关于氨基酸的定量分析

1、关于氨基酸的关于氨基酸的定量分析定量分析03化学化学3班班杨曦杨曦03081095氨基酸的分析方法氨基酸的分析方法化学分析法化学分析法甲醛滴定法甲醛滴定法 甲醛滴定法用于氨基氮的甲醛滴定法用于氨基氮的测定测定, 可以测出样品中总氨基酸可以测出样品中总氨基酸的含量的含量,其原理是在中性或弱碱其原理是在中性或弱碱性水溶液中性水溶液中,氨基酸的氨基酸的氨基与醛类反应生成氨基与醛类反应生成Schiff碱碱:氨基酸与甲醛反应生成亚氨基酸与甲醛反应生成亚甲基亚氨基衍生物甲基亚氨基衍生物 亚甲基甲氨基衍生物用碱滴定亚甲基甲氨基衍生物用碱滴定,从而得从而得到样品中总氨基酸的含量。到样品中总氨基酸的含量。 但是

2、，甲醛法准确度差但是，甲醛法准确度差,终点较难掌握。终点较难掌握。 我们还学过凯氏定氮法，测定样品中我们还学过凯氏定氮法，测定样品中总氮的含量。虽然准确度高总氮的含量。虽然准确度高,但操作步骤但操作步骤复杂复杂,试剂耗量多试剂耗量多,测定周期长。测定周期长。RCCOONH3HHCHOOHRCCOONHCH2 茚三酮是一种能使氨基酸生成在可见光区茚三酮是一种能使氨基酸生成在可见光区有吸收的衍生试剂。该方法的基本原理是有吸收的衍生试剂。该方法的基本原理是经阳离子交换柱分离出的氨基酸与茚三酮经阳离子交换柱分离出的氨基酸与茚三酮混合混合,经加热反应后经加热反应后,一级胺与之生成蓝紫一级胺与之生成蓝紫色

3、化合物色化合物,二级胺与之生成黄色化合物。两二级胺与之生成黄色化合物。两种衍生物使用双通道紫外检测器同步检测种衍生物使用双通道紫外检测器同步检测,检测波长分别为检测波长分别为570nm 和和436nm。CCCOHOHO茚三酮分光光度法分光光度法茚三酮法茚三酮法(nin - hydrin) :亮黄色化合物CCCOHOHCHRH3NCCCOHHCO2NH3COOHRCHOHCCCNOOOOOOCCCOHOHOOCCCHOOCCCNOO紫色化合物衍生反应 溶液的pH pH5 - pH6 的弱酸性130 茚三酮衍生显色反应的灵敏度可达茚三酮衍生显色反应的灵敏度可达2 10 - 105 10 - 10m

4、ol/ L ,衍生衍生物稳定性较好。衍生剂能同时与一物稳定性较好。衍生剂能同时与一级和二级氨基酸反应并同步检测级和二级氨基酸反应并同步检测 但是，衍生反应条件要求较高但是，衍生反应条件要求较高,需附需附设加温衍生装置设加温衍生装置,仪器造价高并专一仪器造价高并专一性强。分析时间长性强。分析时间长,分析成本高分析成本高,工作工作效率低。效率低。羊毛水解液中氨基酸含量的测定羊毛水解液中氨基酸含量的测定氨基酸总的含量可以氨基酸总的含量可以用甲醛滴定法用甲醛滴定法 NH2 与甲醛结合与甲醛结合,其其碱性消失。这样就可以碱性消失。这样就可以用碱来滴定用碱来滴定COOH 基基,并用间接的方法测定氨并用间接

5、的方法测定氨基酸的含量。基酸的含量。 不同种类的氨基酸需不同种类的氨基酸需要用不同的方法来测要用不同的方法来测定，例如：定，例如：用三硝基苯磺酸法测定赖用三硝基苯磺酸法测定赖氨酸氨酸 L - 胱氨酸含量的测定胱氨酸含量的测定 水解液水解液中和中和沉淀过滤沉淀过滤粗品粗品酸溶酸溶除除Fe等杂等杂质质脱色脱色中和中和沉淀过滤沉淀过滤干燥干燥精制品。精制品。 溴能将胱氨酸氧化成溴能将胱氨酸氧化成- 氨基氨基- 磺基磺基- 丙酸丙酸,过量的溴又将碘化钾中碘过量的溴又将碘化钾中碘离子氧化成游离碘离子氧化成游离碘,用碘量用碘量法测定碘的量法测定碘的量,从而可进行从而可进行L - 胱氨酸的间接测定。胱氨酸的

6、间接测定。HO2S CH2 CHNH2 COOHCCOOHH2NH2CHSSCH2CHCOOHH2N 氢氧化钠溶液氢氧化钠溶液:10 g/ L ,盐酸盐酸,碘化钾溶碘化钾溶液液:450 g/ L , 用时配制用时配制,溴液溴液: C(Br2) = 0.1 mol/ L ,称取称取溴酸钾溴酸钾3 g , 溴化钾溴化钾15 g ,加水溶解成加水溶解成1 000 mL ,置于棕置于棕色瓶中保存，色瓶中保存， 淀粉溶液淀粉溶液:5 g/ L , 新鲜配制新鲜配制,硫代硫酸钠标准滴定溶液硫代硫酸钠标准滴定溶液: C(Na2S2O3) = 0.1 mol/ L 。KBrO3 + 5KBr + 6HCl 3

7、Br2 + 6KCl + 3H2O S CH2 CHNH2 COOH 5Br2 + + 6H2O S CH2 CHNH2 COOH2HO2S CH2 CHNH2 COOH+ 10HBrBr2 + 2KI I2 + 2KBrI2 + 2Na2S2O3 2NaI +Na2S4O6 称取干燥后的试样称取干燥后的试样0.13 g (精确至精确至0.000 2 g) ,加氢氧化钠溶液加氢氧化钠溶液10 mL 移入移入100 mL 容容量瓶中量瓶中,加水稀释至刻度加水稀释至刻度,摇匀。摇匀。 吸取该溶液吸取该溶液25.0 mL于碘量瓶中于碘量瓶中,加溴液加溴液50.00 mL ,加盐酸加盐酸10 mL ,

8、立即加盖立即加盖,摇匀，摇匀，于暗处放置于暗处放置10 min 再在冰浴中冷却再在冰浴中冷却3 min 以上以上,加碘化钾加碘化钾5mL ,立即用硫代硫酸钠标准滴定溶液滴定至淡立即用硫代硫酸钠标准滴定溶液滴定至淡黄色黄色,加入淀粉溶液加入淀粉溶液2 mL ,继续滴定至蓝色继续滴定至蓝色消失为终点消失为终点,同时做空白试验。同时做空白试验。12()0.0240310025100vvcxm V1 空白实验消耗硫代硫酸钠标准滴空白实验消耗硫代硫酸钠标准滴 定溶液的体积定溶液的体积/ mL ; V2 试样滴定消耗硫代硫酸钠标准滴定溶液试样滴定消耗硫代硫酸钠标准滴定溶液 的体积的体积/ mL ; C 硫代硫酸钠标准滴定溶液的浓度硫代硫酸钠标准滴定溶液的浓度/ mo