血脂及血浆脂蛋白检验

1、第十章第十章 血脂及血浆脂蛋白检验血脂及血浆脂蛋白检验第一节概述第一节概述第二节血脂、脂蛋白及载脂蛋白测定第二节血脂、脂蛋白及载脂蛋白测定n本章内容概要本章内容概要n教学目标和要求教学目标和要求1 1、掌握掌握脂蛋白的分类及其主要功能；高脂血症的分型及血液脂蛋白的分类及其主要功能；高脂血症的分型及血液生化特点；血脂、脂蛋白和载脂蛋白测定的原理和方法。生化特点；血脂、脂蛋白和载脂蛋白测定的原理和方法。2 2、熟悉熟悉各种脂蛋白的组成与结构要点；异常脂蛋白血症的原各种脂蛋白的组成与结构要点；异常脂蛋白血症的原因；血脂检查前应注意的问题。因；血脂检查前应注意的问题。3 3、了解了解载脂蛋白的种类与生

2、理功能；各个检验项目的临床意载脂蛋白的种类与生理功能；各个检验项目的临床意义和应用。义和应用。动脉粥样硬化动脉粥样硬化(atherosclerosis, AS) (atherosclerosis, AS) 冠心病急性事件冠心病急性事件（不稳定型心绞痛、急性心肌梗死和冠脉猝死）（不稳定型心绞痛、急性心肌梗死和冠脉猝死） n血脂、血浆脂蛋白及载脂蛋白检验的重要性血脂、血浆脂蛋白及载脂蛋白检验的重要性 第一节第一节 概述概述n血脂及血浆脂蛋白血脂及血浆脂蛋白n脂蛋白代谢紊乱脂蛋白代谢紊乱一、血脂及血浆脂蛋白一、血脂及血浆脂蛋白 血脂：是血浆中的中性脂肪（血脂：是血浆中的中性脂肪（甘油三酯和胆甘油三酯

3、和胆固醇固醇）和类脂（磷脂、糖脂、固醇、类固醇）的）和类脂（磷脂、糖脂、固醇、类固醇）的总称总称 n定义：定义： 脂蛋白：脂类难溶于水，正常血浆脂类物质脂蛋白：脂类难溶于水，正常血浆脂类物质与蛋白质结合成脂蛋白的形式存在。与蛋白质结合成脂蛋白的形式存在。 （一）血浆脂蛋白的分类（一）血浆脂蛋白的分类超速离心法：超速离心法：根据脂蛋白在一定密度的介质中漂浮速率不根据脂蛋白在一定密度的介质中漂浮速率不同而进行分离的方法。同而进行分离的方法。 电泳法：电泳法：根据不同密度的脂蛋白所含蛋白质的表面电荷不同，根据不同密度的脂蛋白所含蛋白质的表面电荷不同，利用电泳将其分离，并与血浆蛋白质的迁移率比较以判断

4、其部位利用电泳将其分离，并与血浆蛋白质的迁移率比较以判断其部位。 分离方法分离方法u超速离心法：超速离心法：乳糜微粒乳糜微粒（chylomicron,CMchylomicron,CM）极低密度脂蛋白极低密度脂蛋白（very low density lipoprotein,VLDLvery low density lipoprotein,VLDL）中间密度脂蛋白（中间密度脂蛋白（intermediate density lipoprotein,IDLintermediate density lipoprotein,IDL）低密度脂蛋白低密度脂蛋白（low density lipoproteinl

5、ow density lipoprotein，LDLLDL）高密度脂蛋白高密度脂蛋白（high density lipoproteinhigh density lipoprotein，HDLHDL脂蛋白（脂蛋白（a a）lipoprotein (a),Lp(alipoprotein (a),Lp(a) ) 乳糜微粒、前乳糜微粒、前- - 、 和和 四条脂蛋白区带四条脂蛋白区带 u电泳法电泳法 （二）血浆脂蛋白的组成与结构（二）血浆脂蛋白的组成与结构u组成：组成： 蛋白质、甘油三酯、磷脂（蛋白质、甘油三酯、磷脂（phospholipidphospholipid，PLPL）、游离胆固醇（）、游离胆

6、固醇（free free cholesterol cholesterol ，FCFC）及胆固醇酯（）及胆固醇酯（cholesterol estercholesterol ester，CECE）等成分组成。）等成分组成。u结构：结构： 大致为球形颗粒，由两大部分组成，即疏水性的内核和亲水性的大致为球形颗粒，由两大部分组成，即疏水性的内核和亲水性的外壳（图外壳（图10-110-1）。内核由不同量的）。内核由不同量的CECE与与TGTG组成，表层由载脂蛋白、组成，表层由载脂蛋白、PLPL及及FCFC组成，组成，FCFC及及PLPL的极性基团向外露在血浆中，载脂蛋白是兼性化合的极性基团向外露在血浆中，

7、载脂蛋白是兼性化合物，它的疏水部分掩蔽在脂蛋白中，而亲水部分突出于脂蛋白颗粒的物，它的疏水部分掩蔽在脂蛋白中，而亲水部分突出于脂蛋白颗粒的表面。表面。 （三）载脂蛋白（三）载脂蛋白脂蛋白的蛋白部分称为载脂蛋白脂蛋白的蛋白部分称为载脂蛋白(apolipoprotein(apolipoprotein，ApoApo) ) u定义：定义：u种类：种类： 按按19721972年年AlaupovicAlaupovic建议的命名方法，用英文字母建议的命名方法，用英文字母顺序编码，分为顺序编码，分为ApoAApoA、B B、C C、D D、E E、F F、G G、H H、J J等。由等。由于氨基酸组成的差异，

8、每一型又可分若干亚型。于氨基酸组成的差异，每一型又可分若干亚型。 u功能：功能： 与脂质的亲和作用而使脂质溶于水性介质中。与脂质的亲和作用而使脂质溶于水性介质中。运转胆固醇和甘油三酯。运转胆固醇和甘油三酯。作为脂蛋白外壳的结构成分，与脂蛋白外生物信息相联系。作为脂蛋白外壳的结构成分，与脂蛋白外生物信息相联系。以配体的形式作为脂蛋白与特异受体的连接物。以配体的形式作为脂蛋白与特异受体的连接物。激活某些与血浆脂蛋白代谢有关的酶类激活某些与血浆脂蛋白代谢有关的酶类 u分布及特点：略分布及特点：略 （四）脂蛋白受体（四）脂蛋白受体u定义：定义： 脂蛋白受体是一类位于细胞膜上的糖蛋白。它能以高脂蛋白受体

9、是一类位于细胞膜上的糖蛋白。它能以高度的亲和方式与相应的脂蛋白配体作用，从而介导细胞对度的亲和方式与相应的脂蛋白配体作用，从而介导细胞对脂蛋白的摄取与代谢，进一步调节细胞外脂蛋白的水平。脂蛋白的摄取与代谢，进一步调节细胞外脂蛋白的水平。 u脂蛋白与脂蛋白受体的作用：脂蛋白与脂蛋白受体的作用： 不仅是运送脂蛋白至细胞所必需，也是从血和外周组织中有不仅是运送脂蛋白至细胞所必需，也是从血和外周组织中有效清除具有潜在致动脉粥样硬化的脂蛋白所必需的。效清除具有潜在致动脉粥样硬化的脂蛋白所必需的。 u种类：种类： 已有很多种，主要有已有很多种，主要有LDLLDL受体、残粒受体（受体、残粒受体（remnan

10、t receptorremnant receptor）及）及清道夫受体清道夫受体（scavenger receptorscavenger receptor）。）。LDLLDL受体：受体： 不仅能识别不仅能识别ApoB100ApoB100，也可识别，也可识别ApoEApoE，在细胞结合、摄取和，在细胞结合、摄取和降解降解LDLLDL及其它含及其它含ApoB100ApoB100的脂蛋白过程中起中介作用，对维持的脂蛋白过程中起中介作用，对维持细胞和全身胆固醇平衡起重要作用。细胞和全身胆固醇平衡起重要作用。 u各种脂蛋白受体功能各种脂蛋白受体功能残粒受体：残粒受体： 能识别能识别ApoEApoE，是清

11、除血液循环中，是清除血液循环中CMCM残粒和残粒和-VLDL-VLDL残粒的主残粒的主要受体，它也能结合含要受体，它也能结合含ApoEApoE的的HDLHDL。 清道夫受体：清道夫受体： 主要存在于巨噬细胞表面主要存在于巨噬细胞表面, ,介导修饰介导修饰LDL(LDL(包括氧化包括氧化LDLLDL和和 - -VLDL)VLDL)从血液循环中清除。从血液循环中清除。 （五）胆固醇酯转运蛋白（五）胆固醇酯转运蛋白u定义：定义： 血浆中脂蛋白部分含有一种特殊的转运蛋白，能促进血浆各脂蛋白血浆中脂蛋白部分含有一种特殊的转运蛋白，能促进血浆各脂蛋白间胆固醇酯、甘油三酯和磷脂的单向或双向转运和交换，这类特

12、殊转运间胆固醇酯、甘油三酯和磷脂的单向或双向转运和交换，这类特殊转运蛋白称脂质转运蛋白（蛋白称脂质转运蛋白（lipid transfer protein,LTPlipid transfer protein,LTP）。）。 u组成：组成：胆固醇酯转运蛋白（胆固醇酯转运蛋白（cholesterol ester transfer protein,CETPcholesterol ester transfer protein,CETP）磷脂转运蛋白（磷脂转运蛋白（phospholipid transfer protein,PTPphospholipid transfer protein,PTP）甘油三酯

13、转运蛋白（甘油三酯转运蛋白（triglyceride transfer protein,TTPtriglyceride transfer protein,TTP）( (六六) )血浆脂蛋白代谢血浆脂蛋白代谢u分类：分类：外源性代谢途径：外源性代谢途径：指食物中摄入的胆固醇和甘油三酯在指食物中摄入的胆固醇和甘油三酯在小肠中合成小肠中合成CMCM及及CMCM代谢的过程代谢的过程 。内源性代谢途径：内源性代谢途径：指指肝脏合成肝脏合成VLDLVLDL，然后转变为，然后转变为IDLIDL和和LDLLDL，并被肝脏或其它器官代谢的过程，并被肝脏或其它器官代谢的过程 胆固醇的逆向转运：胆固醇的逆向转运：H

14、DLHDL参与将胆固醇从外周组织运输到肝脏的过程。参与将胆固醇从外周组织运输到肝脏的过程。 二、脂蛋白代谢紊乱二、脂蛋白代谢紊乱（一）高脂蛋白血症（一）高脂蛋白血症u定义：定义： 高脂血症（高脂血症（hyperlipidemiahyperlipidemia）是指血浆中胆固醇或）是指血浆中胆固醇或/ / 和甘油三和甘油三酯水平升高。血浆脂类以血浆脂蛋白形式存在，因此，高脂血症一酯水平升高。血浆脂类以血浆脂蛋白形式存在，因此，高脂血症一定时高脂蛋白血症（定时高脂蛋白血症（hyperlipoproteinemiahyperlipoproteinemia）。）。 近年来，已逐渐认识到血浆中近年来，已逐

15、渐认识到血浆中HDLHDL降低也是一种脂代谢紊乱。降低也是一种脂代谢紊乱。 u分类：分类： 1 1表型分型法表型分型法 主要是基于各种血浆脂蛋白升高的程度不同而进行分型。主要是基于各种血浆脂蛋白升高的程度不同而进行分型。该分类法不包括病因学，故称表型分类。该分类法不包括病因学，故称表型分类。 （1 1）型高脂蛋白血症：又称家族性高乳糜微粒血症型高脂蛋白血症：又称家族性高乳糜微粒血症 （2 2）aa型高脂白血症型高脂白血症 （3 3）bb型高脂蛋白血症：型高脂蛋白血症： （4 4）型高脂蛋白血症型高脂蛋白血症 （5 5）型高脂蛋白血症型高脂蛋白血症 （6 6）型高脂蛋白血症型高脂蛋白血症 2 2

16、按是否继发于全身性疾病分类按是否继发于全身性疾病分类 继发性高脂血症：继发性高脂血症： 原发性：原发性： 继发性者由一些全身性疾病引起血脂异常，如糖尿病、肾病综合征、继发性者由一些全身性疾病引起血脂异常，如糖尿病、肾病综合征、肾功能衰竭、甲状腺功能减退症、肝胆疾病、系统性红斑狼疮、肥胖症、肾功能衰竭、甲状腺功能减退症、肝胆疾病、系统性红斑狼疮、肥胖症、饮酒等。此外，某些药物如饮酒等。此外，某些药物如-受体阻断剂、降压药等也可引起血脂异受体阻断剂、降压药等也可引起血脂异常。常。 在排除继发性高脂血症后，可诊断为原发性。已知部分原发性高在排除继发性高脂血症后，可诊断为原发性。已知部分原发性高脂血症

17、由先天性基因缺陷所致脂血症由先天性基因缺陷所致 3 3高脂血症的基因分型法高脂血症的基因分型法 表表10-5 10-5 家族性高脂血症的临床特征家族性高脂血症的临床特征常常 用用 名名基因缺陷基因缺陷临床特征临床特征表型分类表型分类家族性高胆固醇血症家族性高胆固醇血症L LDLL LDL受体缺陷受体缺陷以胆固醇升高为主，可伴轻度甘油三酯升以胆固醇升高为主，可伴轻度甘油三酯升高，高，LDLLDL明显增加，可有肌腱黄色瘤，多有明显增加，可有肌腱黄色瘤，多有冠心病和高脂血症家族史。冠心病和高脂血症家族史。aabb家族性家族性ApoApo B B100100缺陷症缺陷症 ApoBApoB100100缺

18、陷缺陷同上同上同上同上家族性混合型高脂血症家族性混合型高脂血症不清楚不清楚胆固醇和甘油三酯均升高，胆固醇和甘油三酯均升高，VLDLVLDL和和LDLLDL都都增加，无黄色瘤，家族成员中有不同型高增加，无黄色瘤，家族成员中有不同型高脂蛋白血症，有冠心病家族史。脂蛋白血症，有冠心病家族史。bb家族性异常家族性异常脂蛋白血脂蛋白血症症ApoEApoE异常异常胆固醇和甘油三酯均升高，乳糜微粒和胆固醇和甘油三酯均升高，乳糜微粒和VLDLVLDL残粒以及残粒以及IDLIDL明显增加，可有掌皱黄明显增加，可有掌皱黄色瘤，多为色瘤，多为ApoApo E2 E2（2/22/2）表型。）表型。家族性高甘油三酯血症

19、家族性高甘油三酯血症不清楚不清楚以甘油三酯升高为主，可有轻度胆固醇升以甘油三酯升高为主，可有轻度胆固醇升高，高，VLDLVLDL明显增加。明显增加。 (二二)低脂蛋白血症低脂蛋白血症1 1家族性低家族性低-脂蛋白血症脂蛋白血症2 2-脂蛋白缺乏血症脂蛋白缺乏血症3 3家族性低家族性低-脂蛋白血症脂蛋白血症4 4 TangierTangier病病第二节第二节 血脂、脂蛋白及载脂蛋白测定血脂、脂蛋白及载脂蛋白测定 目前临床上开展的血脂测定项目包括目前临床上开展的血脂测定项目包括TCTC、TGTG、HDLHDL及其及其亚类胆固醇、亚类胆固醇、LDL-CLDL-C、LpLp（a a）以及部分载脂蛋白如

20、）以及部分载脂蛋白如ApoAIApoAI、ApoBApoB等。其中等。其中TCTC、TGTG、HDL-CHDL-C、LDL-CLDL-C测定是血脂测定的四个测定是血脂测定的四个基本指标。血浆基本指标。血浆44冰箱中过夜观察其分层现象及清澈度可冰箱中过夜观察其分层现象及清澈度可初步估计各种脂蛋白的变化状况。血浆脂蛋白电泳结合初步估计各种脂蛋白的变化状况。血浆脂蛋白电泳结合TCTC、TGTG水平有助于高脂血症分型。水平有助于高脂血症分型。n概况：概况：n血脂测定标准化：血脂测定标准化：血脂分析前变异来源于：血脂分析前变异来源于：生物因素，如年龄、性别、种族等因素的个体差异。生物因素，如年龄、性别、

21、种族等因素的个体差异。生活方式，包括饮食习惯、吸烟、运动及应激等。生活方式，包括饮食习惯、吸烟、运动及应激等。临床方面包括疾病或药物引起的脂代谢改变。临床方面包括疾病或药物引起的脂代谢改变。血标本采集与处理方面血标本采集与处理方面 准确测定应从分析前的准备开始，包括受试者的准备，标本准确测定应从分析前的准备开始，包括受试者的准备，标本采集，合格的试剂、校准物的选用，检测方法选择。采集，合格的试剂、校准物的选用，检测方法选择。 方法学上应该采用美国疾病控制中心（方法学上应该采用美国疾病控制中心（CDCCDC）或中华医学会）或中华医学会检验分会推荐的操作方法。检验分会推荐的操作方法。 一、血清（浆

22、）静置试验一、血清（浆）静置试验 将患者空腹将患者空腹12h12h后采集静脉血分离出血清置后采集静脉血分离出血清置44冰箱中冰箱中过夜，然后观察其分层现象及清澈度。过夜，然后观察其分层现象及清澈度。 空腹血清混浊，表示空腹血清混浊，表示TGTG升高，可放在升高，可放在44冰箱过夜后进一步观察，如果冰箱过夜后进一步观察，如果上层出现奶油样且下层清澈，表明上层出现奶油样且下层清澈，表明CMCM升高，升高，VLDLVLDL正常，可能为正常，可能为I I型高脂血型高脂血症。如果上层出现奶油样且下层混浊，表明症。如果上层出现奶油样且下层混浊，表明CMCM及及VLDLVLDL均升高，可能是均升高，可能是V

23、 V型。型。空腹血清混浊，空腹血清混浊，44冰箱中过夜后仍为均匀混浊，表明冰箱中过夜后仍为均匀混浊，表明VLDLVLDL升高，此时应升高，此时应进一步测定进一步测定TCTC， TCTC升高者可能是升高者可能是IIIIII或或IIbIIb型而型而TCTC正常者则可能为正常者则可能为型。型。IIaIIa型高脂血症血清也清澈透明。型高脂血症血清也清澈透明。 正常空腹血清应清澈透明。正常空腹血清应清澈透明。 二、血清（浆）总胆固醇测定二、血清（浆）总胆固醇测定化学法化学法酶法酶法（一）化学测定法（一）化学测定法 化学测定法通常需化学测定法通常需抽提纯化抽提纯化。显色剂主要有两类：。显色剂主要有两类：醋

24、酸醋酸- -醋酐醋酐- -硫酸硫酸高铁硫酸。高铁硫酸。 这些显色反应须用强酸试剂，干扰因素多，准确这些显色反应须用强酸试剂，干扰因素多，准确测定有赖于从标本中抽提、皂化、纯化过程，因而操测定有赖于从标本中抽提、皂化、纯化过程，因而操作较繁，不适于分析大批量标本，且不适于自动分析。作较繁，不适于分析大批量标本，且不适于自动分析。 n特点：特点： 1 1Liberman-BurchardLiberman-Burchard反应反应 18851885年年LibermanLiberman发现胆固醇在硫酸、醋酐溶液中显色，发现胆固醇在硫酸、醋酐溶液中显色，18901890年年BurchardBurchar

25、d用此反应测定胆固醇称为用此反应测定胆固醇称为L-BL-B反应。反应。 1953 1953年年ZakZak提出用硫酸、醋酸和提出用硫酸、醋酸和Fe3+Fe3+等与胆固醇作用生等与胆固醇作用生成紫红色化合物来测定胆固醇，称为成紫红色化合物来测定胆固醇，称为ZakZak反应。反应。 2 2ZakZak反应反应( (二二) )酶测定法酶测定法n特点：特点： 常规测定中现已广泛应用酶法，酶法具有特异性好，精密常规测定中现已广泛应用酶法，酶法具有特异性好，精密度和灵敏度都能很好地满足临床实验室的要求，既可以手工操度和灵敏度都能很好地满足临床实验室的要求，既可以手工操作，也适合自动分析，但酶法测定中出现了

26、不同程度的作，也适合自动分析，但酶法测定中出现了不同程度的基质效基质效应。应。 采用酶反应原理的干化学法颇为实用，其缺点是价格高，采用酶反应原理的干化学法颇为实用，其缺点是价格高，精密度差。胆固醇的酶测定法始于精密度差。胆固醇的酶测定法始于7070年代。由于操作简便，试年代。由于操作简便，试剂无腐蚀性，特别适用于自动生化分析，剂无腐蚀性，特别适用于自动生化分析，目前已成为测定胆固目前已成为测定胆固醇的主要方法。醇的主要方法。 CEH-COD-PAPCEH-COD-PAP法法 n原理：原理： CECEH H2 2O FCO FCFFAFFA FC FCO O2 2 4-4-胆甾烯酮胆甾烯酮H H

27、2 2O O2 2 H H2 2O O2 24-AAP4-AAP酚酚 醌亚胺醌亚胺H H2 2O O CEH COD POD 胆固醇酶测定法的试剂中，除了上述三种酶、酚和胆固醇酶测定法的试剂中，除了上述三种酶、酚和4-4-氨基安替比氨基安替比林外，还有维持林外，还有维持pHpH恒定的缓冲液、胆酸钠、表面活性剂以及稳定剂等。恒定的缓冲液、胆酸钠、表面活性剂以及稳定剂等。胆酸钠是为了提高胆固醇酯酶的活性，表面活性剂的作用是促进胆固胆酸钠是为了提高胆固醇酯酶的活性，表面活性剂的作用是促进胆固醇从脂蛋白中释放出来醇从脂蛋白中释放出来 n评价：评价：主要缺点是：主要缺点是：优点优点：本法灵敏度高、准确度

28、高、精密度好，线性范围宽。：本法灵敏度高、准确度高、精密度好，线性范围宽。某些胆固醇酯酶对胆固醇酯的水解不完全，不能用纯胆固醇结晶以有机某些胆固醇酯酶对胆固醇酯的水解不完全，不能用纯胆固醇结晶以有机溶剂配制的溶液作为溶剂配制的溶液作为TCTC分析的校准液，而应以准确定值的血清作为标准，分析的校准液，而应以准确定值的血清作为标准，此校准液（品）相当于三级标准。此校准液（品）相当于三级标准。 表面活性剂，如吐温表面活性剂，如吐温-40-40可以干扰胆固醇酯酶的作用，而聚乙烯醇可以干扰胆固醇酯酶的作用，而聚乙烯醇60006000可使结果提高可使结果提高1 12 2； 本法具有氧化酶反应途径的共同缺陷

29、，易受到一些还原性物质如尿酸、本法具有氧化酶反应途径的共同缺陷，易受到一些还原性物质如尿酸、胆红素、维生素胆红素、维生素C C和谷胱甘肽等的干扰。和谷胱甘肽等的干扰。 【参考值【参考值】 血清总胆固醇合适范围：血清总胆固醇合适范围：5.20mmol/L (200mg/dl)5.20mmol/L (200mg/dl)，边缘升高：边缘升高：5.235.235.69mmol/L(2015.69mmol/L(201219mg/dl)219mg/dl)，升高：升高：5.72mmol/L (220mg/dl)5.72mmol/L (220mg/dl)。u影响影响TC水平的因素水平的因素 年龄与性别；年龄与

30、性别；长期的高胆固醇、高饱和脂肪酸和高热量饮食可使长期的高胆固醇、高饱和脂肪酸和高热量饮食可使TCTC增高；增高；遗传因素；遗传因素； 其它：如缺少运动、脑力劳动、精神紧张等可能使其它：如缺少运动、脑力劳动、精神紧张等可能使TCTC升高。升高。 TC TC除了作为高胆固醇血症的诊断指标之外，不能作为其它任何疾病的诊除了作为高胆固醇血症的诊断指标之外，不能作为其它任何疾病的诊断指标，对于动脉粥样硬化和冠心病而言，断指标，对于动脉粥样硬化和冠心病而言，TCTC是一个明确的危险因子，与冠是一个明确的危险因子，与冠心病的发病率呈正相关。心病的发病率呈正相关。【临床意义【临床意义】u高高TCTC血症：血

31、症：原发和继发原发和继发 u低低TCTC血症：血症：原发和继发原发和继发 三、血清（浆）甘油三酯测定三、血清（浆）甘油三酯测定化学法化学法酶法酶法n基本操作：基本操作：（一）化学测定法（一）化学测定法1 1、抽提抽提：关键是选用合适的抽提剂，既要使甘油三酯提取完全，又要消除磷关键是选用合适的抽提剂，既要使甘油三酯提取完全，又要消除磷脂、游离甘油和葡萄糖等干扰物质的影响。脂、游离甘油和葡萄糖等干扰物质的影响。 2 2、皂化皂化：甘油三酯水解生成甘油，这一步大都采用甘油三酯水解生成甘油，这一步大都采用KOHKOH作皂化剂作皂化剂 3 3、氧化氧化：过碘酸在酸性溶液中将甘油氧化成甲醛和甲酸过碘酸在酸

32、性溶液中将甘油氧化成甲醛和甲酸 4 4、显色显色：甲醛的定量主要有两种方法：甲醛的定量主要有两种方法：甲醛与变色酸甲醛与变色酸(4，5-二羟二羟-2，7-萘二磺酸萘二磺酸)在硫酸溶液中加热生成紫色化合物在硫酸溶液中加热生成紫色化合物 甲醛与乙酰丙酮在铵离子甲醛与乙酰丙酮在铵离子(NH4+)存在下生成黄色的二乙酰二氢二甲基吡啶存在下生成黄色的二乙酰二氢二甲基吡啶 ( (二二) )酶测定法酶测定法1 1、磷酸甘油氧化酶法（、磷酸甘油氧化酶法（GPO-PAPGPO-PAP法）法）n 原理原理 TG + 3H2O LPL Glycerol + 3RCOOH Glycerol + ATP GK+Mg2+

33、 G-3-P + ADP G-3-P + O2 GPO 磷酸二羟丙酮磷酸二羟丙酮 + H2O2 2 H2O2 + Phenol + 4-Aminoantipyrine POD Chromogen + 4H2On 计算计算 TG（mmol/L）=A500nm测定测定/A500nm校准校准 校准血清校准血清TG浓度浓度（mmol/L）n去除去除FGFG干扰可用下列方法：干扰可用下列方法：1 1、外空白法：同时用不含、外空白法：同时用不含LPLLPL的酶试剂测定的酶试剂测定FG FG 作空白。作空白。2 2、内空白法：又称两步法或双试剂法、内空白法：又称两步法或双试剂法将将LPLLPL和和4-AAP

34、4-AAP组成试剂组成试剂2 2，其余部分为试剂，其余部分为试剂1 1。此法目。此法目前为中华医学会检验分会推荐方法。前为中华医学会检验分会推荐方法。 2 2乳酸脱氢酶法乳酸脱氢酶法 n 原理：原理： TG + 3H2O LPL Glycerol + 3RCOOH Glycerol + ATP GK+Mg2+ G-3-P + ADP ADP + 磷酸烯醇式丙酮酸磷酸烯醇式丙酮酸 丙酮酸激酶丙酮酸激酶 丙酮酸丙酮酸 + ATP丙酮酸丙酮酸+NADH LDH NAD+ + 乳酸乳酸 由于反应消耗由于反应消耗NADHNADH，故可利用，故可利用NADHNADH在在340nm340nm吸光度降低来吸光

35、度降低来测定甘油三脂的浓度测定甘油三脂的浓度。n评价：评价： 本法结果准确，但灵敏度较低，试剂本法结果准确，但灵敏度较低，试剂也不太稳定。由于血清本身存在游离甘油也不太稳定。由于血清本身存在游离甘油和丙酮酸等干扰物质，所以测定时除了要和丙酮酸等干扰物质，所以测定时除了要做试剂空白外，还要做标本空白做试剂空白外，还要做标本空白 3 3甘油氧化酶法甘油氧化酶法 第一步：第一步： FG + OFG + O2 2 甘油氧化酶甘油氧化酶 甘油醛甘油醛+ H+ H2 2O O2 2 H H2 2O O2 2 + EMAE + EMAE PODPOD 无色物质无色物质消除游离甘油的影响，消除游离甘油的影响，

36、3-5min3-5min后进行第二步反应：后进行第二步反应：TG + 3HTG + 3H2 2O O LPLLPL Glycerol + 3RCOOH Glycerol + 3RCOOHFG + OFG + O2 2 甘油氧化酶甘油氧化酶 甘油醛甘油醛+ H+ H2 2O O2 2H H2 2O O2 2 +4-AAP+ EMAE +4-AAP+ EMAE PODPOD 有色化合物有色化合物注：注：EMAEEMAE作用与酚相似，是还原剂，但灵敏度比酚高。作用与酚相似，是还原剂，但灵敏度比酚高。n原理原理：该法分两步完成。该法分两步完成。 血清甘油三酯一般随年龄增加而升高，体重超过标准者往血清甘

37、油三酯一般随年龄增加而升高，体重超过标准者往往偏高。往偏高。 合适范围：合适范围：1.70mmol/L(150mg/dl)1.70mmol/L(150mg/dl)， 升高：升高：1.70mmol/L (150mg/dl)1.70mmol/L (150mg/dl)。 【参考值【参考值】【临床意义【临床意义】 原发性高原发性高TGTG血症多有遗传因素，包括家族性高血症多有遗传因素，包括家族性高TGTG血症血症与家族性型高脂（蛋白）血症等。继发性高与家族性型高脂（蛋白）血症等。继发性高TGTG血症见于糖血症见于糖尿病、糖原累积病、甲状腺机能减退、肾病综合征、妊娠、尿病、糖原累积病、甲状腺机能减退、肾

38、病综合征、妊娠、口服避孕药、酗酒等。大量前瞻性的研究证实，富含口服避孕药、酗酒等。大量前瞻性的研究证实，富含TGTG的的脂蛋白是脂蛋白是CHDCHD的独立的危险因子，的独立的危险因子，TGTG增加表明患者存在代增加表明患者存在代谢综合症，需进行治疗。甘油三酯降低比较少见，甲状腺谢综合症，需进行治疗。甘油三酯降低比较少见，甲状腺功能亢进、肾上腺皮质功能减退和肝功能严重损伤时可以功能亢进、肾上腺皮质功能减退和肝功能严重损伤时可以见到甘油三酯降低见到甘油三酯降低 四、血清（浆）脂蛋白测定四、血清（浆）脂蛋白测定( (一一) )血清脂蛋白电泳血清脂蛋白电泳 脂蛋白电泳分析可分为预染法和电泳后染色法两大

39、类。脂蛋白电泳分析可分为预染法和电泳后染色法两大类。 预染法预染法的操作比较简单，分离效果直观。其操作过程是先的操作比较简单，分离效果直观。其操作过程是先将待测血清和苏丹黑染料按一定比例混合进行预染处理，离心后将待测血清和苏丹黑染料按一定比例混合进行预染处理，离心后取上清液进行电泳分析。取上清液进行电泳分析。 电泳后染色法电泳后染色法为用电泳方法先将血浆脂蛋白各成份分开，为用电泳方法先将血浆脂蛋白各成份分开，再用苏丹黑或油红再用苏丹黑或油红O O进行染色。进行染色。临床上比较常用的是预染法电泳。临床上比较常用的是预染法电泳。 血清脂蛋白琼脂糖凝胶电泳：血清脂蛋白琼脂糖凝胶电泳：-脂蛋白：脂蛋白

40、：0.30-0.400.30-0.40，前前-脂蛋白：脂蛋白：0.13-0.250.13-0.25，-脂蛋白：脂蛋白：0.50-0.600.50-0.60，乳糜微粒：阴性。乳糜微粒：阴性。【参考值【参考值】（二）高密度脂蛋白测定（二）高密度脂蛋白测定 常以测定常以测定HDL-CHDL-C含量代表含量代表HDLHDL水平。水平。 n参考方法参考方法: : 超速离心分离超速离心分离HDLHDL，然后用化学法（，然后用化学法（ALKBALKB法）或法）或酶法测定其胆固醇含量，此法需特殊设备，而且不易酶法测定其胆固醇含量，此法需特殊设备，而且不易常握。常握。 n常规方法常规方法: : 1磷钨酸磷钨酸-

41、镁法镁法 2HDL直接测定法直接测定法 HDLHDL直接测定法大致分三类，分别是直接测定法大致分三类，分别是: :聚乙二醇聚乙二醇/ /抗体包裹法抗体包裹法酶修饰法酶修饰法选择性抑制法，又称掩蔽法，选择性抑制法，又称掩蔽法， HDL-C合适范围：合适范围：1.04mmol/L (40mg/dl), 0.91mmol/L (35mg/dl)为减低。为减低。【参考值【参考值】【临床意义【临床意义】 流行病学与临床研究证明，流行病学与临床研究证明，HDL-CHDL-C与冠心病发病呈负相关，与冠心病发病呈负相关，HDL-CHDL-C低于低于0.9 mmol0.9 mmol/L /L 是冠心病危险因素。

42、是冠心病危险因素。HDL-CHDL-C大于大于1.55mmol/L1.55mmol/L被认为是冠心病的被认为是冠心病的“负负”危险因素。危险因素。 HDL-CHDL-C下降还下降还多见于脑血管病、糖尿病、肝炎、肝硬化病人。高多见于脑血管病、糖尿病、肝炎、肝硬化病人。高TGTG血症往往血症往往伴以低伴以低HDL-CHDL-C，肥胖者的，肥胖者的HDL-CHDL-C也多偏低。吸烟可使也多偏低。吸烟可使HDL-CHDL-C下降，下降，适量饮酒、长期体力劳动和运动会使适量饮酒、长期体力劳动和运动会使HDL-CHDL-C升高。升高。（二）低密度脂蛋白测定（二）低密度脂蛋白测定1 1FriedewaldF

43、riedewald公式法公式法 LDL-CLDL-CTCTCHDL-CHDL-CTG/5TG/5（以（以mg/dlmg/dl为单位时），或为单位时），或LDL-CLDL-CTCTCHDL-CHDL-CTG/2.2TG/2.2（以（以mmolmmol/L/L为单为单位时）。位时）。 2 2聚乙烯硫酸盐沉淀法聚乙烯硫酸盐沉淀法 本法并非对本法并非对LDL-CLDL-C作直接测定，而作直接测定，而是用聚乙烯硫酸（是用聚乙烯硫酸（PVSPVS）选择性沉淀血清中）选择性沉淀血清中LDLLDL，再以血清，再以血清TCTC减去上清液（含减去上清液（含HDLHDL与与VLDLVLDL）胆固醇即得）胆固醇即得L

44、DL-CLDL-C值。值。 3 3直接测定法直接测定法: :两类两类目前各类方法测定的目前各类方法测定的LDL-CLDL-C值都包括值都包括IDLIDL和和LP(aLP(a) )的的cholchol在内在内 LDL-C LDL-C合适范围：合适范围：3.12mmol/L (120mg/dl)3.12mmol/L (120mg/dl)， 边缘升高：边缘升高：3.153.153.61mmol/L(1213.61mmol/L(121139mg/dl)139mg/dl) 升高：升高：3.64mmol/L (140mg/dl)3.64mmol/L (140mg/dl)。 【参考值【参考值】【临床意义【临床意义】 LDL-C LDL-C增高是动脉粥样硬化发生发展的主要脂类危险因增高是动脉粥样硬化发生发展的主要脂类危险因素