量的接受瓶，由抽提器冷凝管 上端加入无水乙醚或石油醚至瓶内容积的23 处，于水浴上加热，使乙醚或石油醚不断回流提取，一般抽取 6 12h。4.3 称量取下接受瓶，回收乙醚或石油醚，待接受瓶内乙醚剩1 2mL 时在水浴上蒸干，再于，95105C干燥2h,放干燥器内冷却 0.5h后称量。4.4 计算m1-m0X = X 100m2式中， X 样品中脂肪的含量，；m1 接受瓶和脂肪的质量， g;m0接受瓶的质量，g;m2样品的质量（如是测定水分后的样品，按测定水

3、分前的质量计），g。第二法 酸水解法5 原理 样品经酸水解后用乙醚提取，除去溶剂即得游离及结合脂肪总量。6 试剂6.1 盐酸6.2 95%乙醇。6.3 乙醚。6.4 石油醚。7 仪器100mL 具塞刻度量筒。8 操作方法8.1 样品处理8.1.1固体样品：精密称取约 2g,置于50mL大试管内，加 8mL水，混匀后再加10mL盐 酸。8.1.2液体样品：称取10.0g，置于50mL大试管内，加10mL盐酸。8.2将试管放入7080C水浴中，每隔510min以玻璃棒搅拌一次，至样品消化完全为 止，约4050min。8.3 取出试管， 加入 10mL 乙醇， 混合。 冷却后将混合物移于 100mL

4、 具塞量筒中， 以 25mL 乙醚分次洗试管，一并倒入量筒中。待乙醚全部倒入量筒后，加塞振摇1min，小心开塞，放出气体，再塞好，静置 12min，小心开塞，并用石油醚 -乙醚等量混合液冲洗塞及筒口附着 的脂肪。静置 1020min，待上部液体清晰，吸出上清液于已恒量的锥形瓶内，再加5mL乙 醚于具塞量筒内，振摇，静置后，仍将上层乙醚吸出，放入原锥形瓶内。将锥形瓶置水浴 上蒸干，置95105C烘箱中干燥2h,取出放干燥器内冷却 0.5h后称量。8.4 计算 同 4.4三、 巴布科克法( Babcock 法) 巴布科克法是用来测定乳及乳制品的一种方法，测定牛奶前我们首先搞清牛奶的营养成分 牛奶的

5、平均成分：牛乳 100%：水分 87.5%，总固体 12.2%，维生素，免疫体和酶；总固体 12.2%：非脂固体 8.8%，乳脂肪 3.4%；非脂固体 8.8%：蛋白质 3.5%，乳糖 4.6%，矿物质 Ca.p.Fe.K 等；蛋白质 3.5%：酪蛋白 3.0%，白蛋白 0.4%，球蛋白 0.1%在成分表中乳脂肪 3.4%是需要我们检测。在牛乳中蛋白质比人乳蛋白质高。乳糖含量比人乳少，矿物质中 Ca的含量比人乳多，而 Fe的含量比人乳少 牛乳中脂肪含量标准如下生鲜牛乳：(1) 特级 > 3.%(2) 一级 > 3.0%(3) 二级 > 2.8%消毒牛乳> 3.0 %众所

6、周知牛乳是乳浊液。 它的脂类在牛乳中并不是以溶解状态存在， 而是以脂肪球呈乳浊液 状态存在， 在它周围有一层膜， 这层膜使脂肪球得以在乳中保持乳浊液的稳定状态， 这层膜 其中含蛋白质。磷脂等许多物质，通常用浓 H2SO4 时非脂成分溶解，脂肪球膜就被软化破 坏，于是乳浊液就破坏，脂肪即可分离出来，这是公认的标准分析法。巴布科克法和盖勃氏法这两种方法是有两个科学家研制出来，一个是美国的 Babcock 在 1890年研究出测牛乳的脂肪，后来经过 2 年，即 1892 年由英国的盖勃液研究出测牛乳的脂肪。</P> 这两种方法都是用来提取乳制品中的脂肪，此法也叫湿法提取，因为样品不需要事

7、先烘干， 脂肪在牛乳中以乳胶体形式存在，要测定脂肪必需要破坏乳胶体脂肪与其它非脂成分分离， 分离出来的非脂成分一般用浓 H2SO4 分解，用容量法定量，操作简便，为许多国家用于乳 制品的常规分析。Babcock 法原理利用硫酸溶解乳中的乳糖浴蛋白质等非脂成分使脂肪球膜破坏， 脂肪游离出来，在乳脂瓶中 直接读取脂肪层，从而迅速求出被检乳中的脂肪率。2、方法准确吸取17.6ml牛乳 t于乳脂瓶中 t加17.5ml硫酸（用量筒量取）宀混合宀离心5 分钟（1000转/分） t60 C水至瓶颈 t 离心2分钟（1000转/分） t力口 60C水至4%刻 度线 t离心1分钟 t 60 C水浴中 t使脂肪柱

8、稳定 t读取加 H2SO4 的作用：（1）溶解蛋白质（2）乳解乳糖 </P>（3）减少脂肪的吸附力因为非脂成分溶解在 H2SO4中，这样就增加了消化液的比重（H2SO4比重1.820-1.825，脂肪比重小于 1），即比重大于 1.820-1.825，脂肪的比重小于 1 的，这样就使得脂肪迅速而完 全地与非脂沉淀，另外离心的作用是脂肪非常清晰的分离， 加热的目的，使脂肪吸附力降低， 上浮速度加快，这就是采用 Babcock 法测牛乳脂肪。近来在有些科技书中，将 Babcock 法加以改进，用来测肉制品和谷物类样品。因为 Babcock 法用浓硫酸作为蛋白质的溶解剂， 对测肉制品会发

9、生炭化， 这些碳化物悬浮在 脂肪层和水层的界面间，这样造成了读数不准确，因此，他们研究了各种代替硫酸的试剂， 后来他们认为利用高氯酸 -醋酸混合液代替硫酸，测定肉及肉制品的脂肪，测定值与AOAC法一致，精密度以标准偏差表示为0.2%。所用试剂：高氯酸 -醋酸混合液6%的高氯酸与等容量的醋酸混合具体方法：称9克绞碎的肉，于巴氏瓶中，加混合酸30m ,于沸水浴中加热15min（使样品充分溶解），在 加混合酸 ,使之达到瓶子的刻度范围离心2min （1000转/分）60C水浴10min读取计算： Fat% = H x 0.95H读取脂肪柱的数值0.95溶解于脂肪层中的醋酸修正值 改良的巴布科克法：对

10、溶质品质类经过加热的试样，水浴中加热15min 即可完全溶解，对于生肉试样由于没发生热变性 ，采用混合酸后，肉蛋白质在一定时间内凝固，溶解的时间 大约需要 25 分钟。四、 Gerber 法（盖勃氏法） 这种方法对糖分高的样品，如采用此方法容易焦化，致使结果误差大，故不适宜。</P>1、原理：在牛乳中加硫酸，可破坏牛乳的胶质性，使牛乳中的酪蛋白钙盐变成可溶性的重硫酸酪蛋白化合物，并且能减小脂肪球的吸附力，同时还可增加消化液的比重使脂肪更容易浮出液面， 在操作中还需要加入异戊醇，降低脂肪球的表面张力，促进脂肪球的离析，但是异戊醇的溶解度很小，所以在操作中，不能加的太多，如果加的太多，

11、异戊醇会进入脂肪中，使脂肪体 积增大，而且会有一部分异戊醇和硫酸作用生成硫酸脂，反应如下：2C5H11OH + H2SO4 t （C5H11O）2SO2 + 2H2O在操作过程中加热 65-70 C和离心处理，目的都使脂肪酸迅速而彻底分离2、方法取10ml H2SO4于乳脂瓶中-准确量取11.0ml牛乳-加1ml异戊醇-混合-65C水浴5min 离心5min （1000转/分）-65 C水浴5min-立即读取说明：（1 ）在巴氏法中采用17.6ml吸管，实际上注入巴氏瓶中只有17.5ml，牛乳的比重1.030g/ml，故样品质量为17.5 x 1.030 = 18g巴氏瓶的刻度共10大格（0-10%），每大格容积为0.2ml，脂肪的平均比重为 0.9,其脂肪质 量为0.2 x